连翘提取物对慢性盆腔炎模型大鼠的干预作用及对ICAM-1和INF-r水平的影响*

张永会 罗福兰 胡红娟

(云南省中医医院妇科，云南 昆明 650021)

盆腔炎是指女性生殖道及其周围组织的炎症，慢性盆腔炎是急性期时未得到有效的治疗和诊断，由于患者体质较差而导致形成的。慢性盆腔炎的病情较顽固，有研究表明[1]，此病的发生是局部调节与促炎因子相互作用和共同参与的结果。慢性盆腔炎是一种常见的妇科炎症，且呈现出迁延不愈的状态，患者主要表现为盆腔、腰骶部位疼痛，当身体劳累时，会直接导致病情加重[2]。其病症反复发作，严重影响患者的身心健康，是有待解决的重大妇科难题。连翘是木犀科植物连翘的果实，属于我国常用的40味药材之一。其具有清热解毒、消肿散结等功效。有研究表明[3]，连翘具有抗炎、解热、镇痛等药理作用。连翘主要用于急性传染、感染性炎性疾病等治疗中。但目前临床上连翘提取物对慢性盆腔炎作用的报道鲜少，因此本研究中探讨其对慢性盆腔炎小鼠的干预作用，为临床上此病的治疗提供新方向。

1 材料与方法

1.1 一般材料

1.1.1 实验动物 选取SPF级SD健康大鼠40只，由基尔顿生物科技(上海)有限公司提供，鼠龄(3.6±0.2)个月，体重(219.7±8.5) g。所有大鼠均养殖在干净笼子里，室温在(22.1±1.8)℃，相对湿度35%～40%，每天光照12 h，喂饮纯净水，饲养时间一周。本文研究所做实验均获得我院伦理委员会批准。

1.1.2 主要试剂 连翘提取物(山东唐正生物科技有限公司)；氟哌酸胶囊剂(广东恒健制药有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 分组及建模 双盲随机选取40只大鼠中10只作为正常组，其余30只小鼠建立慢性盆腔炎模型，正常组在建模过程中不做任何处理。参照王新斌等[4]研究实验中慢性盆腔炎大鼠模型建立方法在无菌环境下建立慢性盆腔炎模型，将大鼠使用100 g/L的水合氯醛进行麻醉，将其仰卧固定，下腹手术部位进行去毛，常规消毒下，在腹中线于尿道口上方1 cm处作0.8～1.0 cm切口，将子宫完全暴露，在距离卵巢2 cm处，使用5号针头将子宫划伤，使用相同力道将子宫划伤5次后，分别向右侧输卵管-卵巢方向注入250 g/L苯酚胶浆溶液0.05 mL，分层关腹。建模成功27只(成功标准：大鼠子宫内膜组织进行HE染色，见腺体增生、大量炎性因子浸润、纤维结缔组织增生，表明建模成功)，随机分为模型组、阳性对照组和连翘提取物组各9只。

1.2.2 给药 阳性对照组大鼠使用2 mg/kg的地塞米松灌胃处理[4]；连翘提取物组使用连翘提取物250 mg/kg进行灌胃给药，正常组和模型组不作任何处理。

1.2.3 切片及染色 随机选取各组大鼠行全麻处理后，采用断头法处死，在无菌、低温条件下取小鼠子宫内膜组织，将小鼠子宫内膜组织在4%多聚甲醛中浸泡、固定，在温度为4℃的环境下进行保存。之后行HE染色处理，观察病理组织变化。

1.2.4 样本采集 抽取4组大鼠颈总动脉血3 mL，在抗凝管中保存，用3000 r/min的离心机离心，10 min后，将离心静脉血滴入EP试管中，分离上层血清，在-80℃环境下保存，待用。

1.2.5 免疫球蛋白含量检测 采用酶联免疫吸附法对(免疫球蛋白G)IgG、(免疫球蛋白A)IgA、(免疫球蛋白M)IgM水平进行检测。

1.2.6 ICAM-1、INF-γ、TLR4、NF-kB水平检测 使用免疫组化法对(细胞间黏附分子-1)ICAM-1水平进行检测；使用采用酶联免疫双抗体夹心法(ELISA)对(γ-干扰素)INF-γ水平进行检测；使用(上海纪宁生物科技有限公司)ELISA 试剂盒对(Toll样受体4)TLR4、(核转录因子-KB)NF-kB水平进行检测。

