红豆杉对糖尿病肾病大鼠肾功能的影响

熊艳文 李梦可 周平乐 周圆圆

上海市普陀区利群医院,上海 200333)

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病微小血管并发症之一，其主要表现为进行性蛋白尿和肾功能衰退，最终发展为终末期肾病[1]。随着人们生活水平的提高和生活习惯的改变，有调查估计全球糖尿病患者的患病率由2000年的2.8%上升到到2030年的4.4%，人数也由2000年的1.71亿上升到2030年的3.66亿[2]。DN 发病机制复杂，其中涉及糖代谢紊乱、肾脏血流动力学改变，多种细胞因子及遗传背景等。本实验采用单侧肾脏结扎后STZ腹腔注射建立糖尿病肾病大鼠模型，观察红豆杉对DN大鼠血尿液生化指标的影响，探讨红豆杉对DN肾功能的保护作用，以便为中医药防治糖尿病肾病提供更好的方法和实验研究依据。报告如下。

1 材料与方法

1.1实验材料 选用SD大鼠雌性40只，体重(200±20)g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，实验动物生产许可证号：SCXK(沪)2002--0001。适应性平衡饲养1周后，用于试验。药物与试剂为：红豆杉购自上海信德中药公司饮片厂，由上海市普陀区利群医院中药房采用水煎法制成每毫升含生药量0.1g的中药浓缩液体。糖脉康颗粒(四川宝鉴堂药业有限公司，批号181002(120))，5g/袋；拜糖平片(拜耳医药保健公司，批号BJ44669)50 mg/片。链脲佐菌素(STZ)购自美国Sigma公司，-20℃保存，临用前用pH4.5 的柠檬酸缓冲液配制为1%的应用液；尿蛋白(Urine protein,Upro)定量试剂盒购自南京建成生物工程研究所。戊巴比妥钠购自中国医药(集团)上海化学试剂公司(进口分装)，临用前用生理盐水配成3%的浓度待用。

1.2方法

1.2.1糖尿病肾病模型制作 40只雌性SD大鼠，适应性饲养1周后，禁食12 h，均腹腔注射3%的戊巴比妥钠溶液45 mg/kg进行麻醉。确认麻醉后，随机抽取8只作为假手术组。其余为模型组，行左侧肾脏结扎术。术后第14天，各组大鼠禁食18 h后，大鼠一次性腹腔注射1%STZ溶液55 mg/kg。假手术组大鼠一次性注射同等剂量的柠檬酸缓冲液。STZ注射后第3天测血糖，计算尿量，测尿蛋白，并以非空腹血糖>16.6 mmol/L，尿量>原尿量150%，尿蛋白排泄>20 mg/24h为成模标准。

1.2.2分组与给药 将40只实验动物按体重随机分成五组，每组8只。分别为A组：假手术组；B组：模型对照组；C 组：拜糖平组；D组：糖脉康组；E组：红豆杉组。STZ注射后第8天开始C、D和E组每日灌胃喂药，C组将拜糖平研磨溶于生理盐水中，按14 mg/ kg给药，D组给予4.5g/kg糖脉康冲剂，E组给予3.25g/kg红豆杉水煎剂，A组和B组大鼠每日给予同体积的饮用水。

1.2.3生化指标检测和标本提取 (1)血糖：给各组大鼠灌胃治疗之后，分别于灌胃后的第1周、3周、6周时尾静脉采血，测定大鼠血糖。(2)尿液：第6周末，用代谢笼收集大鼠24 h尿液，在代谢笼收集大鼠尿液期间禁食不禁水，收集到大鼠尿液之后，记录各组大鼠尿量，然后用低温离心机3 000转10 min低速离心，吸取上层尿液，将收集到的尿液测定大鼠24 h尿微量白蛋白(ELISA试剂盒测定，检测严格按照说明书)。(3)血液：6周末，用3%异戊巴比妥钠麻醉大鼠后，用固定板固定大鼠，打开腹腔，分离腹主动脉，用一次性注射器腹主动脉取血，摘取两肾，去除包膜，称取右肾重量，所采血液经低温冷冻离心机3 000转10 min低速离心，分离血清用于测定血肌酐Scr、血尿素氮BUN。

