抗体缺失致血型鉴定困难1例

蒋玉林，毛 伟，刘不尽，张 涛，王栋芳，廖红梅，邹海曼

重庆市血液中心输血研究所，重庆 400052

临床上ABO血型正反定型不一致的常见原因有红细胞抗原减弱和血清抗体减弱[1]。血清抗体减弱或缺失多见于新生儿、老年人、ABO亚型或免疫低下的患者。健康成年人缺乏相应ABO抗体的情况比较罕见，机制尚不明确[2]，但在某些疾病或生理情况下会有抗体减弱或缺失，在这种情况下，ABO基因检测就显得尤其重要[3]。最近笔者发现1例因抗B抗体(抗-B)缺失导致ABO血型鉴定困难者，现报道如下。

1 资料与方法

1.1病历资料 女性，28岁，因颈部包块于某医院耳鼻咽喉颌面肿瘤科就诊，既往无输血史。实验室检查：血红蛋白(Hb)77 g/L，血小板(PLT)73×109/L,总蛋白(TP)38 g/L，清蛋白(ALB) 29 g/L,球蛋白(GLB)9 g/L。临床输血科发现ABO血型正、反定型不符，故送至本实验室鉴定。

1.2试剂与仪器 单克隆抗A抗体(抗-A)、抗-B(上海血液生物医药有限公司)，冻干人源抗-A、抗-B血清、抗AB抗体(抗-AB)血清(中国医学科学院输血研究所)，A、B、O型试剂红细胞(实验室自制)，微柱凝胶卡(BioVue公司)、人类基因组DNA提取试剂盒(QIAGEN公司)，人类红细胞ABO血型-B亚型基因分型试剂盒[PCR-序列特异性引物(SSP)法，天津秀鹏公司]，人类红细胞ABO外显子6-7血型基因测序试剂盒(江苏中济万泰生物医药有限公司)、琼脂糖凝胶(GENE公司)、0.5×TBE电泳缓冲液(自制)。所有试剂使用严格按照说明书操作。

KUBOTAKA2200型血型血清学专用离心机(日本久保田公司)、BioVue系统工作站(BioVue公司)、SiGMA 1-15型高速离心机(德国赛多利斯公司)、NANO-100型微量分光光度计(杭州奥盛公司)、ABI9700型PCR扩增仪(美国ABI公司)、PowerPac型电泳仪(Bio-Rad公司)、Fire Reader V10型凝胶成像系统(Uvitec公司)、3730型DNA遗传分析仪(美国ABI公司)。

1.3血型血清学方法 ABO血型正、反定型采用盐水法。检出弱抗原或弱抗体时加做吸收放散试验。

1.4PCR-SSP 严格按照人类红细胞ABO血型-B亚型基因分型试剂盒(PCR-SSP法)说明书操作。

1.5ABO基因第6、7外显子直接测序 严格按照人类红细胞ABO外显子6-7血型基因测序试剂盒说明书操作。使用SeqScape v2.7软件进行序列分析。

2 结 果

2.1血型血清学检测 在室温、4 ℃及血清加倍时，正定型显示为A型，反定型为AB型。加做抗H抗体(抗-H)和人源抗-A、抗-B、抗-AB后，正定型仍为A型。ABO正反定型结果如下，正定型(单克隆抗血清)：抗-A 4+，抗-B 阴性，抗-H 1+,正定型(人源多克隆抗血清)：抗-A 4+，抗-B 阴性，抗-AB 4+，反定型：A1c、Bc、Oc、自身c均为阴性。

2.2吸收放散试验 由上述血型血清学结果分析：正反定型不符的原因可能是B抗原或抗-B减弱。故用人源抗-B血清加做吸收放散试验。吸收放散试验结果：患者放散液阴性，Oc放散液(阴性对照)阴性，Bc放散液(阳性对照)4+。吸收放散试验结果证实患者红细胞不能吸收放散人源抗-B，表明患者红细胞表面不含有B抗原，基本排除ABO亚型的可能性。

2.3ABO基因分型 采用人类红细胞ABO血型-B亚型基因分型试剂盒(PCR-SSP法)检测患者ABO基因分型，结果显示患者ABO基因型为A/O。

2.4ABO基因第6、7外显子直接测序 ABO基因第6-7外显子测序结果检测到第6外显子第261号碱基鸟嘌呤(G)缺失，第7外显子第467号碱基发生单个碱基替换(C>T)。因此，患者的测序结果为A102/O01。见图1。

图1 ABO基因第6、7外显子直接测序

3 讨 论

ABO血型系统的抗体属于天然抗体。一般情况下，出生后3个月体内可检出抗-A、抗-B，然后效价逐渐增加，5～10岁达到成年人的水平[4]。健康成年人缺乏抗-A和抗-B是比较罕见的，约占万分之一[5]。目前，抗-A、抗-B缺失的机制尚不明确，可能与生理、治疗等有关[6]。在免疫抑制、肿瘤等疾病状态下，患者体内血清蛋白水平降低，抗体也相应减弱[7]。

本例患者的血清学结果显示:正定型时患者红细胞与抗-A凝集，抗-B不凝集，反定型时患者血清与试剂红细胞均不凝集，考虑患者B抗原减弱或抗-B缺失。通过吸收放散试验表明患者没有B抗原，排除ABO亚型的可能，提示抗-B缺失。有文献报道PCR-SSP检测可作为血型血清学方法的补充，有助于疑难血型的鉴定[8]，在本病例中，通过PCR-SSP检测发现患者基因型为A/O，进一步确定抗-B缺失。为进一步确定此患者的ABO血型，笔者进行了分子生物学试验，通过ABO基因测序，确定其ABO基因为A102/O01。有文献报道，A102等位基因与A101等位基因只是在467位发生了碱基替换(C>T)，两者翻译的糖基转移酶活力无显著差异[9]，本病例中也发现A抗原并无减弱。综合血型血清学和分子生物学结果，笔者考虑此患者ABO血型为A型，抗-B缺失。有文献报道，低蛋白血症引起抗-B缺失，但随着疾病的好转，此种抗体水平会逐渐恢复[10]。本病例中，患者血清蛋白水平明显降低，但未检测IgM水平。也有文献报道相似病例O型患者抗-B缺失，但其原因未知[4]。对于其抗-B缺失的原因本课题组后续将跟踪检查。

综上所述，在ABO正反定型不符时，排除试剂、设备、输血等影响因素后，最可能的就是ABO亚型或疾病因素引起的抗原抗体减弱。可通过红细胞血型、吸收放散试验排除ABO亚型的可能，以及采用基因分型、测序等分子生物学技术作为血型鉴定的补充，有助于血型的正确鉴定，保证临床输血安全。