化学发光法与乙肝病毒DNA 荧光定量在乙肝检测中的应用价值

袁桂英 罗润弟

（东莞市人民医院检验科，广东 东莞 523059）

乙型肝炎是全球第十大死亡原因，和肺结核、艾滋病一样发病率较高，是世界上最常见的传染病[1]。临床研究结果显示，全世界大约有3.5～4 亿人感染了乙型肝炎病毒，是艾滋病毒感染者人数的8 倍多。目前，临床检测HBV 的方法主要有化学发光酶免疫分析法（CLEIA）、荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、酶联免疫吸附法（ELISA）。ELISA 技术较为成熟，具有成本低、操作简单等优势，使用频繁[2]。乙型肝炎病毒血清学标志物有5 种，包括：乙型肝炎e 抗原（HBeAg）、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎核心抗体（HBcAb）、乙型肝炎e 抗体（HBeAb）、乙型肝炎表面抗体（HBsAb）。FQ-PCR 由于具有较高的特异性、灵敏度、准确性[3]；CLEIA 具有线性范围宽、有效期长、灵敏度高、自动化程度高以及特异性强等优点，在HBV 感染检测中效果显著[4]。为进一步研究上述措施的可行性，本文以322 例乙肝样本为例，分析上述方法在HBV 感染检测中的相关性，为疾病检测工作提供参考，实现疾病的有效抑制。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2021 年10 月至2021 年11 月我院乙肝样本322 例数据信息，其中：男238 例，女84例；年龄21 岁～87 岁，平均（30.49±0.15）岁。

1.2 方法 使用高通量实时荧光定量PCR 仪检测血清HBV-DNA 水平（型号：LightingCycler480；罗氏公司），试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司；使用全自动免疫分析仪（雅培公司，型号：i2000SR）及其原装配套试剂检测血清乙肝五项。每日执行室内质量控制，相关操作需严格按照说明书内容严格实施，每个监测批次都包含HBV 阳性定量参考品、阴性质控品的重复检测。

1.3 观察指标 分析HBV－DNA 阳性与乙肝五项阳性情况；HBeAg 阳性、HBeAg 阳性HBV－DNA 分布（低载量：1.00E＋0.2-1.00E＋04；中载量：1.00E＋0.4-1.00E＋07；高载量：1.00E＋07-＞1.1E＋08）情况。

1.4 统计学方法 使用SPSS26.0 软件处理，分析统计学处理结果，若结果显示P＜0.05，表示对比有意义，反之（P＞0.05）为无意义。计数资料检验方式为χ2，表示形式为（n%）；计量资料检验方式、表示形式分别为t、（。

2 结果

2.1 HBV－DNA 阳性与乙肝五项阳性：322 例样本中，大三阳标本109 例，小三阳标本163 例，上述所占比例最多，分别为33.8%、50.6%。见表1

表1 HBV－DNA 阳性与乙肝五项阳性

2.2 HBeAg 阳性、HBeAg 阳性HBV－DNA 分布情况：HBeAb 阳性、HBeAg 阳性HBV－DNA 载量分布对比显示，前者高于后者，差异分析结果有意义（P＜0.05）。见表2

表2 HBeAg 阳性、HBeAg 阳性HBV－DNA 分布情况

3 讨论

乙型肝炎也称为慢性乙型肝炎，是指乙肝病毒检测为阳性，疾病的持续时间超过半年，或发病日期还不清楚。常见病因为感染乙型肝炎病毒（HBV）、家族性传播、婴幼儿期感染病毒、缺乏预防意识、漏诊、免疫功能低下、既往有其他肝病史感染病毒者。乙型肝炎患者主要表现为腹胀、肝痛、疲乏、怕食、恶心、身体乏力、失眠、多梦、黄疸、肝区疼痛、肝脾大、肝外表现、肝纤维化等症状[5-6]。有的患者会出现肝脏肿大，中等硬度，伴有轻度压痛。病情严重的患者会有蜘蛛痣、慢性肝病、肝掌、脾肿大或肝功能异常，分为轻、中、重度。慢性乙型肝炎携带者为乙型肝炎病毒阳性，但无慢性肝炎症状。每年随访3 次以上患者血清ALT、AST 无异常，肝组织正常者正常。

