湖南省部分地区病猪和屠宰猪群猪圆环病毒感染状况调查

何世成，王紫微，2，丁朝阳，胡巧云，唐小明，王卫国，刘道新，谢怡灵，王昌建

（1.湖南省动物疫病预防控制中心，湖南长沙 410014；2.衡阳技师学院，湖南衡阳 421101；3.娄底市动物疫病预防控制中心，湖南娄底 417000）

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）具有环状单股负链DNA 基因组，是圆环病毒科圆环病毒属成员[1]。PCV 按其致病性、抗原特异性可分为4 种基因型，分别为PCV1、PCV2、PCV3 和PCV4 型[2]。PCV1 在1974 年 由Tischer 等[3]在 猪肾细胞中发现，此后证实该病毒不会造成猪细胞病变，对猪无致病性。PCV2 在20 世纪90 年代出现，随后分布全球，具有严重致病性[4]。PCV3 是Palinski 等[5]于2016 年在患有猪皮炎和肾病综合征的急性病死母猪中检测发现的新型PCV。2019年张慧辉等[2]在湖南省患有严重临床疾病的猪只中发现了另一种新的PCV，被命名为PCV4。

与PCV 相关的疾病包括猪断奶后多系统衰竭综合征、猪皮炎肾病综合征、先天性震颤、繁殖障碍和增生性坏死性肺炎等。PCV 作为猪圆环病毒病的主要病原，在全国范围内广泛存在。近年来，PCV2 和PCV3 的感染率呈逐年增加趋势，对我国养猪业造成了巨大经济损失，而新发现的PCV4 也是对养猪业造成威胁的潜在致病因素。本研究通过对来自湖南省2017—2020 年部分地区的821 份样品进行PCV1、PCV2、PCV3 和PCV4 的荧光PCR检测，了解湖南省PCV 流行情况，以期为湖南省猪圆环病毒病防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品采集 本研究样品均于2017—2020 年由湖南省动物疫病预防控制中心收集并储存于-80 ℃超低温冰箱，共821 份样品，包括采自湖南省14个市州猪场的151 份病猪心、肝、脾、肺和肾等组织（同一病猪组织混合研磨后算1 份样品），其中2017 年68 份、2018 年32 份、2019 年23 份、2020 年28 份；2020 年4 月与12 月，采自湖南省14 个市州屠宰场的670 份猪淋巴结样品。

1.1.2 主要试剂和设备 PCV1 和PCV2 型双重实时荧光PCR 检测试剂盒，PCV3 型实时荧光PCR 检测试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司；DNase-Free Deionized Water 和2×SuperRealPreMix（Probe），购自天根生物科技有限公司。7500 Fast Real-Time PCR System，购自赛默飞ABI 公司；组织研磨仪，购自德国Retsch；核酸提取仪和病毒DNA/RNA 提取试剂盒，购自西安天隆科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 材料处理 在生物安全柜中用无菌剪刀剪下一小块组织放于2.0 mL 离心管中，加入研磨钢珠和1.5 mL 生理盐水，并编号，对称放置于组织研磨仪研磨3 min，12 000 r/min 离心5 min。根据西安天隆自动化核酸提取仪说明进行核酸提取，提取核酸保存于-30 ℃。

1.2.2 引物合成 PCV1、PCV2 和PCV3 检测所用引物和探针均由试剂盒提供。PCV4 检测根据文献[2]建立的荧光PCR 方法进行。引物和探针，由擎科生物有限公司合成，引物序列见表1。

表1 PCV4 荧光PCR 的引物信息

1.2.3 荧光PCR 检测 PCV1 和PCV2 检测，根据PCV1 和PCV2 型双重实时荧光PCR 检测试剂盒说明书进行；PCV3 检测，根据PCV3 型实时荧光PCR 检测试剂盒说明书进行；PCV4 检测反应总体系为20.0 μL：无核酸酶水5.4 μL，2×SuperReal PreMix（Probe）10.0 μL，上下游引物（10 μmol/L）各0.6 μL，探针0.4 μL，DNA 模板3.0 μL。荧光PCR 反应程序：95 ℃ 5 min；95 ℃ 5 s，63 ℃ 35 s，进行50 次循环，在每次循环的第二步（63 ℃ 35 s）时收集荧光信号。

1.2.4 结果描述及判定 PCV1、PCV2、PCV3 的检测结果判定，按试剂盒使用说明书标准；PCV4的检测结果判定，当Ct ＜45 并出现特定的扩增曲线时判为阳性。

2 结果与分析

2.1 总体情况

821 份样品的病原检测结果（表2）显示：PCV2 阳性检出率最高，为81.49%；PCV3、PCV1阳性检出率次之，分别为33.98%和8.04%；PCV4阳性检出率最低，为1.10%。上述结果说明目前已知的4 种PCV 基因型在湖南省内均有分布，以PCV2 感染为主。