1.2.7 子宫系数、红细胞压积及血浆粘度检测 取大鼠全部子宫，剪去双侧卵巢，剔除脂肪，用电子天平进行称重，计算各组大鼠子宫重量系数，子宫系数(mg/g)=子宫重(mg)/体重(g)；取1 mL全血，放入温室压积管中，3000 r/min进行离心20 min后读取红细胞压积值；将全血、血浆注入血流变仪，然后检测血浆粘度。

1.2.8 右侧子宫质量、左侧子宫质量及肿胀度检测 子宫肿胀度(g)=右侧子宫质量-左侧子宫质量。

2 结果

2.1 4组大鼠病理组织学观察 正常组大鼠子宫内膜组织正常，子宫壁界限清晰，未见明显炎性细胞浸润；模型组大鼠浆膜层可发现大量炎性细胞，肌层血管明显水肿，结蹄组织明显增生，子宫腔内出现不同程度黏连；阳性对照组大鼠子宫组织结构恢复较好，但仍有炎性介质的参与；连翘提取物组大鼠子宫组织结构基本恢复正常，炎性细胞浸润和组织增生变少。见图1。

图1 4组小鼠子宫组织病理组织学观察(HE 200×)

2.2 4组大鼠血浆免疫球蛋白含量比较 模型组、阳性对照组、连翘提取物组大鼠血浆免疫球蛋白含量均低于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)；阳性对照组、连翘提取物组大鼠血浆免疫球蛋白含量均高于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)；连翘提取物组大鼠血浆免疫球蛋白含量均高于阳性对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 4组大鼠血浆免疫球蛋白含量比较

2.3 4组大鼠体内ICAM-1、INF-γ、TLR4、NF-kB水平比较 模型组、阳性对照组、连翘提取物组大鼠体内ICAM-1、TLR4、NF-kB均高于正常组，INF-γ水平低于正常组，差异均有统计学意义(均P<0.05)；阳性对照组、连翘提取物组大鼠体内ICAM-1、TLR4、NF-kB均低于模型组，INF-γ水平高于模型组，差异有统计学意义(均P<0.05)；连翘提取物组大鼠体内ICAM-1、TLR4、NF-kB均低于阳性对照组，INF-γ水平高于阳性对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表2。

表2 4组大鼠体内ICAM-1、INF-γ、TLR4、NF-kB水平比较

2.4 4组大鼠子宫系数、红细胞压积、血浆粘度比较 模型组、阳性对照组、连翘提取物组大鼠子宫系数、红细胞压积、血浆粘度高于正常组，差异有统计学意义(均P<0.05)；阳性对照组、连翘提取物组大鼠子宫系数、红细胞压积、血浆粘度低于模型组，差异均有统计学意义(均P<0.05)；连翘提取物组大鼠子宫系数、红细胞压积、血浆粘度低于阳性对照组，差异有统计学意义(均P<0.05)。见表3。

表3 4组大鼠子宫系数、红细胞压积、血浆粘度比较

2.5 4组大鼠右侧子宫质量、左侧子宫质量、肿胀度比较 模型组、阳性对照组、连翘提取物组大鼠右侧子宫质量、左侧子宫质量高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)；阳性对照组、连翘提取物组大鼠右侧子宫质量、左侧子宫质量、肿胀度低于模型组，差异有统计学意义(均P<0.05)；连翘提取物组大鼠右侧子宫质量、左侧子宫质量、肿胀度低于阳性对照组，差异有统计学意义(均P<0.05)。见表4。

