万寿菊提取物对太行鸡生产性能、蛋品质、免疫功能和抗氧化能力的影响

陈祥宇 孙二东 陈一凡 张 丞 王德贺 郝二英 周荣艳 张 波 邸科前 陈 辉*

(1.河北农业大学动物科技学院，保定 071001；2.河北桃木疙瘩农业科技股份有限公司，保定 071000；3.河北大学基础医学院，保定 071000)

叶黄素是四萜(C40)多烯烃类含氧衍生物，别名“万寿菊花素”，广泛存在于玉米、蔬菜、万寿菊花等多种天然饲料原料中[1]。万寿菊为菊科万寿菊属一年生草本植物，是提取叶黄素及类胡萝卜素的主要原料。其中，万寿菊花中的叶黄素酯化形式结构较稳定，更符合市场需求，因此目前天然叶黄素大多数都是从万寿菊中提取[2]。万寿菊提取物作为一种绿色安全无残留的天然含氧类胡萝卜素类着色剂越来越受到人们的重视。大量研究表明，叶黄素具有抗氧化、延缓衰老、预防心血管疾病、增强机体免疫力、保护视觉等多种生物学功能[3-6]。家禽不能自行合成叶黄素，因此可通过在蛋鸡饲粮中添加叶黄素来改善蛋黄颜色，提高机体抗氧化能力，增强机体免疫功能。目前，大多数研究都集中在万寿菊提取物对蛋鸡蛋黄着色、肉鸡生长性能及着色效果的影响方面，关于万寿菊提取物对蛋鸡生产性能、抗氧化和免疫功能等方面影响的研究较少。太行鸡是河北省首个通过国家畜禽遗传资源委员会鉴定的地方鸡品牌，为肉蛋兼用型地方品种，其具有抗病力强、耐粗饲、蛋肉品质鲜美等特点，越来越受市场青睐。本试验通过在饲粮中添加不同水平的万寿菊提取物，探讨其对太行鸡生产性能、蛋品质、免疫功能和抗氧化能力的影响，以期为万寿菊提取物在太行鸡生产中的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物及材料

本试验选用56周龄健康状况良好、体重及产蛋率相近的太行鸡288只，饲养试验在河北桃木疙瘩农业科技股份有限公司进行。本试验所用万寿菊提取物购自某生物科技集团股份有限公司，主要成分为天然叶黄素(源自万寿菊)，载体为石粉、二氧化硅，该产品成分分析保证值：叶黄素含量≥20 g/kg、水分含量≤8.0%。

1.2 试验设计

将288只体重及产蛋率相近的太行鸡随机分为4组，每组4个重复，每个重复18只鸡。对照组饲喂基础饲粮，3个试验组分别饲喂在基础饲粮中添加100、200和300 mg/kg万寿菊提取物的试验饲粮。预试期7 d，正试期28 d。太行鸡采用3层阶梯笼养，每日08:00、15:00分别饲喂1次，自由采食和饮水。光照强度为15 lx，光照时间为16 h，鸡舍温度在5 ℃左右。每天观察太行鸡的采食、粪便和健康状况，按正常免疫程序进行免疫接种。试验期间太行鸡所饲喂基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %

1.3 测定指标与方法

1.3.1 生产性能

在相同管理条件下，以重复为单位，记录每天产蛋总数和总蛋重；每隔1周测定饲粮消耗量，计算平均蛋重、产蛋率、平均日采食量。

1.3.2 蛋品质

于试验第14和28天，每个重复随机取3枚蛋进行蛋品质测定。采用蛋壳强度分析仪(EFR-01,以色列)测定蛋壳强度；使用罗氏比色扇测定蛋黄颜色；采用电子数显千分尺(SYNTEK-2001,中国)测定蛋壳厚度，剥离蛋壳膜后，取钝端、锐端、中间部位3点进行测定，取平均值；采用蛋形指数测定仪(NFN385,以色列)测量鸡蛋长径和短径，长径与短径之比即为蛋形指数；采用蛋品质分析仪(EA-01,以色列)测定蛋白高度及哈氏单位。

于试验第14和28天，每个重复随机取3枚蛋，测定鲜蛋蛋黄中叶黄素和玉米黄质的含量。叶黄素含量测定参见《GB 5009.248—2016》[7]，玉米黄质含量测定参见孔凡华等[8]。

1.3.3 血清免疫指标

于试验第14、28天，从每个重复选取2只体重相近的母鸡，颈静脉采血收集于离心管中。将采集的血液以3 000 r/min离心15 min，分离并收集上层清液于-20 ℃保存待测血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)含量。上述指标测定所用试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司，按照说明书进行操作。

1.3.4 肝脏抗氧化指标

于试验第28天，从每个重复选取2只体重相近的母鸡，禁食12 h后进行屠宰，剖开腹腔，采集肝脏，将采集的肝脏样品包于锡箔纸内，液氮速冻后转移至-80 ℃冰箱保存待测肝脏中丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。上述指标测定所用试剂盒均购自上海江莱生物科技有限公司，按照说明书进行操作。

