苗药地瓜藤的理化鉴别及其总皂苷含量测定

徐 锋 吴 洁 陈 滕 张 梅 黄旭龙 吴红梅

贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025

苗药是指在苗岭山脉、乌蒙山脉、武陵山脉、鄂西山脉及大庙山脉的苗族聚居地种植、生长的中草药[1]。苗药与中药的药性、药物分类等都有较大的区别，如苗药的药性体现在“五经”“五性”“热药”“冷药”上[2]，而中药的药性则体现在“四气五味”“升降浮沉”“归经”“毒性”等方面。苗药地瓜藤为桑科植物地瓜榕(FicustikouaBur.)的茎、叶，其味苦，性寒，为苗族人民常用药材，具有清热利湿、活血通络、解毒消肿的功效，主治肺热咳嗽，痢疾，水肿，黄疸，风湿疼痛等[3]。研究[4-8]表明地瓜藤具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性，具有良好的开发应用价值。而关于地瓜藤的化学研究报道相对较少，分离得到的地瓜藤成分主要为三萜皂苷类、黄酮类、甾体类、香豆素类和有机酸类等[9]。但地瓜藤的整体化学组成和皂苷含量情况尚未见报道，不利于民族药地瓜藤的进一步开发与应用。鉴于此，研究鉴定了地瓜藤的化学组成，并对不同产地地瓜藤药材中的总皂苷进行了测定与评价。

1 仪器与材料

UV-6100S紫外-可见分光光度计(上海元析仪器有限公司)，HH-4恒温水浴锅(上海力辰邦西仪器科技公司)，FA1004B电子天平(上海市安亭电子仪器厂)，800Y粉碎机(永康市铂欧五金制品有限公司)，DZF-O真空干燥箱(上海贺德实验设备有限公司)。

齐墩果酸(批号：H04J9Z62784，上海源叶生物有限公司)，地瓜藤药材经贵州中医药大学生药实验室王祥培教授鉴定为桑科植物地瓜藤(FicustikouaBur．)的干燥茎、叶，来源见表1。其余试剂均为分析纯。

表1 样品来源信息表

2 方法与结果

2.1 地瓜藤的理化鉴别 称取地瓜藤药材粉末10 g，置于250 mL锥形瓶中，加水100 mL，常温下浸渍 24 h，滤过。剩余药渣再加水30～40 mL，在60 ℃水浴上加热1 h，滤过，取续滤液作糖、蒽醌、香豆素及内酯、黄酮、鞣质、生物碱、皂苷和强心苷类的鉴别研究，以蒸馏水作空白对照。结果表明地瓜藤中含有糖、香豆素、黄酮、皂苷和强心苷类成分(表2)。

表2 化学成分定性检识结果

2.2 地瓜藤总皂苷的含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品0.1002 g，置容量瓶中加甲醇定容至 50 mL，即得浓度为2.004 mg/mL的齐墩果酸对照品溶液。

2.2.2 地瓜藤供试品溶液的制备 精密称取地瓜藤粉末适量，用95%甲醇回流提取90 min，提取3次，提取完成后合并滤液，水浴挥干，然后甲醇定容至刻度，即得地瓜藤供试品溶液。

2.2.3 波长的选择 制备好的齐墩果酸对照品溶液和地瓜藤供试品溶液，在紫外-可见分光光度计上进行扫描，发现在514 nm处有最大吸收波长，故选择514 nm为本实验的测定波长。

2.2.4 线性关系 用0.1 mL的移液管精密移取齐墩果酸对照品溶液0.0350、0.0450、0.0550、0.0650、0.0750和0.0850 mL分别置于5 mL容量瓶中，精密加入香草醛-冰醋酸(25 mg香草醛加冰醋酸定容至5 mL，即得)0.2 mL，然后加高氯酸0.8 mL，混匀，置60℃水浴加热15 min，立即用水冷却5 min，加入4 mL的冰醋酸，摇匀，静置5 min后，在514 nm处测定吸光度，以齐墩果酸的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标计算线性回归方程和相关系数。结果如图1所示。

