免疫组化P16和ki67双表达在宫颈癌前病变及宫颈癌的临床分析

陈镯，耿晨，侍孝远

宿迁市第一人民医院妇科，江苏宿迁 223800

宫颈癌属于一种妇科常见的恶性肿瘤疾病，具有较高的发病率，且发病群体正呈年轻化趋势发展[1]。一旦患病，会使患者生命健康受到严重威胁。由于宫颈癌的发展速度比较缓慢，且发病较为隐匿，因此，在患病初期往往不会有较多显著的临床症状，这也对临床治疗工作带来较大影响[2]。针对这一现状，更应当对适龄女性实施及时地筛查及防治，使之生命安全能够得到良好保障[3]。相关报道显示，在开展宫颈癌早期诊断时，通过监测特异性生物标志物的方式可以具有较好的临床使用价值[4]。其中应用最多的生物标志物为P16，P16是在人染色体9p21中发现的第1个直接参与细胞周期调控的抑癌基因，无论是在宫颈癌前病变中还是在宫颈癌中都会具有高表达[5]。ki67能反映肿瘤细胞增值指数，其结果越高，即可表明肿瘤细胞增值速度更快[6]。为深入探讨二者双表达在临床中的应用价值，本文选取2016年1月—2021年12月宿迁市第一人民医院收治的70例宫颈癌前病变患者和50例宫颈癌患者进行研究。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院收治的70例宫颈癌前病变患者作为对照组，另选择同期收治的50例宫颈癌患者作为观察组。对照组年龄 21～64岁，平均（53.41±2.46）岁；病程3～15个月，平均（8.44±1.65）个月；根据宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）分级，包括34例Ⅰ级、22例Ⅱ级、14例Ⅲ级。观察组年龄31～71岁，平均（53.38±2.52）岁；病程3～16个月，平均（8.57±1.58）个月；根据病理类型划分，包括42例鳞癌、8例子宫颈腺癌。两组一般资料对比，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究已经过医院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：患者未接受过任何临床治疗（如化疗、放疗、手术、药物等）；患者经临床病理学诊断确诊；患者一般资料记录完整；患者知情该次研究，并签订知情告知书。

排除标准：患者合并严重感染性疾病；患者合并严重肝肾疾病或心脑血管系统疾病；患者合并其他恶性肿瘤疾病。

1.3 方法

获取所有患者的活检病理标本后，均以相同的方式对其实施石蜡切片处理，并在脱蜡1 d后实施免疫组织化学染色诊断。将标本完成水化处理后，将其浸泡在过氧化氢（浓度3%）中，以常温环境浸泡10 min，冲洗3 min，将纯血清进行封闭处理，时间为12 h。一抗处理样本包括P16多克隆抗体和兔抗人ki67，在恒温1℃的环境下孵育过夜。在第2天利用磷酸盐缓冲液进行充分冲洗，然后将P16多克隆抗体和兔抗人ki67滴加其中，在恒温37℃的环境下孵育1 h。再次通过磷酸盐缓冲液充分冲洗后，加入DAB显色剂，然后放置在显微镜下加以观察。将一抗利用磷酸盐缓冲液代替，并作为阴性对照。所有操作均按照标准流程以及说明书严格执行。

1.4 观察指标

以手术病理诊断为标准针对两组P16及ki67表达量展开对比分析，其中P16的判定标准如下：以无阳性细胞判定为（-），计0分；以阳性细胞分布＜1/4判定为（+），计1分；以阳性细胞分布≥1/4且＜1/2判定为（++），计2分；以阳性细胞分布≥1/2且＜3/4判定为（+++），计3分；以阳性细胞分布≥3/4判定为（++++），计4分。ki67的判定标准主要包括阴性（即无阳性细胞，计0分）、低表达（即阳性细胞分布＜1/3，计1分）、中表达（即阳性细胞分布≥1/3且≤2/3，计2分）、高表达（即阳性细胞分布＞2/3，计3分）。另外针对P16及ki67单一检测、联合检测结果以及诊断效能展开分析与研究。其中诊断效能包括敏感度[真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100.00%]、特异度[真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100.00%]、准确性[（真阳性例数+真阴性例数）/总例数×100.00%]。

