气相色谱法检测头孢呋辛钠原料药中2-乙基己酸残留量

惠建军，雍志林，王 策，师宝峰，彭 燕，林妮妮，董 颖

(北京新领先医药科技发展有限公司，北京 100094)

β内酰胺类药物成盐过程中，2-乙基己酸钠作为钠离子提供体被广泛应用。反应过程中2-乙基己酸钠转化成2-乙基己酸[1]。2-乙基己酸危害人体健康，尤其是对皮肤、黏膜具有刺激性作用。头孢呋辛为第二代广谱半合成头孢菌素[2]，因其对葡萄球菌和革兰阴性杆菌产生的β-内酰胺酶稳定，产生良好的抗菌作用，对头孢噻吩和头孢噻啶敏感的全部菌株几乎都有较强的抗菌作用，且对广泛的革兰阴性杆菌包括肠杆菌、吲哚阳性变形杆菌均有效。头孢呋辛钠疗效确切，肾脏毒性低，毒副作用小，临床广泛应用于气管炎[3-4]、肺炎[5-6]、女性生殖系统感染[7]等的治疗。头孢呋辛钠属于β-内酰胺类药物，成盐过程中存在引入2-乙基己酸的风险，其残留量影响头孢呋辛钠的质量，因此控制原料药中2-乙基己酸残留量检测至关重要。文献报道的2-乙基己酸检测方法有气相色谱法[1,7-10]、离子色谱法[11]等。《中国药典》2020版[12]四部通则中采用气相色谱检测β-内酰胺类药物中的2-乙基己酸含量，以此为依据，优化样品前处理方法的基础上，建立了气相色谱法检测头孢呋辛钠中2-乙基己酸残留量，方法操作简单，灵敏度高、准确性好，可应用于不同厂家生产的头孢呋辛钠原料药中2-乙基己酸的检测。

1 仪器与试药

头孢呋辛钠原料药(批号：A001、B001、B002)；2-乙基己酸(批号：GA190065、厂家：安耐吉[萨恩化学技术(上海)有限公司、纯度：99%])；3-环己基丙酸[批号：GA200167、厂家：萨恩化学技术(上海)有限公司、纯度：98%]；环己烷(批号：20200925、厂家：天津市富宇精细化工有限公司、级别：AR)；盐酸(批号：20200106、厂家：国药集团化学试剂有限公司、级别：AR)；超纯水(批号：20201121H、厂家：屈臣氏集团)。

气相色谱仪(美国安捷伦：8890；日本岛津：GC-2010Pro)；电子天平(赛多利斯十万分之一天平)；离心机(上海安亭科学仪器厂)；毛细管色谱柱(安捷伦：DB-FFAP 30m×0.32mm，1.0μm)；毛细管色谱柱(KB-Wax 30m×0.32mm，1.0μm)。

2 实验方法与结果

2.1 溶液的制备

内标溶液：精密称取3-环己基丙酸适量，用环己烷溶解并稀释制成每毫升环己烷含1mg的3-环己基丙酸的溶液。

盐酸溶液：精密量取盐酸适量，用超纯水溶解并稀释制成5%的盐酸溶液。

对照品储备液：精密称取2-乙基己酸适量，用内标溶液溶解并稀释制成每毫升含15mg的2-乙基己酸的溶液。

对照品溶液：将对照品储备液稀释10倍后，精密量取1mL，置含有4mL盐酸溶液的离心管中，摇匀，6000r/min离心7min，离心后取上层清液。

供试品溶液：取本品约300mg，精密称定，置含有4mL盐酸溶液的离心管中，涡旋2min后精密加入内标溶液1mL，摇匀，6000r/min离心7min，离心后取上层清液。

