吉首地区1 316例女性HPV分型及病毒载量结果分析

陈滔 张绍花

子宫颈癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤。2020全球癌症统计报告[1]显示，2020年全球女性子宫颈癌新发病例604 127例，其中109 741例来自中国，子宫颈癌位于女性恶性肿瘤的第四位，发展中国家的发病率和死亡率远高于发达国家。1976年，Harald zur Hausen发现了人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）与子宫颈癌的因果关系，高危型人乳头瘤病毒持续感染是宫颈癌及癌前病变的致病因素[2]。为了优化诊断工具与筛查选择，促进宫颈癌预防并挽救更多生命，发布了第二版《宫颈癌前病变筛查和治疗指南》[3]，其强烈推荐将HPV-DNA检测作为首选的筛查方式，取代了至今沿用的醋酸染色目视观察（visual observation of acetic acid staining，VIA）或细胞学检查。从敏感性和特异性方面考虑，具有更高的性价比。HPV具体型别的感染和感染持续时间是宫颈病变发生及发展的2个关键因素，而HPV病毒的载量及病毒清除与预后关系的研究存在争议[4-6]。不同型别的HPV病毒载量与宫颈病变间的风险关系仍然需要大量细致的研究工作方得以探明。本研究采用对21种HPV病毒亚型进行分型并同时进行标准化定量检测，文章的研究结果为吉首地区女性HPV的主要感染类型为单一型感染，最易感亚型并非HPV16、18型，随着年龄的增长女性更易感HPV，需在防控工作中要引起重视。不同亚型感染与其病毒载量的关系有待进一步探究，为后期标准制订了借鉴内容，具体如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集整理2020年6月—2021年5月来吉首市人民医院妇科门诊接受同步HPV分型定量检测的14～79岁女性共1 316例，平均年龄（39.91±3.18）岁。同时追踪HPV检测结果为阳性的病例的TCT及在阴道镜下做多点活检的病理检查结果。本次研究经医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 同步HPV分型定量检测 本研究采用江苏硕世生物科技股份有限公司生产的HPV分型及定量检测试剂盒，利用多重实时荧光定量PCR检测技术实现了同步HPV分型与定量的检测。在短时间内准确地区分检验标本中21种HPV基因亚型（包括HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、26、82、73及HPV 6、11和81亚型），并通过单拷贝基因（管家基因）与待测细胞之间的线性关系获得单位细胞内HPV病毒亚型的载量——HPV基因拷贝数/每10万细胞。细胞单拷贝基因数测算样本中细胞数，获得同等细胞数中HPV的病毒量，进而同步对这21种HPV亚型病毒载量进行定量检测。

1.2.2 样本的采集 采样前，用棉拭子轻轻擦拭宫颈口过多的分泌物，将宫颈采样刷伸入宫颈口鳞柱上皮交界处，顺时针或逆时针旋转3～5圈采集宫颈脱落细胞，将其放入标有患者编号的取样管中，密闭送检。样本采集后及时检测，2～8℃保存3 d内完成检测，-20℃保存不超过12个月。样本避免反复冻融，冻融次数不能超过5次，采用冰袋低温运输不能超过3 d。

1.2.3 仪器及试剂 使用的主要检测设备为美国伯乐公司生产的CFX-96实时荧光定量聚合酶链式反应仪（polymerase chain reaction，PCR），检测试剂为江苏硕世生物科技股份有限公司生产的人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒（荧光PCR法），分析软件为江苏硕世生物科技股份有限公司自研的HPV核酸分型定量分析软件V1.0进行分型定量分析。将检出的HPV亚型对应的循环阈值（cycle threshold，CT值）及内参基因的CT值分别输入分析软件对应位置中，由软件自动分析计算出单位细胞内对应型别HPV感染的标准病毒载量。设备及试剂严格按照各自操作说明书使用，读取每次有效实验的分型及定量拷贝数结果。

1.3 统计学方法

采用SPSS 10.0统计软件进行数据分析，计数资料的表达方式为n（%），比较用χ2检验，计量资料的表达方式为（x-±s），比较用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

本研究共对1 316例标本进行21种HPV基因分型定量情况进行检测。其中发现有HPV感染者254例，感染率为19.30%。其中单一型别HPV感染人数190例，感染率为14.44%，感染人次数占总感染者74.8%，为主要感染方式。含至少16型HPV感染人数26例，感染率1.98%；含至少18型HPV感染人数6例，感染率0.46%。感染人次数最多的亚型为HPV52型，感染人次76例，感染率5.78%，占总感染者比例29.92%。吉首地区女性HPV感染总体分布情况见表1。