2 结 果

2.1各组大鼠6周后体重、肾重指数、24h尿微量白蛋白排泄率(UAER)情况 造模成功6周后，各模型组与正常组大鼠相比较，体重均明显下降，肾重指数和24h微量白蛋白排泄率明显上升，差异有统计学意义(P<0.05)。各模型组之间比较，治疗组的体重均明显高于模型对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，治疗组中红豆杉组体重高于拜糖平组和糖脉康组，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗组的肾重指数和UAER均低于模型对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组中比较，红豆杉组肾重指数和UAER低于其他二组，差异有统计学意义(P<0.05)，而其他二组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。说明红豆杉能够有效降低肾重指数、降低蛋白尿。见表1，图1-3。

表1 6周末各组大鼠体重、肾重指数、24h尿微量白蛋白排泄率的比较

图1 各组大鼠体重比较 图2 各组大鼠肾重指数比较

图3 各组大鼠24h尿微 图4 各组大鼠血肌酐比较 量白蛋白排泄率比较

2.2各组大鼠6周后血尿素氮、血肌酐、血糖情况 造模成功6周后，各模型组与正常组大鼠相比较，血尿素氮、血肌酐、血糖均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。模型组中，模型对照组的各项指标均明显高于其他三组，差异有统计学意义(P<0.05)。拜糖平组与糖脉康组两组组间比较各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。红豆杉组在血肌酐和血尿素氮指标上均明显低于拜糖平组和糖脉康组，差异有统计学意义(P<0.05)；而在降低血糖指标上与其他两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。故红豆杉组能明显降低血尿素氮、血肌酐，且效果优于拜糖平组和糖脉康组。见表2，图4-6。

表2 6周末大鼠血肌酐Scr、尿素氮BUN、血糖的比较

图5 各组大鼠血尿素氮比较 图6 各组大鼠血糖比较

3 讨 论

糖尿病肾病属于现代医学的病名，在祖国传统医学中并无明确的记载，而历代医学著作中 “消渴”“水肿”、“水病”、“胀满”、“尿浊”、“关格”等病名与其甚为相似。其病因以禀赋不足、饮食失宜、情志失调、劳逸失度、失治误治、六淫侵袭等为主。本虚标实，虚实夹杂为其主要病机[3]。

红豆杉味甘、微苦，性平，入肺、胃、大肠经，红豆杉具有解毒散积、活络止痛、利水消肿的功效。现代药理学研究发现，红豆杉具有降血糖、抗氧化和抗应变性等多方面药理作用[4]，而其中起主要降糖作用是红杉醇。早期的研究表明：红杉醇能显著降低糖尿病模型高血糖、抑制肝糖原分解和葡萄糖吸收、降低血脂、改善自由基代谢和保护胰岛β细胞，而对正常小鼠血糖没有影响[5]。梁敬钰等[6]报道：从红豆衫等植物中提取的肌醇衍生物具有良好的降血糖作用，能显著降低由四氧嘧啶诱发糖尿病小鼠的高血糖，能显著降低肾上腺素诱发的高血糖，并使低下的肝糖原回升，能抑制葡萄糖的吸收，对葡萄糖引起的血糖升高有显著的耐糖作用，能保护胰岛细胞。

本实验雄性SD大鼠采用单侧肾脏结扎后STZ腹腔注射(55 mg/kg)的方法制作糖尿病肾病模型，在造模成功后，模型组即出现多饮、多食、体重降低等症状，在实验的后期，模型组大鼠也出现了毛发暗淡、精神萎靡等表现，部分模型组大鼠还出现了白内障等眼球改变，提示采用此方法能够成功的建立糖尿病肾病大鼠模型，能够表现出一些糖尿病肾病的病理改变和症状表现。

本实验测量血液和尿液等生化指标，发现模型组与正常组相比，体重明显减轻，肾重指数明显升高，红豆杉组、拜糖平组、糖脉康组与模型对照组相比，体重升高，肾重指数明显降低；而红豆杉组体重高于拜糖平组和糖脉康组，肾重指数低于其他两个治疗组，差异有统计学意义。血糖、BUN、Scr、UAER等生化指标也显示：模型组与正常组相比，上述指标都明显升高；红豆杉组、拜糖平组、糖脉康组上述指标均低于模型对照组；而红豆杉组在血肌酐和血尿素氮指标上均明显低于拜糖平组和糖脉康组，差异有统计学意义；而在降低血糖指标上与其他两组比较无明显差异。拜糖平组与糖脉康组之间上述指标比较均无差异。提示红豆杉能够有效降低肾重指数、降低蛋白尿，对糖尿病肾病大鼠肾功能有一定的保护作用。