表2 两种样品不同血清型PCV 的阳性率 %

2.2 混合感染情况

821 份样品中，存在PCV 感染的723 份，阳性检出率为88.06%，其中PCV1、PCV2、PCV3单一感染在723 份感染样品中分别占3.46%、55.0%和3.04%，无PCV4 单一感染。

723 份PCV 感染样品中，有278 份样品存在双重或三重混合感染，主要表现为双重感染，占93.17%。双重感染中，以“PCV2+PCV3”为主，阳性检出率为82.01%，而其他双重感染类型的阳性检出率较低，其中“PCV1+PCV2”为7.19%，“PCV1+PCV3” 为1.80%，“PCV2+PCV4” 为1.80%，“PCV3+PCV4”为0.36%；三重感染中，“PCV1+PCV2+PCV3”阳性检出率为5.76%，“PCV2+PCV3+PCV4”为1.08%。

2.3 不同地区情况

2.3.1 临床病料样品 临床病料样品检测结果（表3）显示，在151 份临床病料样品中，PCV1、PCV2、PCV3 和PCV4 的阳性检出率分别为4.64%、69.54%、16.56% 和3.31%。其中：PCV1与PCV2 阳性检出率最高的是湘北地区，分别为10.00%和80.00%；PCV3 阳性检出率最高的是湘东地区，为32.61%；PCV4 仅在湘西地区检测出5例阳性，分别来自3 个猪场。

表3 各地区临床病料样品中不同基因型PCV 阳性检出率%

2.3.2 屠宰猪群淋巴结样品 猪淋巴结样品检测结果（表4）显示，在670 份屠宰场样品中，PCV1、PCV2、PCV3 和PCV4 的阳性检出率分别为8.81%、84.18%、37.91% 和0.60%。其中：PCV1 阳性检出率最高的是湘南地区，为16.67%；PCV2 阳性检出率较高的是湘北和湘西地区，分别为92.73%和91.54%；PCV3 阳性检出率较高的是湘西和湘中地区，分别为57.69%和45.71%；PCV4 只在湘东地区检出4 例，阳性检出率为2.86%。

表4 不同区域淋巴结样品中不同基因型PCV 阳性检出率%

3 讨论

检测结果显示，PCV 在湖南省以PCV2 流行最为广泛，平均阳性检出率高达81.49%。从样品的混合感染情况可以看出，湖南省的PCV 感染以PCV2 单一感染及“PCV2+PCV3”混合感染为主，在阳性样品中的占比分别为55.0%和82.01%。

PCV1 普遍被认为不具有致病性，因此有关我国PCV1 检测的报道较少。在已有的报道[6-8]中，PCV1 阳性率为6.3%～34.0%。本调查发现湖南省PCV1 阳性检出率为8.04%，与已有报道基本一致。本调查发现，PCV1 在湖南省各地区均有分布，且健康屠宰猪样品阳性检出率高于临床病料，但阳性率均低于10%，其原因可能与PCV1 不具有致病性有关。

PCV2 在湖南省流行已有较长时间。研究[10]表明，2017—2018 年湖南省PCV2 阳性率为70.7%。本调查发现PCV2 阳性检出率为81.49%，略高于同时间段的其他报道，这可能与本次调查的样品既有临床健康屠宰猪群，也有临床发病猪群有关，但调查数据均表明PCV2 在湖南省流行较为严重。

PCV3 早在2014 年就已在我国部分地区商业猪场出现，而湖南省的感染情况于2017 年才被首次报道[12]。本调查发现PCV3 阳性检出率为33.98%，略高于刘相聪[13]2018 年对湖南省的PCV3 检测结果（30.43%），表明湖南省PCV3 流行可能有上升趋势。

PCV4 于2019 年在湖南省首次被发现[2]。本调查共检出PCV4 阳性9 份，阳性检出率为1.10%，与国内其他报道[14-16]相似。Zhang 等[2]2020年检测发现，湖南湘东、湘西、湘南和湘中地区均有PCV4 分布，其中湘中地区较多，占75%，而湘西地区无阳性。但本次调查发现，湖南省PCV4 呈小范围分布，仅在湘西地区2017 年临床病料样品和湘东地区2020 年屠宰场健康猪组织样品检测到PCV4 阳性，说明湖南省PCV4 早在2017 年就已经存在，其流行范围开始逐步扩大，需要引起重视，加强监测。

4 结论

调查发现：PCV1、PCV2 和PCV3 在湖南省内分布广泛，其中PCV2 流行最为严重，需要加强防控；PCV4 在湖南省呈局部分布，但流行范围有逐步扩大趋势，需要加强监测。