自体富血小板凝胶促进创面愈合的临床研究

刘宗星，江丽，邹细平，周华，刘琼，胡建新

（江西省萍乡市第三人民医院骨科，江西 萍乡 337000）

受糖尿病溃疡、创伤后骨不连等疾病的影响，导致患者机体组织会出现难愈性创面。难愈性创面具有病程长、病情反复等特点，成为外科临床长期以来急需破解的难题。与此同时，近年来，随着我国老龄化程度不断加深，老年患者因机体组织修复能力弱，若发生难愈性的创面，给后期的愈合、修复上带来很大的难度[1-2]。为解决该难题，现今临床不断研发新的技术，尤其是自体富血小板凝胶（autologous platelet-rich gel，APG），在促进创面愈合中效果显著。APG 是在患者自体血中提取出的一类血浆，富含血小板，其中还含有血小板源性生长因子（platelet derived growth factor，PDGF）、表皮生长因子（epithelial growth factor，EGF）在内的多种生长因子，可促进骨组织修复[3-4]。同时，富血小板血浆来源患者自身，不受免疫排斥反应的困扰，应用较广。基于此，本研究旨在分析APG促进患者创面愈合的临床效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取 2019 年 1 月至 2021 年 5 月本院收治的60例存在难愈性创面患者作为研究对象，按照随机抽取法分为研究组与对照组，每组30 例。研究组男19 例，女11 例；年龄45～75 岁，平均年龄（58.9±0.2）岁。对照组男20 例，女10 例；年龄46～78 岁，平均年龄（58.7±0.8）岁。两组临床资料比较差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：创面3 周未愈合；创面持续时间6 周；经本院伦理委员会审核批准，患者及家属均签署知情同意书。排除标准：对多种药物过敏者；心肺系统出现功能性损伤者；因恶性肿瘤导致溃疡者；严重营养不良及糖尿病血糖控制欠佳者。

1.3 方法

1.3.1 制备自体富血小板凝胶 抽取两组患者自体的外周静脉血，应用二次差速离心法，首先686×g离心4 min，然后3 540×g 离心6 min，在分离和浓缩下制成血浆制品，血小板浓度高，将其和凝血酶-钙剂分别按照10∶1的比例充分混合凝固后制成APG。

1.3.2 实验方法 研究组采用双通注射器，将自体富血小板凝胶均匀覆盖在创面上，并在3～4 d后再次使用该方法治疗，根据创面愈合情况，通常使用3次，治疗期间观察创面渗出情况。遵循传统方法，采用0.9%氯化钠溶液清洗创面，使用凡士林油纱包扎换药，2～3 d 内换药1 次。对照组采用传统换药方法，根据难愈性创面患者渗出情况，对内层敷料进行及时更换。

1.4 观察指标 比较两组创面愈合率、组织病理学标准评分以及创面组织生长因子水平。①创面愈合率：最开始治疗的时间点和其后每周1 次治疗最后1 d 的时间点，连续记录5 周，应用透明方格胶片直接对创面进行扫描，通过ImageJ图像分析软件来计算出创面面积×100%。随后计算创面的愈合率。②组织病理学标准评分：在测量出创面面积的同时，于患者局麻状态下切取创面0.5 cm×1 cm×0.5 cm 大小的皮肤组织，对1/4的组织进行固定，将其制备成6 μm 的石蜡切片，经 HE 染色后经 1 名工作经验丰富的病理科医师利用光学显微镜下盲法读片，依据histopathological criteria 评分系统对组织进行病理学分析。组织学标准定量评估：创面皮肤组织的表皮结构；创面皮肤组织的真皮-表皮邻接处与微水疱；创面皮肤组织的表皮再生情况；创面皮肤组织的胶原束与皮肤结构；创面皮肤组织的粒细胞浸润数量。在400倍放大镜下，观察切片每视野细胞数，计算粒细胞计数。③创面组织生长因子水平检测方法为将上一步骤剩余的3/4创面组织置于-80 ℃的超低温环境下保存。使用时放置于3 ℃的环境下解冻，随后剪碎组织，进行超声匀浆。4 ℃下1 070×g离心0.5 h，分离出上清液。通过ABC法测定组织蛋白中的具体含量进行。取10 μl上清液，预备后期的组织蛋白含量，按照50∶1的比例，将蛋白定量试剂A和蛋白定量试剂B混合制成工作试剂，将其对样品进行50倍稀释，37 ℃状态下温育30 min，在562 nm 的波长下，利用蛋白检测仪读取光密度，以标准曲线为参照物，计算组织蛋白的含量。运用酶联免疫吸附试验测定出上清液中的转化生长因子-β1、血小板源性生长因子-BB，表皮生长因子浓度等指标，最后依据组织蛋白含量的数值计算出每毫克组织中生长因子的浓度。

1.5 统计学方法 采用SPSS 20.0软件进行数据分析，计量资料以“”表示，行t检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组创面愈合率比较 治疗后，研究组创面愈合率均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组创面愈合率比较（）Table 1 Comparison of wound healing rate between the two groups()

表1 两组创面愈合率比较（）Table 1 Comparison of wound healing rate between the two groups()