表1 吉首地区女性HPV感染亚型分布情况

根据年龄的不同，将受检的吉首地区女性分为低龄至老龄5个组别，分别与平均对照组进行比较，发现老龄组的HPV阳性率较平均对照组有显著提高，差异有统计学意义（P＜0.05）。吉首地区女性不同年龄组别HPV感染分布情况见表2。

表2 吉首地区女性不同年龄组别HPV感染分布情况

本研究对1 316例标本进行21种HPV基因分型定量检测。包含复合感染情况下，所有21种型别总感染频率为342次。选取同期10次实验室质控作为本次研究的质控对照组和感染频率超过10次的HPV亚型作为亚型测试组（它们感染频次由高至低依次为：HPV52、58、16、81、68、53、51、39、6。将各亚型依次分为亚型检测组1、2、3、4、5、6、7、8、9）进行比较分析。发现各亚型检测组的病毒载量均值较质控对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。吉首地区女性不同HPV亚型感染病毒载量情况见表3。

表3 吉首地区女性不同HPV亚型感染病毒载量情况

3 讨论

大量研究已经表明，高危型HPV的持续感染是宫颈癌发生的必要条件[7-9]。本研究发现吉首地区女性HPV感染主要为单一亚型感染，单一亚型的HPV感染使人们更容易对HPV的感染进行准确的处置，同时人们也需要对复合型HPV感染者引起足够的重视，复合型HPV感染情况相对复杂，需要更多的研究对其进行探索。

本研究显示吉首地区HPV感染人群中，HPV52、58型感染人数最多，成为最易感亚型，甚至超过16、18型感染人数，这在全国范围均具有普遍性，因此52型的HPV感染值得人们更加深入关注。

宫颈癌的癌前病变与年龄密切相关，本研究显示吉首地区女性受检者中≥60岁的老龄组HPV检测阳性率显著高于平均水平，差异有统计学意义（P＜0.05）。这可能受限于当地群众对于宫颈癌防治政策的认知程度，老年人更少接收到相关的政策信息，对于HPV检测不了解，一般待有了临床症状才去就诊，进而导致受检者阳性率较高[10]。另一方面，由于绝大多数HPV感染都是一过性的，机体能够对大部分的HPV自动清除[11]，老年人的机体免疫能力降低，对HPV清除能力下降也是导致老年人HPV感染率增加的重要原因。这表明在宫颈癌防治方面，人们需要更加关注老年人群体，做好政策宣传和定期筛查与回访。

HPV分型定量检测，其标本为受检者的宫颈脱落细胞，由于取样及送检保存的耗材相同，采样人员相对固定，且均经过标准的宫颈采样培训。因此固定人群使用固定耗材对HPV的定量检测结果的影响可忽略[12]。对所有阳性标本进行分析，发现此次吉首地区女性HPV感染亚型最多的为52型和58型，占所有阳性比例为22.22%和10.53%。52、58型同样有着较高的致癌风险，需及时有效筛查，可根据研究结果，按照不同亚型的易感程度进行进一步细化管理风险人群[13-14]。所有亚型的病毒载量值与试剂盒本身质控定量值相比或各亚型检测组之间相比差异无统计学意义（P＞0.05）。表明不同HPV亚型的感染所产生的病毒载量高低无显著差别。病毒载量的高低与不同HPV亚型感染及宫颈癌癌变的关系还有待更加深入研究。

高危型HPV的检测已被学术界认可为子宫颈癌防治最有利武器。2014年WHO 宫颈癌综合防治基本实践指南（第二版）指出，普及利用HPV检测筛查女性预防子宫颈癌，将大大节约医疗卫生系统的成本。同时近年来国际上有相关学者提出HPV的病毒载量是子宫颈癌发病的独立致癌因素[15]，尽早准确地进行HPV分型检测筛查，对宫颈癌的防治有着非常重要的意义[16-17]。虽然此次研究未发现不同亚型的感染与其载量间的直接差异关系，但随着研究的进一步深入，HPV感染期的病毒载量仍将成为子宫颈癌防治的重点关注要素之一。

综上所述，吉首地区女性HPV的感染以单一型感染为主，以HPV52型为最易感的亚型，且随着年龄的增长女性感染HPV的风险升高，因此在防控工作中需引起重视，不同亚型感染与其病毒载量的关系有待进一步探究。