滇产头顶一颗珠化学成分研究

吴安超 丁 雄 刘 录 彭海燕 周志宏 杨竹雅*

1. 云南中医药大学 云南省高校中药饮片工程研究中心，云南 昆明 650500；2. 云南省中医医院，云南 昆明 650100

头顶一颗珠又名芋儿七、佛手七等，为百合科(Liliaceae)植物延龄草(TrilliumtschonoskiiMaxim.)的根茎[1]，是土家族民间使用的四大神药之一[2]。其性温，味甘、微辛，具有镇静、止痛、活血、止血的功效，主要用于治疗眩晕头痛，神经衰弱，腰腿疼痛，部分少数民族地区用于治疗月经不调等妇科血症疾病[3]。

百合科延龄草属植物富含甾体皂苷，全世界约有50种，我国有3种，即延龄草(T.tschonoskiiMaxim.)、吉林延龄草(T.kamtschaticumPal1.)和西藏延龄草(T.govanianumWal1.)[4-5]。文献报道表明[6-9]，其主成分包括延龄草皂苷、偏诺皂苷、薯蓣皂苷和克里托皂苷，尤其以偏诺皂苷含最高，值得深入研究及开发利用。云南为头顶一颗珠药材主产区之一[10]，但尚未发现滇产头顶一颗珠的化学成分和相关药理学研究报道。本文首次对滇产头顶一颗珠药材开展系统化学成分研究，为开发利用滇产药材资源提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Bruker AM-400/AM-500 Spectrometer核磁共振仪；VG Autospec 3000 system spectrometer质谱仪；高效液相色谱仪。

1.2 材料 反相ODS填料(Merck公司)；薄层色谱硅胶 H 和薄层色谱用硅胶板GF254(青岛海洋化工厂)；10%硫酸乙醇溶液；所用试剂均为分析纯。 试验用样品于2018年9月采自云南华坪县(栽培品)，由云南省药物研究所赵仁主任药师鉴定为百合科延龄草属植物延龄草TrilliumtschonoskiiMaxin的干燥根茎。

2 提取分离

取20 kg干燥延龄草，经适当粉碎，用10倍量70%乙醇冷浸提取5次，36、24、24、12、12 h/次，合并提取液，减压回流得总浸膏；浸膏加水10L，搅拌，静置，过滤，沉淀用5 L水洗涤，干燥，得690 g(F1段)；洗涤液与滤液合并，经大孔吸附树脂柱吸附，先用水洗脱，再用95%乙醇洗脱3倍柱体积，洗脱液压浓缩，得120 g(F2段)。

F2段用经硅胶柱色谱，以三氯甲烷-甲醇(7∶1～1∶1)为溶剂洗脱，合并后得到3个部分。第1部分经硅胶柱色谱(三氯甲烷-丙酮)、MCI(水-甲醇)和Sephadex LH-20(甲醇)纯化得化合物2(3.9 g)和化合物3(0.6 g)；第2部分经硅胶柱色谱(三氯甲烷-甲醇)、ODS(30%甲醇)反复纯化得化合物4(130 mg)、化合物5(100 mg)和化合物6(95 mg)；第3部分经硅胶柱色谱(三氯甲烷-丙酮)、MCI(甲醇-水)、ODS和Sephadex LH-20(40%甲醇)反复分离纯化得化合物1(2.4 g)、化合物7(180 mg)。

