两种全自动化学发光免疫分析仪在梅毒检测中的价值

高欣 程静

梅毒是一种常见的传染病，一般通过母婴传播和性传播，传染性较强。在生活中，梅毒主要被称为变态梅毒，梅毒是指人体内发生梅毒时，会出现早产、流产或死产等情况，即使正确分娩，婴儿也有出现先天性梅毒的危险[1-2]，对孕妇和家庭生活都有影响。当患者发展成梅毒时，体内的梅毒螺旋周期会干扰中枢神经系统，导致患心血管疾病的风险提高，在严重情况下甚至会导致患者死亡和痴呆。梅毒是一种危害性很强的疾病，临床上对梅毒的筛查和诊断迫在眉睫。梅毒特异性抗体的产生和消退要早于非特异性抗体，有的患者在整个生命过程中都会产生特异性的抗体，因而特异性抗体的检测对于梅毒的诊断具有重要的意义，是一种很好的辅助诊断方法。因为不同的检验手段，其误检率和错误率也会存在差异[3-4]，本研究结合笔者多年的实际工作和现阶段的临床需要，运用多种方法对梅毒进行联合检验，建立一套合理的检验流程，目的是对梅毒螺旋体（treponema pallidum，TP）进行检测[5]，对比i2000全自动化学发光免疫微粒子分析仪的化学发光性能试验（chemiluminescencemicroparticle immunoassays，CMIA）和CentaurXP全自动化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA），降低临床中出现漏诊和误诊几率。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取南京医科大学友谊整形外科医院2020年1月—2021年12月疑似梅毒患者90例，作为本次研究对象，对90例患者分别使用i2000自动化学发光免疫分析（CMIA）和Centaur XP自动化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）对TPPA抗体进行血清学检测。样品吸光度与临界值之比（S/CO）≥1.0为阳性，并将结果与梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）结果进行比较。其中患者男43例，女47例，平均年龄（58.21±11.29）岁，90例患者中有90份血清标本。纳入标准：患者无其他性疾病；I2000型全自动分析仪对患者的首次阳性样品进行分析；Centaur XP全自动化学发光免疫分析仪对患者的首次阳性样品进行分析。排除标准：言语沟通障碍者；患有传染性性疾病者。本研究经医院医学伦理员会批准。

1.2 方法

本次仪器除了要采用Architect I2000自动化学发光免疫分析仪与匹配的TPPA抗体诊断试剂盒。Centaur XP全自动化学发光免疫分析仪（美国贝克曼库尔特有限公司）和TPPA抗体检测试剂盒；TPPA梅毒抗体检测试剂（日本富士日立株式会社）。对90例梅毒患者的血清标本分别进行CMIA、CLIA和TPPA并行梅毒血清学检测。严格按照套件说明书和仪器工作说明书 [标准操作流程（standard operating procedure，SOP）]进行操作，并进行内部质量控制和积极的室内控制，操作方法按照《梅毒非特异性抗体检测操作指南》[6]中的标准执行。

1.3 观察指标

（1）结果评估标准：CMIA、CLIA仪器测试以S/CO值≥1.0为阳性，S/CO＜1.0为阴性；如果敏感颗粒的孔隙呈不规则的集合，说明TPPA检测是阳性的。3种测试方法的结果应该严格记录。

（2）为了计算TPPA的正确性，将CMIA与CLIA按不同的S/CO进行比较，结果以CMIA与CLIA的S/CO值为1.00～2.99，3.00～4.99，5.00～6.99，7.00～8.99，9.00～10.99，＞10.99为界定，以计算TPPA的阳性符合率。阳性符合率计算公式为：阳性符合率=[阳性例数/（阳性+阴性）例数]，比较两种方法的灵敏度、特异度和准确度。灵敏度=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%;特异度=真阴性/(真阴性+假阳性)×100%。准确度=(真阳性+真阴性)/总病例数×100%。分别用CMIA和CLIA的S/CO值绘制受试者的工作特性曲线（receiver operating characteristic curve，ROC），计算（ROC）曲线下面积（area under curve，AUC），确定两种方法诊断梅毒的最佳截断值。

1.4 统计学方法

研究数据运用SPSS 20.0软件进行处理，计数资料以n（%）表示，行χ2检验，计量资料以（±s）表示，行t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 比较患者TPPA、CMIA、CLIA的检测结果

90例患者中，77例（85.56%）CMIA阳性；78例CLIA阳性，阳性率为86.67%；87例TPPA阳性率为96.67%。以TPPA作为确诊方法，CMIA和TPPA的阳性率相比较后，差异有统计学意义（χ2=6.860，P＜0.05），CLIA和TPPA的阳性率相比较后，差异有统计学意义（χ2=5.891，P＜0.05）。见表1。