1.4 数据处理与分析

试验数据先用Excel 2016进行整理，再采用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，并采用Duncan氏法进行组间多重比较，以P<0.05表示差异显著，P>0.05表示差异不显著，结果用平均值±标准差来表示。

2 结 果

2.1 万寿菊提取物对太行鸡生产性能的影响

由表2可知，第1～28天时，与对照组相比，各试验组的平均日采食量无显著变化(P>0.05)；200 mg/kg万寿菊提取物组的产蛋率及平均蛋重显著升高(P<0.05)。

表2 万寿菊提取物对太行鸡生产性能的影响Table 2 Effects of marigold extract on performance of Taihang chickens

2.2 万寿菊提取物对太行鸡蛋品质的影响

由表3可知，第14天时，与对照组相比，饲粮中添加不同水平万寿菊提取物对蛋重、蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋壳厚度、蛋形指数和哈氏单位均无显著影响(P>0.05)。第28天时，与对照组相比，饲粮中添加不同水平万寿菊提取物对蛋重、蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋形指数和哈氏单位均无显著影响(P>0.05)，但均可显著增加蛋黄颜色(P<0.05)。

表3 万寿菊提取物对太行鸡蛋品质的影响Table 3 Effects of marigold extract on egg quality of Taihang chickens

续表3时间 Time指标 Indexes对照组 Control group万寿菊提取物添加水平 Marigold extract added levels/(mg/kg)100200300P值 P-value第28天 Day 28蛋重 Egg weight/g50.38±4.6150.18±2.6849.93±3.0148.91±3.400.750蛋壳强度 Eggshell strength/N43.58±6.2742.26±8.9642.65±10.8541.70±9.480.964蛋黄颜色 Yolk color11.50±1.09b13.25±0.97a13.58±0.90a13.67±1.07a0.001蛋壳厚度 Eggshell thickness/mm0.36±0.010.36±0.030.36±0.000.34±0.050.636蛋形指数 Egg shape index1.31±0.051.30±0.031.31±0.031.30±0.040.643哈氏单位 Haugh unit84.72±6.3985.04±4.1285.19±3.9584.19±3.950.959

2.3 万寿菊提取物对太行鸡蛋黄中叶黄素及玉米黄质含量的影响

由表4可知，第14天时，与对照组相比，饲粮中添加不同水平的万寿菊提取物对太行鸡蛋黄中玉米黄质含量没有显著影响(P>0.05)；饲粮中添加300 mg/kg万寿菊提取物能够显著提高太行鸡蛋黄中叶黄素含量(P<0.05)。第28天时，饲粮中添加不同水平的万寿菊提取物对太行鸡蛋黄中玉米黄质含量没有显著影响(P>0.05)；饲粮中添加200或300 mg/kg万寿菊提取物能够显著提高太行鸡蛋黄中叶黄素含量(P<0.05)。

表4 万寿菊提取物对太行鸡蛋黄中叶黄素及玉米黄质含量的影响Table 4 Effects of marigold extract on lutein and zeaxanthin contents in egg yolk of Taihang mg/kg

2.4 万寿菊提取物对太行鸡血清免疫指标的影响

由表5可知，在本试验条件下，饲粮中添加万寿菊提取物可显著影响太行鸡血清IgA、IgM和IgG含量(P<0.05)。第14天时，200和300 mg/kg万寿菊提取物组血清IgA和IgM含量显著高于对照组(P<0.05)；100、200和300 mg/kg万寿菊提取物组血清IgG含量显著高于对照组(P<0.05)。第28天时，与对照组相比，饲粮中添加100、200或300 mg/kg万寿菊提取物显著增加了血清IgA和IgM含量(P<0.05)；饲粮中添加200或300 mg/kg万寿菊提取物显著增加了血清IgG含量(P<0.05)。

表5 万寿菊提取物对太行鸡血清免疫指标的影响Table 5 Effects of marigold extract on serum immune indexes of Taihang chickens μg/mL

2.5 万寿菊提取物对太行鸡肝脏抗氧化指标的影响

由表6可知，第28天时，与对照组相比，饲粮中添加200或300 mg/kg万寿菊提取物显著升高了肝脏SOD和GSH-Px活性(P<0.05)，显著降低了血清MDA含量(P<0.05)；饲粮中添加不同水平的万寿菊提取物对肝脏T-AOC均没有产生显著影响(P>0.05)。

表6 万寿菊提取物对太行鸡肝脏抗氧化指标的影响Table 6 Effects of marigold extract on liver antioxidant indices of Taihang chickens

3 讨 论

3.1 万寿菊提取物对太行鸡生产性能的影响

在太行鸡养殖过程中，提升生产性能是提高经济效益的关键。而有关饲粮中添加天然叶黄素对家禽生产性能影响的研究结果不尽相同。王志[9]研究表明，在饲粮中添加叶黄素可显著提高罗曼粉蛋鸡的产蛋率和平均日采食量。张志刚等[10]研究表明，饲粮中添加叶黄素可显著提高海兰灰商品蛋鸡的产蛋率，对平均日采食量和平均蛋重没有显著影响。安立龙等[11]研究表明，饲粮中添加180 mg/kg叶黄素+0.2%中草药复方合剂能显著提高罗曼蛋鸡的产蛋率、平均蛋重及平均日采食量。本试验结果表明，饲粮中添加200 mg/kg的万寿菊提取物可显著提高太行鸡的产蛋率及平均蛋重，但是对其平均日采食量没有显著影响。但也有一些研究表明，叶黄素对蛋鸡产蛋量等生产性能无显著影响[12]。产生不同的结果可能是试验动物的品种、叶黄素添加剂量等差异导致的。