F1段经薄层色谱(TLC)分析，其主要成分为化合物1、2和3。

3 结构鉴定

化合物1：白色针晶。ESI-MSm/z：737 [M-H]-，提示相对分子量为738。结合碳谱确定分子式为C39H62O13。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：0.67(3H，d，J=5.8 Hz，H-27)，0.93(3H，s，H-18)，1.08(3H，s，H-19)，1.22(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，5.26(1H，brd，J=5.0 Hz，H-6)，1.76(3H，d，J=6.2 Hz，2′-O-Rha-H-6)，4.98(1H，brd，Glc-H-1)，6.37(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)见表1。以上数据与文献[11]报道基本一致，化合物1鉴定为(25S)-偏诺皂苷元-3-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物2：白色针晶。ESI-MSm/z：1030，结合碳谱确定分子式为C51H82O21。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：0.68(3H，d，J=5.4 Hz，H-27)，0.95(3H，s，H-18)，1.07(3H，s，H-19)，1.22(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，5.29(1H，brd，J=3.8 Hz，H-6)，1.58(3H，d，J=5.6 Hz，4″-O-Rha-H-6)1.75(3H，d，J=6.2 Hz，2′-O-Rha-H-6)，1.61(3H，d，J=6.5 Hz，4′-O-Rha-H-6)，4.84(1H，brd，Glc-H-1)，5.82(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)，6.38(1H，brd，4′-O-Rha-H-1)，7.05(1H，brd，4″-O-Rha-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)见表1。以上数据与文献[12-13]报道基本一致，化合物2鉴定为偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-α-L-吡喃鼠李糖基- [O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物3：白色针晶。ESI-MSm/z：883[M-H]-，提示相对分子量为884。结合碳谱确定分子式为C45H72O17。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：0.67(3H，d，J=5.3 Hz，H-27)，0.95(3H，s，H-18)，1.07(3H，s，H-19)，1.22(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，5.28(1H，brd，J=4.2 Hz，H-6)，1.75(3H，d，J=6.1 Hz，2′-O-Rha-H-6)，1.62(3H，d，J=6.1 Hz，4′-O-Rha-H-6)，4.82(1H，brd，Glc-H-1)，5.85(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)，6.39(1H，brd，4′-O-Rha-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)见表1。以上数据与文献[11]报道基本一致，化合物3鉴定为偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物4：白色针晶。ESI-MSm/z：899 [M-H]-，提示相对分子量为900。结合碳谱确定分子式为C45H72O18。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：0.68(3H，d，J=5.6 Hz，H-27)，0.94(3H，s，H-18)，1.07(3H，s，H-19)，1.22(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，5.26(1H，brd，J=4.3 Hz，H-6)，1.76(3H，d，J=6.1 Hz，2′-O-Rha-H-6)，4.92(1H，brd，Glc-H-1)，6.32(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)，5.05(1H，brd，6′-O-Glc-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)见表1。以上数据与文献[11]报道基本一致，化合物4鉴定为偏诺皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖基-(1→6)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物5：白色针晶。ESI-MSm/z：899 [M-H]-，提示相对分子量为900。结合碳谱确定分子式为C45H72O18。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：0.94(3H，s，H-18)，1.07(3H，s，H-19)，1.22(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，5.30(1H，brs，H-6)，1.78(3H，m，2′-O-Rha-H-6)，1.57(3H，m，4′-O-Rha-H-6)，4.81(1H，brd，Glc-H-1)，5.83(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)，6.37(1H，brd，4′-O-Rha-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)见表1。以上数据与文献[13]报道基本一致，化合物5鉴定为27-羟基-偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物6：白色针晶。ESI-MSm/z：915[M-H]-，提示相对分子量为916。结合碳谱确定分子式为C45H72O19。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：0.95(3H，s，H-18)，1.06(3H，s，H-19)，1.27(3H，d，J=6.5 Hz，H-21)，5.28(1H，brs，H-6)，1.74(3H，d，J=5.2 Hz，2′-O-Rha-H-6)，1.62(3H，d，J=5.2 Hz，4′-O-Rha-H-6)，4.82(1H，brd，Glc-H-1)，5.85(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)，6.38(1H，brd，4′-O-Rha-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)见表1。以上数据与文献[14]报道基本一致，化合物6鉴定为(24S，25S)-23，27-二羟基-偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物7：白色针晶。ESI-MSm/z：915[M-H]-，提示相对分子量为916。结合碳谱确定分子式为C45H72O19。1H-NMR(C5D5N，500 MHz)δ：1.01(3H，s，H-18)，1.14(3H，s，H-19)，1.26(3H，d，J=7.3 Hz，H-21)，5.26(1H，brs，H-6)，1.74(3H，d，J=6.2 Hz，2′-O-Rha-H-6)，1.62(3H，d，J=6.1 Hz，4′-O-Rha-H-6)，4.82(1H，brd，Glc-H-1)，5.84(1H，brd，2′-O-Rha-H-1)，6.38(1H，brd，4′-O-Rha-H-1)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)见表1。以上数据与文献[14]报道基本一致，化合物7鉴定为(24R，25R)-24，27-二羟基-偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷。

续表1

4 结论

本研究从滇产头顶一颗珠药材中分离得到了7个化合物，经结构鉴定为：偏诺皂苷元-3-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(1)，偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-α-L-吡喃鼠李糖基- [O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(2)，偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(3)，偏诺皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖基-(1→6)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(4)，27-羟基-偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(5)，(24S，25S)-23，27-二羟基-偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(6)，(24R，25R)-24，27-二羟基-偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷(7)，以上所有化合物均为偏诺甾体皂苷。

天然来源的甾体皂苷具有缩宫止血活性，常用于妇科血症的治疗。研究[15]表明，甾体皂苷中具缩宫止血药效的主要为17位羟基取代的偏诺皂苷元类型皂苷。以重楼为原料制备的宫血宁胶囊主要有效成分就是偏诺皂苷。但重楼中的主成分为薯蓣皂苷元类型皂苷，偏诺皂苷含量并不高，同时，重楼生长周期长，资源再生能力弱，价格逐年增加，成本问题严重制约了宫血宁胶囊市场应用及推广。目前从头顶一颗珠中分离得到的化合物约90个，以甾体皂苷为主，包括延龄草皂苷、偏诺皂苷、薯蓣皂苷和克里托皂苷等，尤其以偏诺皂苷含最高，此外还含有黄酮苷、倍半萜苷、苯丙素苷、多糖等[2]，值得深入研究及开发利用。

云南为头顶一颗珠主产区之一，本课题通过对滇产头顶一颗珠的化学成分开展研究，发现其中所含甾体皂苷类化合物均为偏诺甾体皂苷，目前尚未分离得到其他类型甾体皂苷，这一研究结果为获得高纯度天然偏诺皂苷资源提供了简便、经济的新途径。