无核枣愈伤组织诱导初报

豆玉娟 ，孙洪强 ，代丽，杨越，付庆新 ，黄立华 ，朱虹

（1.辽宁省旱地农林研究所，辽宁朝阳 122000 2.河北农业大学中国枣研究中心，河北保定 071000）

枣为鼠李 科（Rhamnaleae）枣属（Zizyphus）植物，原产于中国，由于其耐旱、耐瘠薄的特点，兼具经济、生态和社会等多重效益[1-2]，适宜辽宁朝阳 地区坡地 、山坡地栽植。近年来在辽宁西部朝阳地区发现一个无核枣资源，经多年观察性状稳定，平均 单果重为6g，可食率达到100%，鲜食、加工均可[3]。由于大枣实生繁殖难以保持品种的优良特性，主要采用嫁接 繁殖[4]，大枣组织培养技术日益成熟，不仅有利于繁殖、增殖和保存，而且利用带芽茎段诱导愈伤组织及丛生芽具有稳定的遗传性[5]。该试验以朝阳地区无核枣为试材，采集带芽茎段建立脱菌苗，诱导愈伤组织萌发不定芽，力求实现无核枣的不定芽高效诱导，为建立高效稳定的植株再生体系提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

早春无核枣枣头长至 15～20 cm 时，选晴天采集未木质化带芽茎段，朝阳地区5月中上旬取样最好。

1.2 试验方法

1.2.1培养基配置。选用 MS 基本培养基为诱导培养基，含琼脂条 8～8.5 g/L，蔗糖 30 g/L，pH 5.8～6.0，按常规方法配置，121℃灭菌 20 min，避光保存备用[5-6]。

1.2.2外植体处理。采集无核枣新生带芽茎段，用自来水冲洗干净，浸泡2h 后，用 0.1%升汞（HgCl2）消毒8min，无菌水冲洗 3～5 次后，接种到诱导培养基中。温度为 24℃，弱光下培养[5-6]。

1.2.3基本培养基的筛选。将诱导出的愈伤组织分别接种到3种基本培养基中，分别是 1/2 MS、MS和3/2 MS 培养基，观察并统计愈伤组织的培养结果，筛选最适基本培养基。

1.2.4不同植物生长调节剂组合。在筛选出的基本培养基中分别添加不同浓度的植物生长调节 剂（6-BA、IBA、NAA），浓度分别为 0.2、0.5、1.0、2.0、3.0 mg/L，以及不同植物生长调节剂组合（6-BA、TDZ和NAA，如表 1），观察记录愈伤组织和不定芽的诱导结果，在一部分培养基中添加不同浓度（10、20 mg/L）的 AgNO3，观察其诱导效果。

表1 不同植物生长调节剂组合 mg/L

2 结果与分析

2.1 基本培养基的筛选

从图1可以看出，平顶枣和无核枣愈伤组织在3种培养基上培养 25d后，在 MS和3/2MS 培养基上的愈伤组织均产生了大量的绿色圆球形颗粒，其中 3/2MS 培养的愈伤组织较为松散。经过连续继代培养，由于 MS 培养基增殖率高，愈伤组织形态色泽正常，选其作为基本培养基。

图1 不同培养基愈伤生长情况（A：1/2MS 培养基；B：MS 培养基；C：3/2MS 培养基）

2.2 愈伤组织的培养及不定芽的诱导

2.2.1不同浓度植物生长调节剂对愈伤组织的影响。多数研究表明，单一的植物生长 调节剂有利 于胚 状体发生[4，7-9]。以 MS 为基本培养基，研究不同浓度的 IBA、NAA对愈伤组织颗粒的影响，结果表明低浓度的生长素能够促进无核枣愈伤组织颗粒增殖（表 2）。

表2 不同植物生长调节剂种类及其浓度对愈伤组织的影响

2.2.2不同植物生长调节剂组合对愈伤组织不定芽的诱导。把愈伤组织颗粒接种到含有不同激素组合培养基中，培养 28d后，组合 I、II、III、VIII 可见不定芽，连续培养 3个月后，愈伤组织及不定芽生长情况见表3和图 2。

表3 不同植物生长调节剂组合对愈伤组织的影响

图2 不同植物生长调节剂对不定芽的诱导

3 小结与讨论

研究表明，植物愈伤组织增殖与分化出不定芽受细胞内外多重因素影响[10]，适 宜的生长素和细胞分裂 素组 合可有效诱导植物外植体分化与生长[11]。该试验以朝阳地区无核枣带芽茎段为试材诱导愈伤组织，筛选出 MS 为最适基本培养基。通过比较，MS 中加入低浓度（0.2～1.0 mg/L）植物生长调节剂（IBA和NAA）和不同配比植物生长调节剂（TDZ、6-BA、NAA）促进愈伤组织增殖，其中愈伤组织增殖的最佳激素组合为 MS+0.5 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA，诱导愈伤组织形成不定芽的最佳组合为MS+1.0 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA，不定芽诱导率为 52.5%。

有学者认为，培养基中添加 AgNO3、ABA、GA3等会提高胚状体发生率[4]，该试验在一部分培养基中添加不同浓度（10、20 mg/L）的 AgNO3，未发现对愈伤组织增殖与不定芽形成有明显影响。实践证明，诱导愈伤组织增殖和胚状体发生的因素众多，其作用也不尽相同，具体效果尚需设计试验进行进一步研究。