三阴性乳腺癌组织p53、Ki-67、Twist及E-cadherin的表达及其意义

杜文英，贾 维

(陕西省铜川矿务局中心医院肿瘤科，陕西 铜川 727000)

三阴性乳腺癌是乳腺癌的一种亚型，是指患者雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2均为阴性的乳腺癌，与其他亚型的乳腺癌相比，三阴性乳腺癌有着生存率差，腋窝淋巴结转移率低，内脏淋巴结转移率高度特点，临床发病率占总乳腺癌发病率的10%～17%[1，2]。近年来，乳腺癌的临床预后以及乳腺癌相关基因表达的变化研究受到了广泛关注。BRCA1/2 基因是一类肿瘤抑制基因，参与细胞同源重组修复(HRR)过程。通过BRCA 突变检测，能更好的评估卵巢癌患者的预后、优化治疗方案。针对不同人群的 BRCA 突变情况，已有较多报道，但研究数据的人群都是以高加索人种为主，更是缺少体细胞与胚系基因突变的比较。因此，针对中国人群的 BRCA 胚系和体细胞突变情况的研究显得尤为迫切。本次研究通过对比分析三阴性乳腺癌患者与其他类型乳腺癌患者p53、Ki-67、Twist及E-cadherin的表达，进而探讨分析p53、Ki-67、Twist及E-cadherin的表达对TNBC患者临床预后的影响，现报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料选取于2017年12月至2018年12月来我院接受治疗的三阴性乳腺癌患者72例为观察组，纳入标准：均经病理学和免疫组化诊断确诊为三阴性乳腺癌患者，所有患者雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2均为阴性。排除既往合并有癌症病史，或双侧乳腺癌的患者。观察组年龄32～70岁[(52.14±9.83)岁]，其中，导管内癌2例，浸润性导管癌70例；TNM分期，Ⅰ期14例，Ⅱ46例，Ⅲ12例。同期非三阴性乳腺癌患者72例为对照组，其雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2中任意一项为阳性，年龄33～68岁[(54.31±10.25)岁]，其中，导管内癌1例，黏液癌1例，浸润性小叶癌3例，浸润性导管癌67例；TNM分期，Ⅰ期15例，Ⅱ45例，Ⅲ14例。所有患者均有完整的临床资料和随访资料，包括临床一般情况、病理情况、分期、治疗方式等。两组患者的临床一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。所有家属均知情同意，均签署知情同意书。本次研究经医院医学伦理学委员会批准。

1.2 方法所有患者均接受相应的手术、放化疗治疗。手术治疗主要为保留乳房手术、改良根治术。放射治疗根据患者的临床不同情况，采用直线加速器照射胸壁和锁骨上区，辅助化疗方案主要采用蒽环类、紫杉类药物的联合化疗。采用免疫组化SP法检测所有患者的p53、Ki-67、Twist及E-cadherin的表达。一抗、二抗均为福州迈新生物有限公司产品，严格按照试剂盒说明书进行操作。按照试剂盒说明书进行染色，以PBS代替第一抗体作阴性对照，以已知阳性片为阳性对照。显微镜下观察染色情况，Twist染色结果根据染色强度及阳性细胞占肿瘤细胞总数比例进行评分，在肿瘤细胞表达>5%为阳性。

1.2.1保留乳房手术 麻醉与消毒同常规乳腺癌乳房全切除术。切口兼顾肿瘤安全性、术野显露和美容效果。推荐选择肿物表面切口(上象限选择弧形、下象限选择放射状)、环乳晕切口和符合皮肤自然纹理切口。兼顾中转乳房全切除术的可能性。选择缝线和(或)墨汁染色准确标记切除标本各切缘。快速冰冻病理学检查于术中评价切缘状态。切缘阳性患者需要继续手术切除至切缘阴性或行全乳房切除。

1.2.2改良根治术 切口依肿瘤所在部位及乳房的大小、形态设计。游离皮瓣切开皮肤后，游离皮瓣最好采用电刀，不仅使术野干净，也利于无瘤操作。切除乳腺自下内开始向上外将乳腺连同其深面的胸大肌筋膜一并分离，直至胸大肌外缘下。清扫胸大肌间淋巴结(Rotter淋巴结) 将翻起的乳腺向外拉紧，将胸大、小肌向内牵拉，沿胸大肌外缘与乳腺组织分界处纵向切开，显露胸大、小肌间的脂肪及淋巴组织(Rotter淋巴结)，将其全部清除。清扫腋淋巴结将胸小肌向内向上提起，锁骨下血管、腋血管全程暴露，从锁骨下静脉入胸处开始，沿锁骨下静脉下缘解剖，结扎切断所有向下分支。引流 冲洗手术创面，接负压吸引。

1.3 统计学方法数据采用SPSS 20.0进行统计分析。计数资料用n(%)表示，组间比较行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者临床病理学特征比较两组患者年龄、乳腺癌家族史、TNM分期、患者是否绝经、淋巴结转移数以及肿瘤病理分期等方面比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组患者临床病理学特征比较 [n(%)]

2.2 Ki-67、p53、E-cadherin及Twist在乳腺癌细胞中的表达情况免疫组化SP法下，E-cadherin阳性表达定位于癌细胞膜和细胞质，染成棕黄色为阳性，p53阳性表达主要定位于细胞核，癌细胞核中出现棕黄色颗粒着色表明为p53阳性细胞。Ki-67阳性表达定位于肿瘤细胞核，呈细小棕黄色颗粒弥漫分布，根据视野中阳性细胞比例进行染色结果分级。Twist阳性表达主要定位于癌细胞核与细胞质，呈棕褐色。见图1。

