利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术在无痰、菌阴肺结核患者中的临床诊断价值

林益敏 李 敏 陈凤娣

广东省清远市人民医院感染科，广东清远 511500

肺结核是具有较高危险性的慢性传染疾病，是全球范围内均广泛关注的重大公共卫生问题之一，肺结核的形成是结核分支杆菌感染侵袭肺部引起的疾病，目前我国的肺结核患者人数在世界上排名第二，肺结核成为威胁我国国民生命健康安全的重要因素，抓住早期诊断机会对患者进行病情控制并及时控制传染源具有十分重要的作用[1]。结核分枝杆菌阴肺结核虽然属于非传染性肺结核，但是患者随着病情发展可能成为传染原，目前临床上较为常见的诊断方式有结核分枝杆菌DNA和涂片抗酸染色法检测[2]。结核分枝杆菌DNA检测并不能完全明确患者病情，通常还需要结合其他检查才能确诊，抗酸涂片虽然检测较为快速但是检测准确性较低，两种检测方式均有明显的局限性，对尽早控制病情发展或控制传染效果不佳[2-3]。尤其是对于涂片检测呈现阴性或无痰的患者而言寻找快速准确的诊断方式十分重要。随着分子生物学诊断技术的不断进步和发展，利福平（Rifampin，RIF）耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Real-time fluorescence quantitative nucleic acid amplification detection technology for drug resistance，Xpert MTB/RIF）在结核分枝杆菌阴肺结核患者检测中的价值受到广泛关注[4]。本研究通过对结核分枝杆菌阴肺结核患者使用Xpert MTB/RIF技术检测的效果进行分析，为临床肺结核检测提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1月至2020年10月清远市人民医院收治的56例疑似无痰、菌阴肺结核患者作为研究对象，其中男32例，女 24例；年龄 19～83岁，平均（48.90±6.37）岁。纳入标准：①患者均经即时、夜间及晨间3次痰液涂片显示为阴性且经支气管检查符合《中国结核病防治规划实施工作指南 2008年版》[5]的相关要求；②患者均存在发热、咯血、咳嗽及胸痛等肺结核临床症状；③患者经临床影像学检查经 X线片、痰涂片抗酸染色等检查均未见典型的肺结核表现；④患者临床相关检查资料完善。排除标准：①合并有肺外结核、复治肺结核的患者或存在其他感染性疾病的患者；②患有哮喘疾病，呼吸衰竭的患者；③有支气管镜检查禁忌证的患者；④不规则应用抗结核菌药物的患者；⑤患者存在明显的精神障碍或意识障碍，治疗依从性差。本研究经医院医学伦理委员会审核并批准，患者知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

①支气管镜检查：所有患者使用奥林巴斯纤维支气管镜进行检查，根据胸部 CT选择病变累及肺段的支气管进行刷检后涂片，然后进行灌洗，将生理盐水10～20 ml通过纤支镜灌入相应支气管肺段内，然后负压吸引回收灌洗液至无菌瓶内，可重复灌洗 2～3次，收集灌洗液 10 ml左右，送实验室后平均分装在 A、B、C三管中，离心半径13.5 cm，3000 r/min离心20 min后备检。②Xpert MTB/RIF检测：将其中一管灌洗液离心后弃去上清液留取1 ml与含氢氧化钠及异丙醇的处理液按1∶2比例混合，在涡旋震荡器上震荡15～30 s，室温静置 15 min，取混合液 2 ml转移至一次性多室塑料反应盒中，然后将反应盒置于Gene-Xpert仪器进行全自动检测，约2 h即可读取结果。

所有患者完成标本的采集后均行病理学活组织检查，肺泡灌洗液分别行抗酸染色涂片、结核分支杆菌复合群DNA、Xpert MTB/RIF检测。

1.3 观察指标及评价标准

以患者临床病理学活检结果为金标准，比较三种检测方式阳性预测值、阴性预测值情况及灵敏度、特异度情况。A表示真阳性例数，B表示假阳性例数，C表示假阴性例数，D表示真阴性例数。灵敏度=A/（A+C）；特异度=D/（B+D）；阳性预测值=A/（A+B）×100%，阴性预测值=D/（C+D）×100%）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用 t检验；计数资料用率表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2.结果

