核酸检测与ELISA检测在无偿献血血液标本乙型肝炎病毒（HBV）筛查中的应用效果比较

邱彤

（锦州市全民健康保障中心，辽宁 锦州 121000）

血液安全一直是献血站永恒不变的主题，至1998 年颁布《中华人民共和国献血法》以来，献血站不断完善质量管理体系。随着医疗检测设备的更新，相关检测试剂不断组合优化，灵敏度也不断提升[1]。近年来，无偿献血的招募策略也不断创新，医疗机构中临床用血质量要求逐步提高，输血安全性、有效率成为提高治疗的重要环节。虽然输血引发的传染病事件明显减少，但仍需加强保障医护和患者的安全。临床中ELISA的检测仍存在较长的“窗口期”，在慢性携带、变异、静默感染等低病毒载量检测中存在漏检情况，因此，还需提高血液筛查的高效手段[2]。核酸检测（nucleicacid test，NAT）是一种新型的血液筛查技术，已广泛应用于国外临床，可有效弥补ELISA检测的不足，将其用在献血志愿者血样检测中，对保障输血安全、缩短血液检测的“窗口期”发挥积极作用。但其在我国的使用尚处于起步阶段。基于此，本研究旨在探讨NAT 在无偿献血中对HBV 的筛查价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取本中心2017 年1 月至2019 年12 月无偿献血者150 名作为研究对象，其中男67 名，女83 名；年龄18～48 岁，平均（30.58±10.27）岁。本研究已通过本院伦理委员会审核批准。

纳入标准：均符合《献血者健康检查要求》[3]相关规定；年龄18～50 岁；意识清晰、沟通顺利，无精神障碍者。排除标准：有遗传病史者；经期女性志愿者。

1.2 方法 血液样本采集：所有血液样本均取3份，约5 mL依次置于抗凝管（EDTA-K2）和核酸专用管中，提前做好样管标记。4 ℃下3 000 r/min，1 600 g离心20 min，保存于2～8 ℃环境下，于48 h 内行完成检测。如实记录样本采集日期、编码等信息。

仪器设备：离心机、多功能酶标仪、STAR全自动加样仪（瑞士，帝肯）、COBAS-201 核酸检测仪（美国，罗氏）、BEP全自动酶免分析系统（瑞士，帝肯）、COBAS AmpliPrep 全自动核酸提取仪、COBASAmpliPrep 全自动PCR 分析仪（美国，罗氏）。

样本检测：所有操作均由专人严格遵守设备说明进行；①ELISA检测：每份血液标本均开展HBsAg 检测，同时设置空白对照、阴性对照、阳性对照和室内质控品组。判定标准如下：阳性，样本光密度值-临界值（S/CO）≥1；此时血样检测结果不合标准；S/CO为0.5～1.0为灰区，此时检测结果不符合标准；阴性：S/CO＜0.5，检测结果满足标准。②NAT 检测：混样法，每级设置6 个混合样本，同时设定内对照，混合测定为阴性者即为阴性，混合测定结果为阳性者再进行拆分；拆分后检测为阴性即为NAT 阴性，反之为NAT 阳性。③追踪随访：对于NAT 阳性、核酸阳性，但“两对半”和核酸均为阴性者开展追踪随访，于2 个月后进行重新采样。

1.3 观察指标 参考ECLIA 的检测结果，统计两种检测方法HBV的准确度、灵敏性和特异性。敏感度=真阳性/（真阳性+假阴性）。特异度=真阴性/（真阴性+假阳性）。

1.4 统计学方法 采用SPSS 24.0统计软件进行数据分析，计数资料以百分率（%）表示，比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

ECLIA 检测中，血液样本 HBV 阳性 37 份 ，阴性 113 份，阳性率为24.67%。NAT检测准确度为97.30%（36/37），灵敏度为100.00%（10/10），特异度为96.30%（26/27），见表1；ELISA 法准确度为 75.68%（28/37），灵敏度为 60.00%（6/10），特异度为77.78%（21/27），见表2；两种检测方法准确度、灵敏度、特异度比较差异有统计学意义（χ2=7.400、5.000、4.103，P=0.007、0.025、0.043）。

