FDP、PTX3联合TLR9检测在小儿过敏性紫癜临床诊断、病情监测中的应用研究

许汉斌，陈少全,许长胜，郑辉乾

过敏性紫癜(henoch-schonlein purpura, HSP)如累及到肾脏出现血尿和(或)蛋白尿则称为紫癜性肾炎(henoch-schonleinpurpura nephritis, HSPN)[1]。目前临床上对HSP的检测缺乏统一标准，选择一种可快速诊断HSP的特异性生物指标对改善患者预后有重要意义[2]。纤维蛋白(原)降解产物(FDP)是在纤溶酶的作用下所产生的各种降解产物的总称[3]。正五聚蛋白3(PTX3)则与免疫系统疾病的发生关系密切[4]。而Toll样受体9(TLR9)属于Toll样受体(TLRs)蛋白家族，参与了多种自身免疫性疾病、超敏反应、炎症反应、细胞凋亡及移植排斥反应等疾病的发生[5]。本研究通过检测HSP患儿外周血FDP、PTX3联合TLR9表达水平，分析三者在HSP患儿临床诊断、病情监测中的作用，为HSP的治疗提供新思路。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年1月—2020年1月本院收治的HSP患儿102例作为HSP组，男58例，女44例，年龄1～12(6.73±1.57)岁。纳入标准：符合HSP诊断标准[6]；首次发病；入组前1个月内未进行治疗者。排除标准：既往或目前患有原发性肾脏疾病者；存在免疫性疾病引起的肾脏损伤；存在精神疾病家族史、痴呆等无法配合本研究者。选取同期于本院接受健康体检者90例作为对照组，男48例，女42例，年龄1～13(6.75±1.52)岁。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2检测方法

1.2.1FDP、PTX3检测：所有患儿和健康体检儿童抽取静脉血3 ml，加入枸橼酸钠抗凝，3000 r/min离心10 min。采用酶联免疫吸附试验检测FDP、PTX3水平，检测试剂盒购自美国R&D公司。本研究所有操作均由专人严格按照操作说明书进行。

1.2.2TLR9检测：2组入选儿童均于入院后次日清晨采集外周静脉血3 ml加入到肝素锂抗凝管中，采用Epics XL/XL-MLL型流式细胞仪(美国Beckman Coulter 公司)检测TLR9蛋白表达水平。

1.2.3尿流式细胞分析和尿微量白蛋白(MA)[7]水平：所有HSP组于入院后1周内的第1、4、7天动态监测尿流式细胞分析和MA水平并统计阳性率变化情况。根据尿流式细胞分析提示，统计HSPN无MA[仅红细胞>3/HP(单纯血尿型)]和HSPN伴MA(入组后1周内第1、4、7天时MA均≥20 mg/L)者的例数。

2 结果

2.1FDP、PTX3、TLR9蛋白水平 HSP组外周血FDP、PTX3、TLR9蛋白水平均高于对照组(P<0.01)。见表1。

表1 HSP组与对照组外周血FDP、PTX3、TLR9水平比较

2.2102例HSP患儿HSPN发生情况及各组间FDP、PTX3、TLR9水平比较 入院7 d后，102例HSP患儿中未发生HSPN者61例作为A组，发生HSPN者41例，其中无MA者19例作为B组，伴有MA者22例作为C组。C组外周血FDP、PTX3、TLR9水平高于A组和B组(P<0.05)，但A组和B组外周血FDP、PTX3、TLR9水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 3组不同病情程度HSP患儿外周血FDP、PTX3、TLR9水平比较

2.3影响HSP患儿发生HSPN的单因素分析 反复皮疹、腹痛、关节痛及FDP、PTX3、TLR9水平升高与HSP患儿HSPN的发生有显著相关性(P<0.01)，年龄、性别、上呼吸道感染史、血管神经性水肿与HSP患儿HSPN的发生无显著相关性(P>0.05)。见表3。

表3 影响HSP患儿发生HSPN的单因素分析(例)

2.4影响HSP患儿发生HSPN的多因素Logistic分析 反复皮疹及FDP、PTX3、TLR9水平升高是影响HSP患儿发生HSPN的独立危险因素(P<0.01)。见表4。

表4 HSP患儿发生HSPN的危险因素多因素Logistic回归分析

3 讨论

HSP是最常见的毛细血管变态反应性疾病，目前临床多认为炎性介质、凝血与纤溶机制、遗传易感因素与其发病密切相关[8]。而HSPN是儿童最常见的继发性肾损伤，由含免疫球蛋白A1的循环免疫复合物沉积在肾小球基底膜造成[1]。有研究报道，病情发展严重程度常直接影响HSP患儿的病程和预后[9]，故提高早期诊断率、加强病情监测至关重要。

FDP体现了机体纤溶系统活性的整体水平，能抑制纤维蛋白形成，有抗凝血酶作用[10]。本研究结果显示，HSP患儿FDP异常升高，提示FDP参与HSP发生和发展。结合既往文献，认为其可能的机制为HSP患儿存在继发性纤维蛋白溶解亢进，考虑血管内皮细胞损伤间接激活纤溶系统，FDP即升高[11-12]。进一步多因素Logistic回归分析发现，FDP水平升高与HSPN的发生显著相关，此过程可能与肾损伤程度相关，提示其水平变化可作为HSP患儿早期诊断及评估HSPN患儿肾损伤程度的参考指标[13]。

PTX3是人类发现的第一个长正五聚蛋白，具有调节炎症反应、参与病原菌免疫及清除凋亡细胞等作用[14]。有研究发现，PTX3可作为小血管炎症反应的重要标志物[15],其作用机制可能是早期炎症阶段在白细胞介素、肿瘤坏死因子作用下快速产生和释放巨噬细胞、中性粒细胞、血管内皮细胞，激活补体经典途径，抑制巨噬细胞对末期多核巨细胞的吞噬而在炎症反应中发挥作用。本研究结果显示，HSP患儿PTX3水平显著升高，且为HSP患儿发生HSPN的独立危险因素，表明PTX3能早期评估HSP炎症反应情况，并对临床病情发展进行监测，从而为临床治疗提供依据。

TLRs受体是通过识别微生物DNA，激活细胞信号，产生炎症反应[16]。而TLR9主要表达区域为树突状细胞、B淋巴细胞，可识别细菌和病毒中的非甲基化胞嘧啶磷酸鸟嘌呤二核苷酸。国内研究发现，在HSP急性期中，TLRs受体相关分子异常增高[16-17]，其中包括TLR5、TLR9，本研究结果与其报道一致。猜测各病原激发的TLRs信号通路活化过多，也许是导致HSP发病主要因素之一。本研究结果发现，HSPN伴MA者TLR9水平高于HSP无肾损伤者和HSPN无MA者，提示TLR9的持续活化与HSP肾损伤有关，参与介导了HSPN发生发展过程[18]。

综上所述，FDP、PTX3、TLR9水平在HSP患儿中异常升高，联合检测三者可作为临床诊断的有效指标，且与HSP患儿发生HSPN关系密切，在病情监测中具有重要价值。