图1 齐墩果酸的标准曲线图

2.2.5 精密度考察 精密吸取同一浓度齐墩果酸对照品溶液，连续测量6次，计算其相对标准偏差(RSD)。平均吸光度为0.5011，RSD值为0.11%<2.00%，表明方法的精密度良好。

2.2.6 重复性考察 取同一批次的样品6份，分别精密称定，提取制备，然后对这6批样品进行平行试验，测其吸光度。其RSD值为2.20%<3.00%，表明方法的重复性良好。

2.2.7 加样回收实验 取同一批次的地瓜藤粉末适量，加入齐墩果酸对照品溶液，然后进行提取、制备和计算后，根据回收率= (A-C)/B×100%(A为加入对照品后测得的量，B为加入对照品的量，C为供试品中所含的量)，计算其回收率。结果见表3。

表3 加样回收率实验的结果 (n=6)

2.2.8 样品含量测定 分别精密称取不同批次干燥至恒重的地瓜藤粉末适量，按确定的提取和显色方法测量，并根据标准曲线的回归方程计算，以地瓜藤干燥品计算各批次药材中总皂苷的含量，结果见表4。不同产地的地瓜藤总皂苷的含量差异较大，这可能与其产地的气候、土壤和光照等因素有关。

表4 不同产地地瓜藤皂苷含量的测定结果

3 讨论

民族药地瓜藤的理化鉴别表明地瓜藤含有糖类、香豆素类、黄酮类、皂苷类和强心苷类成分，但是目前的报道主要集中于三萜皂苷类、黄酮类、甾体类、香豆素类和有机酸类成分，本次的鉴别研究结果可为苗药地瓜藤的化学研究提供一定的参考。现代研究[10]发现中药中总皂苷具有较好的降血脂、降血压、抗炎和抗氧化等药理作用，提示地瓜藤总皂苷可能为其主要的药效物质基础。

地瓜藤总皂苷含量测定的研究中，本文分别考察了提取方式、时间、次数、溶剂和溶剂浓度等。对于提取方式的考察(超声、回流)，发现回流提取效果好于超声提取；考察提取时间发现，90 min 的提取效果好于60 min，能保证地瓜藤皂苷成分提取完全；对于提取次数，考察了提取1次、2次、3次和4次的效果，发现提取3次已经将药材中皂苷提取完全；对于提取溶剂和溶剂浓度，考察了乙醇和甲醇的提取效果及溶剂不同浓度(30%、50%、70%和95%)的提取效果，发现95%甲醇的提取效果较好。

实验利用香草醛-冰醋酸-高氯酸比色法对不同产地地瓜藤中总皂苷的含量进行测定。为了能够保证实验的灵敏度，所用的显色剂必须要现配现用，且必须要严格保证加热的温度与显色时间。在测定过程中，显色后的供试品溶液稳定性良好，能够满足实验测试需要。不同产地地瓜藤的提取制备以及含量测定要保持一致，防止实验时产生过失误差而导致实验数据发生变化。依据地瓜藤中总皂苷的测定结果可知，在所测的11个不同产地地瓜藤的总皂苷含量相差较大，其中含量最高的是重庆市永川区陈食镇双河村为38.02 mg/g，含量最低的是重庆市永川区朱龙花村为11.27 mg/g。地瓜藤的总皂苷含量可能与其生境相关，也提示地瓜藤药材的质量差异较大，需要引起重视，该结果也与课题组前期研究和文献报道结论相符[11-12]。

苗药具有应用鲜品的特色，故贵州省地方标准收载地瓜藤药材为其新鲜或干燥地上部分[13]。鲜品和干品所含成分是否存在较大差异，尚未得到解答。此外，本研究所建立的地瓜藤总皂苷含量测定方法是否适用于地瓜藤鲜品，仍需进一步研究。在实验过程中发现地瓜藤药材容易霉变，有报道[14]猪饲喂霉烂地瓜藤会引起中毒。因此，质量控制是资源丰富的地瓜藤开发与应用的关键环节，具有重要的现实意义。