新时代的矿业发展模式应当是，不仅能为当代人提供物质资源，还不影响当代人与后人的生存环境和资源需要，科技含量高、资源消耗低、环境污染少的可持续发展模式。

2.2 色谱条件

升温程序：起始柱温150℃，维持5min，以20℃/min升温至220℃，维持5min；

进样口温度为200℃；检测器温度(FID)为300℃；分流比为10∶1；进样量为1μL；载气为氮气，流速为5mL/min。

2.3 线性范围及灵敏度

精密量取对照品储备液0.4、0.6、0.8、1.0和2.0mL，分别置10mL量瓶中，用内标溶液稀释至刻度，摇匀，得到5个浓度的系列溶液，按2.1 项下“对照品溶液”方法处理，分别精密量取1μL按气相条件进行分析，记录色谱图。以2-乙基己酸浓度为横坐标，以2-乙基己酸与3-环己基丙酸峰面积比值为纵坐标，进行线性回归，得到回归方程为Y=0.0009X+0.0133，r=0.9998。即2-乙基己酸在0.00152～3.04580mg/mL浓度范围内，线性关系良好。

按照制备对照品溶液的方法，配制溶液。逐级稀释，精密量取1μL按气相条件进行分析，当信噪比为5.4时，得到2-乙基己酸的检测限为0.46μg/mL。当信噪比为24.2时，得到2-乙基己酸的定量限为1.52μg/mL。

2.4 回收率与重复性研究

取头孢呋辛钠原料药300mg，精密称定，平分为12份，每组3份，每组精密加入2-乙基己酸浓度分别为0.75mg/mL、1.50mg/mL、2.25mg/mL的溶液，按2.1项下“供试品溶液”方法处理，精密量取各溶液1μL按气相条件进行分析，测定峰面积，结果如表1所示，回收率介于89.36%～100.81%之间，平均加样回收率为93.18%，RSD为4.55%，中浓度6份溶液重复性的RSD为4.17%(表2)。由结果可知，本法准确度较高，重复性好。

表1 加样回收率结果

表2 重复性结果

2.5 进样精密度研究

精密量取对照品储备液适量，用内标溶液溶解并稀释制成每毫升含1.5mg的2-乙基己酸的溶液，按2.1项下“对照品溶液”方法处理，精密量取1μL按气相条件进行分析，连续进样6次，测定2-乙基己酸与3-环己基丙酸峰面积比值RSD值为3.01%，保留时间RSD值为0.04%，精密度良好。

2.6 样品测定

测定不同批号的头孢呋辛钠原料药，测定结果见表3。

表3 样品检测结果

3 讨论

3.1 盐酸用量考察

按药典方法下，采用33%盐酸配制溶液并离心后，取上清液，平行处理6份样品，分别注入色谱仪，其内标物(3-环己基丙酸)峰面积呈增大趋势，导致回收率逐渐下降，由142.2%降至133.5%；同时平均回收率不符合要求，如表4所示。降低盐酸浓度至5%，对样品按2.1项下“供试品溶液”方法处理，无上述现象，如表5所示。

表4 33%盐酸处理后检测结果

表5 5%盐酸浓度处理后检测结果

按照头孢呋辛钠结构式，其应与盐酸按1∶2反应，药典中采用33%盐酸处理样品，此时头孢呋辛钠∶盐酸为1∶12，盐酸过量，我们降低比例至1∶3.6时，回收率结果较高浓度盐酸时好，推测可能的原因是盐酸浓度较高时，影响3-环己基丙酸在两相中的分配系数，使其分散不均匀所致。

3.2 方法优化

采用不同厂牌(DB-FFAP 和KB-Wax)的同类型色谱柱，其他条件不变时，2-乙基己酸与3-环己基丙酸的理论塔板数均大于5000、拖尾因子均小于2.0、分离度大于1.5，且峰形良好，说明本法在此条件下耐用性良好；

采用不同厂牌(美国安捷伦及日本岛津)的气相色谱仪，其他条件不变时，2-乙基己酸与3-环己基丙酸的理论塔板数均大于5000、拖尾因子均小于2.0、分离度大于1.5，且峰形良好，说明本法在此条件下耐用性良好；

综上，建立的方法操作简单、灵敏度高、专属性好，可以准确检测头孢呋辛钠原料药中2-乙基己酸含量。前处理方法降低了盐酸浓度，可以更好的保护毛细管色谱柱，且降低了分析成本。