表1 比较患者TPPA、CMIA、CLIA的检测结果（%）

2.2 患者不同S/CO值分段CMIA和TPPA阳性符合率

当S/CO值为1.00～8.99时，CMIA和TPPA均有阴性的结果。当S/CO值为≥9.00时，所有CMIA组的TPPA均呈阳性，见表2。

表2 不同S/CO值分段CMIA和TPPA阳性符合率

2.3 90例患者不同S/CO值分段CLIA和TPPA阳性符合率

当S/CO值为1.00～4.99时，CLIA和TPPA均有阴性的结果。当S/CO值＞5.00时，所有CLIA组的TPPA均为阳性，见表3。

表3 不同S/CO值分段CLIA和TPPA阳性符合率

3 讨论

梅毒是一种由梅毒螺旋引起的慢性疾病，近年来有向系统系疾病蔓延的趋势，梅毒可以通过性传播、母婴传播或者通过侵袭子宫黏膜危及孕妇健康。此外，通过输血可能会引发一定程度细菌感染，对疾病的恢复极其不利。患有梅毒的孕妇通过胎盘将先天性梅毒传播给胎儿。一般来说，在怀孕的前四个月，滋养层起到保护作用，使梅毒不易侵入，所以在妊娠的前4个月内不能感染胎儿[7-8]，但4个月后滋养层萎缩，导致梅毒螺旋体侵入后，感染胎儿，因此，快速准确的诊断非常重要。

早期梅毒的体液及细胞免疫反应对梅毒的清除有一定的影响，但后期的细胞免疫应答可能造成组织损害。患者螺旋中的表面蛋白抗原可分为不同类型的抗原，具有称为特殊抗原的特定特征，致病性螺旋体也有非特异性的脂质抗原，当螺旋藻进入体内时，会产生许多抗体，这些抗体可能对梅毒螺旋体的各种成分具有特殊性质，细胞免疫和体液免疫在梅毒螺旋感染在不同时期发生作用[9-10]。两种免疫的协同效应使人体免于再次感染，但与梅毒的临床表现相关联，血清学通过检查血液中是否存在特殊试剂和抗体来检测梅毒，信任度测试是一种检测抗脂蛋白的非特异性测试，称为初级筛选测试，CCIA和CLIA是对梅毒抗体的直接检测[11-12]，因此可用于试验。

人是TP存在的唯一载体。梅毒患者未接受任何治疗，一年之内是最具传染力的。因此，梅毒的血清学检测在临床上是非常有价值的。目前，临床中主要采用血清学对梅毒进行诊断。TP抗原会在被TP病毒感染时，激活机体的免疫应答。导致身体产生梅毒相关抗体。化学发光法是近几年在临床上广泛使用的一种简便、自动化程度高、成批检验的新技术，已广泛用于TP检测。TPPA将TP菌株的菌体组成明胶微粒[13]，使其与血浆中TP特异性的结合，具有较高的敏感性和特异性。本研究采用CMIA法和CLIA法对所有患者进行检测，然后使用TPPA方法验证检测结果，以评估血清学诊断技术的准确性。统计数据显示，CMIA和CLIA在诊断方面具有高度的准确性。在本次研究过程中，为了体现CMIA和CLIA血清学检测中的准确度，先将TPPA诊断作为“金标准”，再与CMLA核CLIA血清学进行比较。 90例患者中，77例（85.56%）CMIA阳性；78例CLIA阳性，阳性率为86.67%；87例TPPA阳性率为96.67%。以TPPA作为确诊方法，CMIA和TPPA的阳性率相比较后，差异有统计学意义（χ2=6.860，P＜0.05），CLIA和TPPA的阳性率相比较后，差异有统计学意义（χ2=5.891，P＜0.05）。当S/CO值为1.00～8.99时，CMIA和TPPA均有阴性的结果。当S/CO值为≥9.00时，所有CMIA组的TPPA均呈阳性。当S/CO值为1.00～4.99时，CLIA和TPPA均有阴性的结果。当S/CO值＞5.00时，所有CLIA组的TPPA均为阳性。有研究表示[14-15]，因为TPPA较为麻烦，而且不能实现自动化，所以会给工作人员带来更大的压力，而且在某种程度上延长了报告的周期。本研究结果表明，CMIA和CLIA都是理想的筛查方法。当仪器制造商提供的S/CO值为1.00作为临界值时，CMIA和CLIA的阳性符合率分别为57.14%和66.67%。当S/CO值为10.00时，两者的阳性符合率可达100%，当S/CO值＞10.00时，无需重新检查[16-19]。

综上所述，当梅毒的S/CO值＞10.00时，两种自动免疫化学发光分析显示出敏感性和特异性。当CMIA的S/CO值介于1.00至10.00之间，建议使用CLIA技术缩短样品的持续时间，并添加TPPA系统，以确保CLIA的S/CO值小于4.70时结果的准确性。