高效液相色谱法测定36%咪铜·噻霉酮悬浮剂中咪鲜胺铜盐和噻霉酮含量

季红进，罗丽娟，张 明，阮 华，戚晶晶

(安道麦辉丰(江苏)有限公司，江苏 大丰 224100)

1 前言

36%咪铜·噻霉酮悬浮剂由咪鲜胺铜盐和噻霉酮复配而成。咪鲜胺铜盐是一种咪唑类杀菌剂，是咪鲜胺的金属盐衍生化合物。咪鲜胺铜盐主要通过抑制麦角甾醇的生物合成来发挥药效，具有内吸传导、预防保护、治疗等多重作用[1-2]。噻霉酮是一类有机杂环类噻唑林酮杀菌剂，以其高效、低毒等特点填补了国际、国内在该领域的空白，对真菌、细菌类病害有抑制毒杀作用，广泛用于防治黄瓜霜霉病、梨黑星病、苹果疮痂病等多种细菌及真菌性病害。两者复配可有效防治小麦赤霉病、水稻稻瘟病等多种病害[3-6]。

同时分析咪鲜胺铜盐、噻霉酮的高效液相色谱方法目前尚未见任何公开报道。本文采用高效液相色谱法同时分析咪鲜胺铜盐、噻霉酮含量，方法分析速度快，分离效果好，减少溶剂使用量，降低分析成本，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，可以作为企业生产过程质量控制和质检机构质量检测的参考方法。

2 试验部分

2.1 试剂和溶液 乙腈(色谱纯)；超纯水(电阻率18.2MΩ·cm，25℃)；咪鲜胺标样(99.7%)；噻霉酮标样(98.0%)；36%咪铜·噻霉酮悬浮剂。

2.2 仪器 高效液相色谱仪：Agilent 1 260，具有可变波长紫外检测器和自动进样器；Millipore超纯水制备系统；色谱柱：Agilent Zorbax RX -C8，250mm×4.6mm，粒径5μm。

2.3 液相色谱操作条件 流动相：ψ(乙腈：水)=70:30；流量：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：230nm；进样体积：3.0μL；运行时间：10min；保留时间：噻霉酮约2.9min，咪鲜胺约7.2min。

36%咪铜·噻霉酮悬浮剂中咪鲜胺和噻霉酮高效液相色谱图(图1)。

图1 36%咪铜·噻霉酮悬浮剂中咪鲜胺和噻霉酮高效液相色谱图

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的配制 称取咪鲜胺标样0.05g(精确至0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。

称取噻霉酮标样0.1g(精确至0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。准确移取上述溶液5.0mL至50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.4.2 试样溶液的配制 称取0.17g的试样(精确至0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.4.3 测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化<1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

2.4.4 计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中咪鲜胺、噻霉酮峰面积分别进行平均。试样中咪鲜胺铜盐、噻霉酮的质量分数X1，X2(%)，按式(1)、(2)计算：

(1)

式中：A1——试样溶液中，咪鲜胺峰面积的平均值；

A2——标样溶液中，咪鲜胺峰面积的平均值；

m1——试样的质量，g；

m2——咪鲜胺标样的质量，g；

P1——标样中咪鲜胺的含量，%；

1.0890——咪鲜胺换算成咪鲜胺铜盐的系数。

(2)

式中：A4—试样溶液中，噻霉酮峰面积的平均值；

A3—标样溶液中，噻霉酮峰面积的平均值；

m4—试样的质量，g；

m3—噻霉酮标样的质量，g；

P2—标样中噻霉酮的含量，%;

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择 用乙腈作为溶剂溶解样品，并选择乙腈+水作为流动相。选择不同的流动相比例及柱流速进行试验，最终采用流动相ψ(乙腈:水)=70:30，流量为1.0mL/min的试验条件，在该条件下，有效成分与杂质能得到很好地分离，峰型对称，峰纯度高，基线平稳，能在短时间得到满意的分析结果，提高分析效率。

3.2 非分析物干扰 按照配方比例，将除噻霉酮以外的所有助剂混匀，作制剂空白，称取170mg左右制剂空白，按照上述检测方法进行处理，并检测，在2.9min(噻霉酮保留时间)处无响应，证明非分析物对噻霉酮含量的测定无干扰。谱图(图2)。

图2 36%咪铜·噻霉酮悬浮剂制剂空白谱图(未加噻霉酮)

制剂空白，按照上述检测方法进行处理，并检测，在7.2min(咪鲜胺保留时间)处无响应，证明非分析物对咪鲜胺铜盐含量的测定无干扰。谱图(图3)。

图3 36%咪铜·噻霉酮悬浮剂制剂空白谱图(未加咪鲜胺铜盐)

3.3 特异性 将36%咪铜·噻霉酮悬浮剂样品溶液用二极管阵列检测器在190～400nm波长范围内进行光谱纯度的检查，3.0min色谱峰的光谱纯度为999.757，7.1min色谱峰的光谱纯度为999.980。(图4、图5)

图4 3.0min色谱峰(噻霉酮)的光谱纯度

图5 7.1min色谱峰(咪鲜胺)的光谱纯度

3.4 分析方法的线性相关性试验 分别称取35.7、45.4、49.4、58.0、67.3mg咪鲜胺标样，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，在上述色谱操作条件下进行分析。以标准溶液的浓度为横坐标(mg/L)，峰面积为纵坐标，绘制校正曲线(表1)。测得咪鲜胺铜盐的线性方程为y=5.528 8x+223.96，相关系数为0.999 7。结果表明咪鲜胺铜盐在测试的质量浓度范围内线性关系良好(图6)。

表1 咪鲜胺铜盐的线性范围测定结果

分别称取70.5、87.3、103.0、115.3、131.8mg噻霉酮标样，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。分别准确移取上述溶液5.0mL至50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。在上述色谱操作条件下进行分析。以标准溶液的浓度为横坐标(mg/L)，峰面积为纵坐标，绘制校正曲线(表2)。测得噻霉酮的线性方程为y=48.56x+91.309，相关系数为0.999 6。结果表明噻霉酮在测试的质量浓度范围内线性关系良好(图7)。

表2 噻霉酮的线性范围测定结果

图7 噻霉酮线性关系图

3.5 分析方法的精密度试验 准确称取6份36%咪铜·噻霉酮悬浮剂试样，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，在上述色谱操作条件下进行分析。测得咪鲜胺铜盐的标准偏差为0.13%，变异系数为0.44%，噻霉酮的标准偏差为0.02%，变异系数为0.34%(表3)。

表3 分析方法的精密度试验结果

3.6 分析方法的准确度试验 采用标准加入法，在制剂空白中加入一定量的咪鲜胺、噻霉酮标准品，按上述色谱条件进行测定，回收率结果(表4)。结果表明：用该方法测定咪鲜胺铜盐含量回收率在99.27%～99.64%之间，平均回收率为99.46%，噻霉酮含量回收率在99.85%～101.06%之间，平均回收率为100.54%。

表4 测定方法的准确度

4 结论

本试验建立了高效液相色谱法同时检测36%咪铜·噻霉酮悬浮剂中咪鲜胺铜盐、噻霉酮的质量分数的分析方法。结果表明，咪鲜胺铜盐、噻霉酮在测试浓度范围内线性关系良好，方法准确度和精密度较高，具有操作简便、快速的特点，是产品质量控制和应用研究中较为理想的分析方法。