3.2 万寿菊提取物对太行鸡蛋品质、蛋黄中叶黄素沉积的影响

随着消费水平的提高，人们在注重营养价值的前提下，更青睐蛋黄颜色呈金黄色的鸡蛋[13]。家禽自身不能合成色素，而蛋黄中叶黄素的沉积只能从饲料中获取，因此可通过在太行鸡饲粮中添加天然叶黄素来增加蛋黄中叶黄素的含量、改善蛋黄颜色[14-15]。此外，叶黄素是构成人眼视网膜黄斑区域的主要组成成分，研究表明叶黄素可以预防年龄相关性黄斑变性(AMD)，增加叶黄素的摄入量对晚期AMD也有一定的缓解作用[16-18]。张权等[19]研究表明，饲粮中添加含天然叶黄素的万寿菊提取物可显著提高海兰灰蛋鸡蛋黄颜色和鲜蛋蛋黄中叶黄素含量，对蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋形指数和哈氏单位均无显著影响。李俊等[20]研究表明，饲粮中添加叶黄素可显著提高海兰褐蛋鸡蛋黄颜色和蛋黄中叶黄素含量，且蛋黄叶黄素沉积与蛋黄颜色的改善相一致。Lokaewmanee等[21]研究表明，与对照组相比，饲粮中添加万寿菊提取物对蛋鸡产蛋率、蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋形指数和哈氏单位等无显著影响，但可改善蛋黄颜色。Disilvestro等[22]研究表明，与叶黄素组相比，服用含有磷脂的叶黄素胶囊10 d后，成人血浆叶黄素含量显著增加，而在鸡蛋中叶黄素可能与磷脂产生酯化反应[23]，该结果也说明了蛋黄中叶黄素可利用性高的原因。本试验结果表明，饲粮中添加万寿菊提取物可增加蛋黄颜色，且添加200和300 mg/kg万寿菊提取物可使太行鸡蛋黄中叶黄素含量显著提高，本试验中蛋黄叶黄素沉积量的增加与蛋黄颜色的改善相一致，进一步说明了蛋黄颜色变深是由于色素沉积的结果。因此，通过在饲粮中添加万寿菊提取物可对开发富含叶黄素、保护视力的功能鸡蛋提供参考依据。

3.3 万寿菊提取物对太行鸡免疫功能和抗氧化能力的影响

本试验结果表明，饲粮中添加不同水平的万寿菊提取物均能在不同程度上提高太行鸡血清IgA、IgM和IgG含量。与对照组相比，200和300 mg/kg万寿菊提取物组太行鸡血清IgA、IgM和IgG含量均显著升高。免疫球蛋白是由浆细胞产生的，可与抗原发生特异性结合，主要包括IgA、IgG和IgM，免疫球蛋白含量能够在一定程度上反映免疫功能的强弱[24-25]。王述浩[26]研究表明，饲粮中添加万寿菊提取物可显著提高肉鸡血清中IgM、IgG含量，与本试验结果一致。出现上述结果原因可能是叶黄素能够提高动物体液和细胞的免疫能力，增强巨噬细胞的吞噬能力，目前关于叶黄素提高免疫功能的机制还有待进一步研究，但是可以确定的是叶黄素具有的免疫功能与其抗氧化性能是息息相关的。肝脏抗氧化指标是反映蛋鸡健康状况的重要指标。脂质过氧化会使蛋鸡体内活性氧含量增加，会破坏机体的蛋白质和内源性脂质，而MDA是脂质过氧化的主要产物[27]。SOD能够清除体内的超氧阴离子，并和超氧阴离子自由基发生歧化反应；GSH-Px是机体广泛存在的一种重要的分解过氧化物的酶，可以特异催化谷胱甘肽(GSH)对脂质过氧化物的还原反应[28-29]。本研究中，饲粮中添加200和300 mg/kg万寿菊提取物均使得太行鸡肝脏SOD和GSH-Px含量显著增加，血清MDA含量显著降低，说明万寿菊提取物降低了太行鸡体内脂质过氧化水平，与李丽平等[30]的研究结果一致。其可能原因是，本试验添加的万寿菊提取物的有效成分为叶黄素，而叶黄素具有强抗氧化作用，可以有效清除自由基，从而防止自由基对生物膜的损害，缓解氧化应激对机体的损伤[5]。

4 结 论

综上所述，在本试验条件下，饲粮中添加200 mg/kg万寿菊提取物能够提高太行鸡的产蛋率，改善蛋黄颜色，并能增强机体的免疫功能及抗氧化能力。