目前，乙型肝炎的检测方法主要有ELISA、FQPCR、CLEIA 等，5 种乙型肝炎定量检测方法主要包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 和HBcAb[7-8]。临床研究结果显示，CLEIA 具有线性范围宽、灵敏度高、自动化程度高、特异性好、标记物效度长等特点；FQPCR 检测具有准确性、敏感性、特异性。上述检测措施已广泛应用于临床乙肝检测。荧光定量PCR 不仅是分子生物学的一种实验方法，也是实验室中常用的方法[9]。PCR 是对事物进行扩增，主要检测RNA、DNA、RNA。荧光定量PCR 很容易监测和定量，可以显示体内HPV 感染的数量。放大后，观察是阳性还是阴性，再看内容和拷贝数。病毒筛选就是筛选病毒的DNA。用聚合酶链反应（PCR）可以扩增DNA。根据底物的基本量，在扩增过程中可同时计算出含量，对病毒感染率高低进行定量观察。化学发光法非常实用和方便，是一种灵敏的检测病毒抗原和抗体的方法。由于其灵敏度高、检测时间短、分析方法简单快速、诊断范围广等优势，在临床上的应用较为广泛[10]。它可以取代放射免疫分析和酶联免疫吸附试验来检测体内的抗体和抗原。其原理是在一定条件下，样品中抗体和抗原的浓度与化学式的发光强度呈线性定量关系。该仪器通过检测系统的发光强度，直接测定抗原和抗体的含量。乙型肝炎化学发光法就是利用这一原理检测乙型肝炎五项，是一种定量检测方法。临床研究结果显示：建立一种线性范围广、灵敏度高、重现性好的HBV PCR 检测方法，可用于临床血清标本中HBVDNA 的定量检测。为进一步研究该方法提高HBV 各基因型的敏感性，稳定低浓度样品的准确性提供了可靠的依据。

乙型肝炎病毒检测HBsAg 是检测HBV 感染的重要指标。可反映患者早期HBV 感染情况，其含量与HBV 的传染性、复制水平无明显相关性。但能反映HBV 感染状态。相关研究显示，如果浓度高，意味着急性感染，在疾病的恢复期e 抗原浓度降低。血清乙肝病毒复制具有高度传染性，如果HBeAb 出现，表明乙肝病毒复制减少了，其传染性较弱，HBV 感染及其消退均是一个动态过程。在疾病的各个阶段，采用FQ-PCR 检测HBV DNA、CLEIA 检测乙肝五项肝炎，在判断乙型肝炎病毒感染方面具有良好的相关性。这可能是因为不同患者的免疫系统对HBV 的反应存在不同的差异，但五项乙肝定量检测结果与患者HBV DNA 载量无明显相关性。

HBsAg 能反映HBV 早期感染，是HBV 感染血清学检测的重要指标之一，但其内容与HBV 复制水平和传染性无关。研究结果显示，322 例样本中，大三阳标本109 例，小三阳标本163 例，上述所占比例最多，分别为33.9%、50.6%。DNA 载量较低，可能是HBV 早期感染。一般认为，感染HBsAg 的机体会产生核心抗体。其原因分析结果显示：HBV 基因变异的抗体、宿主存在免疫缺陷，不能产生对HBcAg 产生抗体、HBcAb 的假阴性检测。有资料显示，基因变异也是部分HBsAg 假阴性的原因。研究还发现，HBeAb 阳性低于HBeAg 阳性HBV－DNA 载量分布，分析结果有意义（P＜0.05）。HBcAb 浓度高提示乙肝急性感染，HBcAb 浓度降低，HBV DNA 负载级别相对较低，可能是乙肝疫苗注射后的正常反应。

HBV 感染和预后是一个动态过程。在判断乙肝病毒感染持续时间方面，FQ-PCR 检测到的HBV DNA 载量水平与CLEIA 检测到的乙肝五项均有良好的相关性。这可能与机体免疫系统及对HBV 的反应程度不同有关。乙肝五项定量结果均未发现与HBV DNA 载量直接相关。CLEIA 检测乙型肝炎的五种敏感性远高于传统ELISA 方法，可有效降低乙型肝炎；FQ-PCR 技术已被应用于乙型肝炎的早期诊断和疗效判断，但不排除药物对HBV-DNA 检测和病毒复制的干扰。HBV 的DNA 载量和乙肝五项更全面地反映HBV 的病程和预后，结合FQ-PCR 和CLEIA 对HBV 进行动态监测具有积极意义。

综上，CIEIA 检测在乙型肝炎患者乙肝五项病毒感染水平、荧光定量PCR 检测HBV DNA 之间具有良好的相关性，两种方法的联合应用能更好地反映患者的病情及预后，对针对性治疗措施的完善具有积极意义。