图1 Ki-67、p53、E-cadherin及Twist在乳腺癌细胞中的表达情况(SP，×400) a：乳腺癌腺上皮细胞膜及细胞质中E-Cadherin染色阳性(呈现棕黄色颗粒)；b:乳腺癌腺上皮细胞细胞核中p53阳性表达(呈现棕黄色颗粒)；c:乳腺癌腺上皮细胞细胞核Ki-67阳性表达 (呈现棕黄色颗粒)；d:乳腺癌腺上皮细胞细胞核Twist阳性表达(呈现棕褐色)

2.3 两组患者Ki-67、p53、E-cadherin及Twist的表达情况比较观察组患者的Ki-67、p53及Twist阳性表达率明显高于对照组，E-cadherin阳性表达率明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组 Ki-67、p53、E-cadherin及Twist的表达情况比较 [n(%)]

3 讨论

乳腺癌是一类存在明显异质性的恶性肿瘤，其发生是一个多基因、多步骤且多阶段的过程，临床症状、组织学形态、免疫表型和临床预后等存在很大差异。临床上常见的判断乳腺癌临床预后主要是通过临床分期、组织学分类分级、年龄、是否绝经和淋巴结转移情况等。临床常见的治疗方法主要为手术治疗、放化疗治疗等[3]。三阴性乳腺癌是乳腺癌的一种亚型，有着生存率差，腋窝淋巴结转移率低，内脏淋巴结转移率高的特点，近年来逐渐成为研究的热点。

Ki-67蛋白是一种半衰期短的非组蛋白核蛋白，是临床上检测肿瘤细胞增殖活性的常见指标。Ki-67蛋白与多种恶性肿瘤的发展、淋巴结转移及临床预后密切相关。邢芳林等[4]研究认为，Ki-67蛋白的表达能够反映患者恶性肿瘤增殖率，其高表达与患者的不良预后密切相关。本次研究结果表明，三阴性乳腺癌患者的Ki-67阳性表达率为90.28%，这一研究结果与郑会爽等[5]的研究结果89.7%接近。且研究结果表明，Ki-67在观察组患者及三阴性乳腺癌患者中的阳性表达率明显高于对照组(非三阴性乳腺癌患者)，提示Ki-67在三阴性乳腺癌患者中的高表达可能导致患者肿瘤的恶性程度和较差的预后。本次研究结果表明，Ki-67的表达与患者年龄、有无乳腺癌家族史及是否绝经无明显关系，与患者TNM分期、淋巴结转移数和病理分期呈明显相关。这与沈恩超等[6]的研究结果一致。李德锋等[7]研究认为Ki-67的表达与患者淋巴结转移密切相关。提示Ki-67的阳性表达与三阴性乳腺癌的发生发展有关，是一种不良预后因子。

p53基因位于17号染色体上，对细胞基因的完整性起一定的监督作用，与肿瘤的发生、发展密切相关。p53基因突变后，将会失去调控细胞增殖、细胞凋亡以及修复DNA的作用，转变为癌基因，能够导致细胞异常增生，引起细胞的转化和癌变，最终导致恶性肿瘤的形成[8，9]。本次研究结果表明，p53的阳性表达率为69.44%，与马少君等[10]研究中的三阴性乳腺癌患者阳性表达率76.19%接近。本次研究结果表明，p53的表达与患者TNM分期、淋巴结转移数和病理分期呈明显相关。这一研究结果与于强等[11]的研究结果一致。但同时也有赖静等[12]报道认为，p53的临床表达与患者的病理分级、淋巴结转移无明显相关性。熊辉等[13]研究认为，p53阳性患者的临床预后较差，且5年生存率明显低于阴性患者。

E-cadherin蛋白分布于所有的上皮组织中，是一种跨膜糖蛋白，起着膜固定作用，同时，在细胞外钙离子的参与下，能够介导同种细胞之间及细胞与细胞外基质粘附，能够维持上皮完整性，同时能够保持肿瘤细胞间密切接触等。E-cadherin表达正常时，肿瘤细胞不易从原发灶脱落，下调甚至缺失时，则容易导致肿瘤细胞连接松散，易脱落，同时肿瘤细胞接触抑制丧失，导致肿瘤细胞无限制增长，同时获得了较强的侵袭能力[14]。本次研究中，观察组患者E-cadherin的阳性表达率59.72%明显低于对照组76.39%，差异有统计学意义(P<0.05)。同时，E-cadherin的表达与患者TNM分期、淋巴结转移数和病理分期呈明显相关[15]。E-cadherin的表达在乳腺导管癌和乳腺小叶癌中存在明显差异，通过免疫组化法标记E-cadherin能够进行鉴别诊断。

Twist蛋白是一种癌基因蛋白，与恶性肿瘤的形成、淋巴结转移和侵袭之间密切相关，是临床评价肿瘤药物临床疗效的标志物之一。目前认为，Twist在胚胎的发育过程中，起到组织重组及引发细胞移动的作用，通过与靶基因结合，能够起到调节下游基因表达的作用。本次研究结果表明，Twist阳性表达率为76.39%，明显高于对照组患者52.78%，提示Twist能够抑制E-cadherin的转录表达，使肿瘤细胞侵袭性增强，同时，Twist能够通过阻断p53肿瘤抑制通路，促进肿瘤的发生和发展[16]。

综上所述，检测Ki-67、p53、E-cadherin和Twist的表达情况对于判断三阴性乳腺癌恶性程度、增殖能力及侵袭性有着重要意义，能够帮助判断三阴性乳腺癌患者的临床疗效和预后。