Xpert MTB/RIF技术检测的灵敏度、阳性预测值及阴性预测值均高于结核分支杆菌复合群DNA检测及抗酸涂片检测，特异度高于结核分支杆菌复合群DNA检测，差异有统计学意义（P<0.05）；结核分支杆菌复合群DNA检测灵敏度高于抗酸涂片检测，特异度、阳性预测值低于抗酸涂片检测，差异有统计学意义（P<0.05）（表 1、表 2）。

表1 三种检测方式与病理学活检检出情况比较（例）

表2 三种检测方式诊断效果比较[%（n/N）

3 讨论

近年来，随着社会的发展，人们的生活水平得到了极大的提升，然而空气污染问题却变得愈发严重，导致呼吸系统疾病的患病率也随之增长，肺结核作为一种临床上较为常见的呼吸系统疾病，其具有极高的传染性，患者的临床症状主要表现为咳痰、胸痛、呼吸困难、乏力等，对其日常生活影响较大，但若能够得到及时且正确的治疗，大部分患者都可以痊愈[7]。但是抓住患者早期诊疗的良好时机具有一定的难度，这主要是因为早期诊断采用的方法具有明显的局限性。目前通常针对肺结核患者进行痰涂片检查以求达到早期诊断的效果，抗酸涂片检测虽然能够达到快速检测的目的，但是检测敏感度与诊断准确性较低，尤其是对于结核分枝杆菌阴肺结核或无痰的患者而言诊断难度更大[8]。这类患者痰液中含菌量较少，检测难度更大，容易造成漏诊或误诊状况[9]。因此寻找提高结核分枝杆菌阴肺结核患者早期诊断准确性的方法，对于及时控制患者病情，减少传染风险具有积极作用。在临床上，对肺结核患者的常规治疗以利福平等抗结核药物为主，在治疗过程中，部分患者会出现耐药情况，进而引发耐多药肺结核疾病的出现，因此利福平耐药检测是肺结核患者耐药性检测以及耐多药检测的主要参考标准，对尽快确定患者后续治疗方案具有积极作用[10-11]。

本研究结果显示，Xpert MTB/RIF技术检测的灵敏度、阳性预测值及阴性预测值均高于结核分支杆菌复合群DNA检测及抗酸涂片检测，特异度高于结核分支杆菌复合群DNA检测，差异有统计学意义（P<0.05），指出Xpert MTB/RIF技术在诊断结核分枝杆菌阴肺结核患者的准确性较高，在患者诊断及非患者筛选中的作用较好，诊断准确性高于抗酸涂片检测，检测结果获得时间可早于病理活检，符合早期诊断要求，因而将其作为临床诊断的方式具有较高的价值[12]。Xpert MTB/RIF是一种半巢式实时荧光定量扩增体外诊断技术，能够对与结核分枝杆菌特有的且和利福平耐药存在密切联系的rpoB基因片段进行扩增检测，对检测标本中的结核分枝杆菌载量产生反应，操作简单，结果生成速度快，具有明显的优势[13-14]。除了诊断作用之外，Xpert MTB/RIF技术还能快速检出患者的耐药情况，尽快确定治疗方案。刘巧等[15]的研究同样指出Xpert MTB/RIF技术与痰涂片检测的时效性相当且诊断准确性与液体培养相仿，本研究结果与之吻合。

综上所述，Xpert MTB/RIF技术应用于结核分枝杆菌阴肺结核患者的临床检测和药敏实验检测具有重要作用，具有较高的准确性，检测速度快，能够尽快检测患者耐药情况，有利于患者早期诊断及治疗方案的确定，可尽早控制患者病情，减少传染风险，具有极高的临床应用价值。