表4 4组大鼠右侧子宫质量、左侧子宫质量、肿胀度比较

3 讨论

慢性盆腔炎属于增生性炎症，其随着病程的变化而加重，是临床上难以解决的问题，也是今年来需要解决的重要问题[5-6]。慢性炎症黏连的形成与多种因素有关，在正常生理状态下，腹膜间皮细胞纤维蛋白原与蛋白溶解之间处于平衡状态，若此关系遭到破坏，导致纤维蛋白的不断增加，溶解障碍，进而形成纤维蛋白性黏连[7]。盆腔炎主要累及子宫、输卵管、卵巢和周围结缔组织等，并可波及盆腹腔腹膜的炎症的总称，因此其治疗准确性不高，其还会由性传播疾病感染、产后、流产后以及妇科手术后细菌进入创面感染而得病，发病可局限于一个部位、几个部位或整个盆腔，因此延误治疗有可能导致盆腔炎后遗症的发生[8-9]。

连翘提取物含有连翘苷、连翘脂素、松脂素-β-D-葡萄糖苷、异连翘脂苷等化学成分，其中连翘质感A、芦丁等被证实具有抗炎疗效，属于连翘提取物的抗炎有效成分[10]。连翘提取物收载与《药典》中，其主要应用于临床和食品保鲜中，并没有明确的实验证实连翘与抗炎作用一致。孙佳玮等[11]研究表明，连翘根醇提物(FSEER)可以显著提高小鼠机体的免疫功能，恢复由Cy诱导的小鼠免疫抑制状态。在本文研究中显示，连翘提取物组大鼠血浆免疫球蛋白含量均高于阳性对照组和模型组，此结果说明，连翘提取物还能够有效改善大鼠机体的免疫功能，效果较好。有学者研究发现[12]，将连翘干燥果实的甲醇提取液、正己烷萃取甲醇提取液后所得到的正己烷可溶物和水可溶物分别进行真空冷冻干燥，通过小鼠毛细血管通透性、扭体反应、足趾肿胀和肉芽肿实验表明，连翘甲醇提取物和正己烷可溶物具有消炎和镇痛作用。在本文研究中，连翘提取物组大鼠子宫系数、红细胞压积、血浆粘度低于阳性对照组和模型组，此结果说明，连翘提取物能够改善大鼠的子宫系数和红细胞压积，效果较为突出。武明红等[13]研究表明，慢性盆腔炎患者采用物理疗法与中药连翘炎宁合剂联合进行治疗，可以减少药物不良反应，迅速控制炎症反应，缩短用药时间，提高治疗效果。在本研究中还发现，连翘提取物组大鼠右侧子宫质量、左侧子宫质量、肿胀度低于阳性对照组，此结果说明，连翘提取物能够促进子宫恢复，使各方面恢复正常。与刘玉玲等[14]研究结果一致。

ICAM-1属于免疫球蛋白家族的一员，其分布交广，且在组织局部炎症炎症中发挥着重要作用。ICAM-1的生理作用不仅能够调节细胞，还能够参与细胞的信号转导、细胞的生长移行、肿瘤转移的浸润等一系列的生理和病理发展的过程[15-16]。其还能够介导白细胞的稳定、粘附和穿越内皮细胞，能够通过白细胞的激活，而释放出大量的炎性介质[17]。岳秀永等[9]研究表明，当归四逆汤有治疗慢性盆腔炎的作用，作用机理与改善慢性盆腔炎大鼠血流动力学状况，调节粘连相关免疫分子ICAM-1、FGF-2的表达有关。在本研究中发现，连翘提取物组大鼠体内ICAM-1、TLR4、NF-kB均低于阳性对照组和模型组，此结果说明，连翘提取物能够有效改善慢性盆腔炎大鼠的炎性因子水平，减缓病情进展。INF-γ具有抗增殖、免疫抑制及抗纤维化活性，能够有效抑制转化生长因子的合成以及成纤维细胞的增殖，是一种重要的抗纤维化因子[18]。当抗纤维化因子水平较高时，会直接阻止过度纤维化的过程，使组织结构损伤后能够适当的修复，进而不会导致盆腔组织的过度黏连。在本文中，连翘提取物组大鼠体内INF-γ水平高于阳性对照组和模型组，此结果说明，连翘提取物能够有效提高慢性盆腔炎大鼠体内INF-γ水平，能够有效阻止纤维化的发展。与张志鹏等[19]研究结果一致。

4 结论

连翘提取物能够有效缓解大鼠子宫黏连，改善体内炎症反应及血流病变异常，其机制可能与子宫组织ICAM-1、INF-γ表达有关。