1.5 统计方法

采用SPSS 19.0统计学软件处理数据，符合正态分布的计量资料以（）表示，组间差异比较进行t检验；计数资料以[n(%)]表示，组间差异比较进行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组P16及ki67阳性表达比较

观察组P16阳性表达、ki67阳性表达均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组P16及ki67阳性表达率对比[()，分]

表1 两组P16及ki67阳性表达率对比[()，分]

组别观察组（n=50）对照组（n=70）t值P值P16阳性表达3.03±0.24 0.52±0.12 75.379＜0.001 ki67阳性表达2.11±0.32 0.44±0.10 41.008＜0.001

2.2 P16、ki67单一检测及联合检测结果分析

联合检测真阳性检出率为96.00%（48/50），明显高于P16单一检测、ki67单一检测，差异有统计学意义（χ2=8.305、7.161，P=0.003、0.007）。见表2。

表2 P16及ki67单一检测、联合检测结果分析

2.3 P16、ki67单一检测及联合检测诊断效能比较

联合检测敏感度、特异度、准确性统计结果均明显高于P16单一检测、ki67单一检测，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 P16、ki67单一检测及联合检测诊断效能对比（%）

3 讨论

导致宫颈癌产生的主要原因为人乳头瘤状病毒（human papillomavirus, HPV）感染，一旦病毒入侵到患者机体后，会使其血清细胞因子产生改变[7]。在对宫颈癌患者实施临床诊断时，通常会采取阴道镜、宫颈细胞涂片、液基细胞学等方式完成[8]。由于宫颈癌病程进展速度相对较慢，因而其在宫颈癌前病变向宫颈癌发展的过程中，其肿瘤细胞往往会分泌出一些活性物质（即肿瘤标志物）[9]。该物质往往会在癌变宿主、癌变组织体液中存在，若为健康人群，其表达则相对较低；而在早期影像学无法检出肿瘤时，临床便可将其检出，因此对于提升临床预防及诊治效果意义重大[10]。

现阶段P16和ki67是临床中最为常见的宫颈癌诊断肿瘤标志物[11]。前者属于一种新型的抗癌基因，若其表达异常，则说明患者机体细胞存在恶性增殖的情况，进而诱发癌症的产生[12]。在对该指标进行检测后，可以有效判断患者肿瘤易感性，因此临床意义重大[13]。ki67属于DNA指数增值指标，可以明确反映细胞增值活跃性，并与宫颈癌细胞分化、转移等关系密切[14]。无论是宫颈癌前病变还是宫颈癌，P16、ki67均呈现出高表达的状态，特别是在宫颈癌患者机体中会有更为显著的异常升高趋势[15]。在本研究中，对照组患者P16阳性表达、ki67阳性表达均显著低于观察组患者（P＜0.05）。该结果与桂星星[15]在其报道中提出对照组ki67阳性表达、P16阳性表达均低于试验组（P＜0.05）的结果一致。由此可以看出，宫颈癌患者宫颈上皮细胞正常的细胞周期会遭到破坏，进而导致P16异常表达，最终使得细胞产生癌变[16]。同时也进一步说明ki67能够具体表现出宫颈癌细胞增值的活性程度，其同宫颈病变程度之间互为正相关[17]。另外，在本研究中，P16单一检测以及ki67单一检测的阳性检出率、敏感度、特异度、准确性均显著低于联合检测（P＜0.05），根据这一结果也可以说明使用免疫组化P16和ki67双表达的方式能够反馈宫颈癌的发生发展进程，联合检测对于促进疾病检出率地提升具有更多积极意义[18]。

综上所述，在对宫颈癌前病变患者以及宫颈癌患者实施临床诊断时，使用免疫组化P16和ki67双表达的方式具有较高的临床价值，即联合使用敏感度、准确性、特异性更高，适合进一步深入探讨与使用。