组别研究组对照组t值P值治疗后5周98.44±1.22 82.34±1.79 6.878 0 0.020 5例数30 30治疗后1周64.62±2.30 40.23±1.74 7.360 7 0.017 9治疗后2周77.25±2.15 50.85±1.70 9.521 8 0.010 8治疗后3周84.23±1.99 63.73±1.29 6.672 7 0.021 7治疗后4周91.37±1.75 76.23±1.82 18.391 4 0.002 9

2.2 两组组织病理学评分比较 研究组组织病理学评分均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组组织病理学评分比较（，分）Table 2 Comparison of histopathological scores between the two groups(,scores)

表2 两组组织病理学评分比较（，分）Table 2 Comparison of histopathological scores between the two groups(,scores)

组别研究组对照组t值P值治疗后5周9.51±0.87 7.36±1.40 7.624 8 0.016 5例数30 30治疗后1周5.42±1.12 3.74±1.32 4.778 4 0.043 6治疗后2周6.35±1.77 4.53±1.53 5.273 5 0.037 6治疗后3周7.54±1.62 5.61±1.28 5.919 2 0.021 3治疗后4周8.42±1.44 6.14±1.53 6.588 1 0.022 3

2.3 两组组织生长因子水平比较 研究组TGF-β1、PDGF-BB 均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 两组组织生长因子水平比较（，pg/mg）Table 3 Comparison of the levels of tissue growth factors between the two groups(,pg/mg)

表3 两组组织生长因子水平比较（，pg/mg）Table 3 Comparison of the levels of tissue growth factors between the two groups(,pg/mg)

注：与同时间段对照组比较，aP＜0.05。EFG，表皮生长因子；TGF-β1，转化生长因子-β1；PDGF-BB，血小板衍生因子

EFG TGF-β1组别研究组（n=30）治疗后1周治疗后2周治疗后3周治疗后4周治疗后5周对照组（n=30）治疗后1周治疗后2周治疗后3周治疗后4周治疗后5周11.52±3.73 14.35±3.73 13.33±2.32 12.94±1.87 11.75±2.35 0.35±0.10a 0.48±0.08a 0.43±0.14a 0.36±0.14a 0.37±0.16a 26.64±5.36a 27.95±3.32a 23.65±4.62a 21.29±0.30a 18.13±3.66a 14.93±3.25 13.37±3.16 12.77±3.26 11.26±2.25 11.62±2.58 10.75±3.09 13.55±3.11 12.33±2.42 12.31±2.73 10.99±2.20 0.25±0.08 0.27±0.11 0.26±0.18 0.28±0.12 0.25±0.16 PDGF-BB

3 讨论

如何修复难愈性创面，促进其愈合，是外科临床长期以来需要解决的棘手问题之一[5-6]。难愈性创面在老年患者群体中十分常见，其原因主要体现在外伤后所导致的外伤性溃疡、压疮、放射性溃疡、手术后切口感染以及下肢深静脉栓塞等。从危害方面看，虽然难愈性创面并不会威胁患者生命，但创面长期不愈合会严重影响患者的生活质量，治疗费用高，还会有一定的致残率[7-8]。对于难愈性创面的治疗，除了给患者提供全身性的营养支持以及预防感染外，最关键的步骤在于加强局部换药。客观来说，目前临床上对于难愈性创面的治疗手段较多，包括干细胞治疗、植皮以及负压吸引治疗等，但效果均不佳，因此，关于难愈性创面愈合修复的研究仍是临床关注的热点[9-10]。

生物组织均具有自身修复能力，且其修复能力与生长因子密切相关。该研究结果为创面愈合技术提出新的思路，即调动自身修复能力为生物体自身所用[11-12]。在此基础上，富血小板凝胶技术应运而生，并在临床骨科领域得到了广泛的应用。所谓APG，是将自体全血在离心作用下，获取富含血小板的血浆。经研究发现，APG中包含丰富的血管内皮细胞生长因子、PDGF、转化生长因子、EGF等，有利于促进创面的愈合[13-14]。

创面的愈合需经历炎症反应初步形成、组织新生、创面收缩及重塑3个阶段。在炎症反应阶段中，机体内的血小板会发生凝集、进而释放出大量的炎症介质或者细胞因子，有利于后续修复；在组织形成阶段，表皮角质产生细胞，成纤维细胞完成增殖、迁移作用，进而长出新的肉芽组织，实现再上皮化，从而实现创面愈合[15]。APG中含有的丰富血小板，会在溃疡的创面上模拟正常创面的愈合过程，促进创面修复愈合。以创面难以愈合的主要机制为生长因子的活性发生改变，或者生长因子和其他的受体间信号失调无法传导，无法启动愈合过程。而对难愈性创面患者应用APG，会在患者创面的局部检测出多种生长因子，包括上清液中的转化生长因子-β1、PDGF-BB，EGF等指标，显示APG是通过调控创面生长因子来促进创面的愈合。本研究结果显示，研究组创面愈合率、组织病理学评分、TGF-β1、PDGFBB均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

综上所述，自体富血小板凝胶能有效促进创面的愈合，可对创面局部生长因子的水平进行调控，促使炎症在短时间内消退，值得临床推广。