全自动化学发光免疫分析仪在梅毒螺旋体抗体检测中的应用

陈秀英

龙海市第一医院 （福建龙海 363199）

梅毒属于一种传染性较强的慢性性传播疾病，该病的发生与梅毒螺旋体入侵机体所致一系列感染有关；一期梅毒以生殖器官或乳房、唇、舌部硬下疳为主要病理表现，随着病情的不断恶化，患者会出现穿凿性溃疡、组织坏死等不同程度的皮肤黏膜损伤。基于此，给予梅毒患者早期准确诊断，可及时阻止其病情恶化。梅毒感染者血液中含有大量梅毒螺旋体，此类厌氧微生物侵入人体后，机体免疫系统会产生大量针对梅毒螺旋体的抗体；若梅毒螺旋体抗体呈现明显活性，则表示机体梅毒病情较活跃。暗视野显微镜法、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等检测方式虽在梅毒螺旋体抗体检测中有一定应用价值，但暗视野显微镜法在明确物体细微结构方面未显示出突出优势，ELISA的检测结果则较易受到血清样本交叉反应的影响。研究显示，全自动化学发光免疫测定法（chemiluminescence analysis，CLIA）在免疫分析方面具有较高的敏感性[1]，为研究此检测方法在梅毒螺旋体抗体检测中的应用价值，本研究对260例疑似梅毒患者进行CLIA、ELISA及梅毒螺旋体明胶凝集试验（treponema pallidum particle agglutination assay，TPPA）检测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2019年2月至2021年2月于我院接受治疗的260例疑似梅毒患者作为研究对象，其中男199例，女61例；年龄21～71岁，平均（49.79±8.33）岁。本研究经医院医学伦理委员会批准，患者家属均自愿签署知情同意书。

纳入标准：出现淋巴结增大、硬下疳等疑似梅毒症状。排除标准：严重高血压、心脏病未经控制者。

1.2 方法

嘱患者检测前一晚禁食，采集患者的晨起空腹静脉血3 ml，在室温状态下静置60 min 后离心（5000转/min，10 min）并提取血清样本待检，每位患者的血清样本均分为3份，分别进行CLIA、ELISA 及TPPA 检测。本研究使用美国西门子医学诊断股份有限公司所生产的ADVIA Centaur XP 全自动化学发光免疫分析仪（国食药监械进字2014第3404170号）及配套试剂盒（国械注进20173406311）进行CLIA 检测，采用科华生物工程股份有限公司 ST-360型酶标仪及配套试剂盒，以双抗夹心法进行ELISA 检测，采用北京中检安泰诊断科技有限公司提供的TPPA 试剂盒（国械注准20153401572，型号为20T）进行TPPA 检测，检测过程中严格按照检测仪器及试剂盒要求合理设置检测参数。

1.3 观察指标

以TPPA 检测结果为金标准，比较CLIA、ELISA 的诊断准确度、灵敏度、特异度。

1.4 统计学处理

采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析，计数资料以率表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

以TPPA 检测结果为金标准，CLIA 的诊断准确度、灵敏度、特异度均高于ELISA，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1～2。

表1 两种方法的检测结果比较（例）

表2 两种方法的诊断效能比较（%）

3 讨论

梅毒螺旋体感染可分为胎传梅毒和获得性梅毒，其中胎传梅毒会影响胎儿身体状况或导致胎儿出现全身感染甚至死亡，而获得性梅毒以性传播为主[2]。梅毒螺旋体的持续扩散，会导致机体心血管系统、中枢神经系统均受到侵犯，诱发主动脉炎、脑膜血管病等病症。为有效阻止以上病症的发生、最大限度保障母婴安全，需尽早对个体梅毒感染程度进行评估以便开展针对性抗感染治疗。梅毒螺旋体抗体是机体免疫系统应对梅毒感染的重要手段，检测该抗体水平可为临床诊断提供有效参考依据，而合理选择检测方法能够进一步提升诊治效率。

梅毒螺旋体感染人体局部组织后，机体血清中会产生针对梅毒螺旋体的特异性及非特异性抗体。其中特异性梅毒螺旋体的抗体产生早于非特异性抗体，且滞留于体内的时间较长，部分患者在梅毒感染症状完全缓解后仍能够检测出特异性抗体；此外，特异性抗体会受到妊娠、肿瘤、吸毒、结缔组织病变等多种因素影响，主要体液免疫表现为IgM 水平升高，而非特异性抗体主要表现为IgG水平升高。TPPA 检测较适用于普遍性筛查，全自动化TPPA 检测操作加快了筛查效率，且检测结果较稳定、直观；需要注意的是，即使患者在接受抗梅毒治疗后仍可能出现TPPA 阳性，故此检测结果不适合作为区分既往感染、现症感染的唯一标准。ELISA 主要对梅毒螺旋体的IgM、IgG 混合抗体进行检测，该方法难以清晰地显示梅毒螺旋体的实际活动情况，将其作为主要的疗效监测措施可能会导致病情波动情况的诊断结果出现一定误差，早期诊断中易检出假阴性，且在一期、三期梅毒感染检测中存在盲区。随着检测技术的不断发展，全自动化学发光免疫分析仪应运而生。CLIA 克服了ELISA 干扰因素较多的缺点，其具有较长的发光信号时间和较高的光信号稳定性[3]，主要对特异性梅毒螺旋体抗体进行检测，能够检测到TpN15、TpN17及TpN47等混合重组梅毒螺旋体抗体活性，而TpN15是活动期梅毒的标志性抗体，以上抗体所具有的炎症活性与梅毒感染所引发的免疫反应关联密切[4]，混合重组梅毒螺旋体抗体不仅会影响E-选择素、单核细胞趋化蛋白-1等因子的表达，还会对人体血管内皮细胞合成及血管黏附因子在梅毒扩散过程中的相互作用产生影响，因此，对以上抗体活性进行监测，可进一步明确梅毒螺旋体的扩散、增殖情况，从而为临床提供诊断参考依据；同时，与ELISA 相比，CLIA 检测的线性范围较宽，其能够采用酶促发光底物来替代原有底物，通过测定微粒子表面非特异性抗体所结合的化学发光反应物相对光单位来得出待测物含量，其结果不易受人为操作、样本数量的影响，且可进行重复操作，有效弥补了ELISA 在重复性上的不足，可应用于临床大批量血清标本的筛查[5]；此外，CLIA 检测时间较短，可随时进行单个标本检测，全自动化的操作能够减少手工操作误差并降低生物安全事件的发生概率，故全自动化学发光免疫分析仪已成为多数医院检测特异性梅毒螺旋体抗体的重要仪器。本研究结果显显示，以TPPA 检测结果为金标准，CLIA 的诊断准确度、灵敏度、特异度均高于ELISA（P＜0.05），提示采用全自动化学发光免疫分析仪进行梅毒螺旋体抗体检测可取得较为准确的诊断结果，且诊断灵敏度、特异度均较高。

综上所述，在梅毒螺旋体抗体检测中应用全自动化学发光免疫分析仪可取得较为理想的检测结果，该检测方式具有较高的准确度、灵敏度、特异度。