表1 NAT中HBV检测情况

表2 ELISA中HBV检测情况

3 讨论

乙型病毒性肝炎（viral hepatitis type B）简称“乙肝”，是因乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）所引起的慢性肝炎疾病，具有传染性，主要通过性接触、血液、母婴进行传播，目前尚无治愈的可能性。AIDS 临床主要表现为乏力、恶心、虚弱、厌油等症状，且症状不典型，一旦被HBV感染，通常会经1～6 个月的潜伏期而发展为乙肝，期间病毒传播的可能性最大[4]。HBV 由禽嗜肝和正嗜肝DNA 病毒组成，其中后者是诱发乙肝的主要菌属。乙肝患者的血清学检查一直是肝炎病毒的检查金标准，主要通过检测病毒表面抗原发现病毒的存在。HBV常用检测指标有HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe 和抗-HBc，即俗称的“乙肝五项”。其中前三项为阳性者即为“大三阳”，后三项为阳性者即“小三阳”[5]。

截至2011年，全球HBV携带者近3亿，我国占30%。近年来，随着世界卫生组织、联合国所部署的乙肝育龄妇女预防开展，母婴传播途径已明显被阻断。最近的一项调查[6]发现，发展中国家的血液采集样本中，5%～20%存在HBV、丙型肝炎、HIV 3 种病毒，且因输血或非安全性注射所造成的HBV感染人数年均高达1 600万人，严重威胁我国人民的健康和社会的发展。为阻断HBV的血液传播，其最重要、最主要的途径即提高献血群体的血液筛查质量。安全输血的重要环节在于受筛查病毒的“窗口期”，即从被感染到能检测出体内对应抗体的时间间隔，因无法检测到抗体，窗口期中临床不能及时确诊，如患者的血液中已带有病毒，并有传染性，仅通过血液检测无法检出。

ECLIA 主要通过三联吡啶钌与蛋白质、半抗原激素、核酸等化合物进行结合，检查乙肝五项指标，其免疫检验期间无外来光源干扰，消除了光散射、噪音干扰，是HBV 标志物的检验金标准[7]。ELISA作为临床常用的HBV诊断方法，主要检测HBsAg 指标，凭借操作方便、快捷、费用低等优点在血液筛查中广泛应用。但由于HBV隐匿性、窗口期等问题，该技术的漏检系数较高。作为一种新型的分子生物学检测技术，NAT 能补充血清学诊断中的缺陷。NAT 通过逆转录扩增后，经PCR法进行体外自然状态下DNA分子复制，模拟形成核酸扩增，快速定量样本中HBV-DNA 的水平，直接反映HBV 的感染情况，该检测方法本身较敏感，特异性、灵敏度均较高[8]。据统计，NAT可将40%～75%HBV、丙型肝炎、HIV 病毒的“窗口期”缩短为25～60 d、7～15 d 和9～36 d内，从而弥补ELISA法的缺陷，避免被漏检的病毒感染者在血液输送治疗中出现病毒传播、感染风险，明显降低病毒经输血而造成的传播风险，保障输血治疗安全性。本研究结果显示，NAT检测准确率为97.30%、灵敏度为100.00%、特异性为96.30%，均高于对照组的75.68%、60.00%、77.78%，差异有统计学意义（P＜0.05）。表明NAT 检测显著优于ELISA 检测；研究中的150 份样本，共10 份HBV-DNA 阳性标本，无HCV-RNA及HIV-RNA阳性情况，其原因可能是由于样本在收集至检测期间受温度影响，病毒RNA 被降解所致；此外，本实验中所检测的核酸标本量较小，应加大检测力度，加强样本从采集至检测每个环节的质量管控。

综上所述，无偿献血血液标本HBV筛查中，NAT检测价值高于ELISA，可提高HBV检出率，且特异性强、灵敏度高，值得临床推广应用。