多组织蜡块在常规HE染色中的质控作用

孙 炎，苟继周，李晓星，彭 程，张鸿英，周光德

HE染色是病理组织染色的基础，覆盖了大部分的常规病理技术工作，病理医师可进行免疫组化、特殊染色、原位杂交等检查。HE染色切片质量直接影响病理医师的判断，因此技术人员常在HE染色前进行预染色保障质量。许多医院病理科会使用预留的组织白片或者每天切片时先切一些组织片用来预染色，较为消耗人力、浪费载玻片及染色液等资源；同时由于切片中的组织种类少，而不能全面反应染色情况。本科室为提高染色效率和质量，使用多组织蜡块的切片染色，观察其在HE染色中的质量控制作用。

1 材料与方法

1.1 材料选取深圳市第三人民医院病理科取材后剩余的胎盘、乳腺、肝脏、子宫肌、结肠、扁桃体、甲状腺、阑尾、肺组织标本。

1.2 多组织蜡块制备把收集的组织分别切成大小0.7 cm×3 cm长条状，取1块胎膜组织切成大小5 cm×8 cm片状备用，将上述8种组织排列整齐在片状胎膜内，卷成羊膜卷后与常规标本一起行脱水、透明、浸蜡处理。包埋时用刀片把浸蜡后的羊膜卷两端稍作修剪，切成大小0.3 cm×0.5 cm组织块后包埋，切片厚3.5 μm[1]。

1.3 仪器与试剂染色机选用徕卡ST5020，封片剂选用徕卡CV5030，数字切片扫描仪选用麦克奥迪VM1000，Harris苏木精、水溶性伊红、碳酸锂、盐酸乙醇分化液，均购于珠海贝索公司。

1.4 方法设置染色机HE染色程序：二甲苯3次，每次5 min；无水乙醇3次，每次1 min；75%乙醇1 min，自来水洗1 min；苏木精13 min，自来水洗1 min；0.3%盐酸乙醇分化1 s，自来水洗1 min；碳酸锂饱和液1 min，自来水洗2 min；伊红5 min，自来水洗1 min；95%乙醇20 s，无水乙醇3次，每次1 min；二甲苯3次，每次3 min；中性树胶封固[2]。本实验分别在试剂不同条件情况下对切片进行HE染色，并比较染色结果。

2 结果

选取制作好的多组织蜡块切片，按照上述设定的染色程序在不同条件下进行HE染色(图1)。当使用新鲜染色试剂染色时：结肠肠黏膜蓝紫色，结构清楚(图2)，甲状腺组织红蓝对比明显(图3)；肝细胞胞核、淋巴细胞胞核蓝亮，染色质清晰；子宫肌纤维层次感较强，伊红着色能力及乙醇分化效果良好，分化及蓝化彻底。当盐酸乙醇分化液调低为0.1%浓度时，淋巴细胞胞核深染不清晰；当盐酸乙醇分化液调高为1.5%浓度时，细胞核蓝色过淡。苏木精染色超过4 000 张切片，肠黏膜上细胞核灰暗(图4)；伊红染色超过 4 000 张切片，肝脏细胞质红色极浅，背景暗蓝。第一缸脱水乙醇改为无水乙醇时，组织整体红染，红蓝对比不清晰；第一缸脱水乙醇浓度调低为75%浓度时，对伊红脱色较重，扁桃体隐窝上皮几乎伊红不着色。使用两周未更换的二甲苯脱蜡部分甲状腺胶质发白不着色(图5)。

①②③④⑤

3 讨论

影响HE染色的因素繁多，除了烤片的温度和时间、石蜡融点和浸蜡温度、实验室的温、湿度等因素外[3-5]，还应该考虑到染色过程中自来水的酸碱度等。偏酸和偏碱性的自来水冲洗切片，会导致组织pH环境发生变化，偏酸使得细胞核发暗紫色、染色淡，偏碱会让纤维、胞质等嗜酸性组织对伊红着色较为困难，易被低浓度乙醇脱色而着色较弱。我科室自来水pH值未到7.0，苏木精染色效果不佳，技术组针对偏酸环境问题，设置多组织对照，改良染色程序，减短水洗时间，减少苏木精配方里冰醋酸的量，降低盐酸乙醇分化液浓度，细胞核染色效果明显提升。此外，在染色机自来水槽里使用加热铝棒加温，使之成微弱碱性，或依据自己实验室环境选择合适种类的苏木精，均可解决染色问题[6]。所以，不能仅仅照搬其他实验室的操作流程、试剂配方直接应用到实验中，应根据自己实验室环境设置质控体系来解决染色问题。还可以使用多组织蜡块判断染色试剂的质量及染色程序设置是否合适，如肠黏膜上皮、子宫肌纤维等组织可以观察伊红着色强度、乙醇分化程度、自来水pH值是否偏碱；扁桃体、肝细胞核等嗜碱性细胞能观察胞核苏木精染色情况，可以推算苏木精染液的老化、盐酸乙醇分化液浓度、蓝化液和自来水的pH值是否达标；阑尾、甲状腺组织可反应伊红苏木精染色红蓝对比度情况。

多组织蜡块在特殊染色的质控中也可有较大的发挥空间。如多组织中的各种纤维成分含量丰富，对Masson染色、网状纤维染色、弹力纤维染色等具有较好的质控效果。每种真菌对不同染料的着色亲和度不同，如曲霉菌在六胺银染色里着色时间多于其他真菌1倍时间，我们可以针对性的收集隐球菌、曲霉菌、马尔尼菲青霉菌等阳性组织标本制作蜡块，用作各种真菌染色如PAS染色、六胺银染色、爱先蓝染色等特殊染色方法的阳性对照[7]。部分肝病患者组织中可见多种色素及金属沉积，可以用作胆色素、脂褐素、铜染色、铁染色等染色的阳性对照[8]。

多组织蜡块通常作为免疫组化阳性对照使用，但在日常工作中，我们发现多组织蜡块切片可替代其他方法来作为HE预染色的质控。在HE染色前，只需要使用1～2张多组织蜡块切片上机染色，便可观察染色效果，节约成本的同时操作简单便捷，有临床应用价值。