贵州半细毛羊胚胎移植效果

郭振刚, 吴 瑛, 吴 萍, 彭 华,周大荣, 吴蕊汝, 宋德荣

(毕节市畜牧兽医科学研究所，贵州 毕节 551700)

0 引言

【研究意义】羊的MOET(Multiple Ovulationand Embyo Transfer)技术即超数排卵和胚胎移植技术，是将超数排卵与胚胎移植相结合而发展起来的一项快繁技术，能显著提高羊的繁殖效率，在国内外羊的育种中得到广泛应用[1]。贵州半细毛羊是以历代羊为母本，罗姆尼羊和美利奴羊等为父本，经过 36年培育而成的肉毛兼用型绵羊新品种，该品种的培育为丰富贵州地区绵羊品种资源以及增加牧民的养殖收益、助力脱贫攻坚作出了积极贡献[2]。但贵州半细毛羊繁殖率低，仅为117.58%，属于秋季短日照发情绵羊品种，其生产节律为秋季配种，春季产羔，每年的2-7月为乏情期，空怀间隔时间长，严重影响和制约贵州半细毛羊的产业发展[3]。因此，引进繁殖率高的湖羊品种与贵州半细毛羊开展杂交，利用胚胎移植技术加快贵州半细毛羊多胎新品种培育具有积极意义。【前人研究进展】胚胎移植技术作为一项新的高效繁殖技术，为家畜迅速良种化提供了新的途径，已广泛应用于生产并发挥了巨大的商业价值[4-6]。目前，有关肉羊胚胎移植的季节因素、供受体选择、同期发情处理方法和高繁品种利用等方面已有一定的研究报道。宫旭胤等[7]研究表明，供体羊和受体羊冬季的发情率均显著高于春季，供体羊可利用卵子个数冬季高于春季，受体羊的受胎率冬季和春季差异不显著，冬季受体羊的繁殖率显著高于春季。何立雄等[8]采用PG+FSH方法对20只萨福克羊进行超数排卵处理,超排有效率为100%；采用2次PG注射法对100只哈萨克绵羊进行同期发情处理,24 h发情率为95%;胚胎移植后妊娠率为76.47%。陶萨茹拉等[9]采用递减法注射FSH进行超排处理，经同期发情、超数排卵及人工授精等过程后,胚胎合格率达89.28%，受体羊发情率达95%，受胎率为67.03%,繁殖率为71.06%。魏立明等[10]以国外优良肉羊品种杜泊和萨福克羊为供体、甘肃高山细毛羊为受体进行肉羊胚胎移植的妊娠率、产羔率、繁殖率和繁殖成活率分别为57.29%、99.52%、52.51%和52.26%，胚胎移植肉羊生长发育良好。【研究切入点】关于贵州半细毛羊的胚胎移植效果与研究目前未见报道，因此，研究其胚胎移植效果可为贵州半细毛羊的同期发情、胚胎移植等技术提供应用参考。【拟解决的关键问题】以贵州半细毛羊作为试验供体和受体，采用埋置孕酮栓结合注射PMSG、FSH的方法，对供体和受体羊分别进行同期发情处理，研究发情配种后贵州半细毛关的胚胎移植效果，以期为加快其多胎新品种培育进程及胚胎移植技术的推广应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物 供试母羊为贵州半细毛羊，配种公羊为湖羊，均由贵州新乌蒙公司提供。 供体羊10只，遗传能力稳定，无遗传疾病和传染病，体质健壮，发情周期正常，发情症状明显，年龄2～4周岁；受体羊20只，体型较大，哺乳力强，母性好，健康无疾病，年龄2～4周岁。

1.1.2 试验药品和器械 试验药品包括孕马血清促性腺激素(PMSG)、促卵泡素(FSH)、海绵阴道栓、PBS缓冲液、Holding液、生理盐水、酒精、碘酒、青霉素及新吉尔灭等，器械设备包括显微镜、恒温水浴锅、恒温箱、高压灭菌锅、手术创布、手术刀、手术剪、止血钳、三棱针、持针钳、手术架及镊子等。

1.2 方法

1.2.1 羊只同期发情与超数排卵处理

1) 供体：2020年10月13日下午埋置阴道栓，放栓当天记为0 d，第10天开始注射FSH，2次/d，间隔12 h注射1次,连续注射3 d。FSH注射总量为270 U/只，按剂量递减方式，第1天60 U，第2天45 U，第3天30 U。在第5次注射FSH的同时注射PMSG 330 U，注射后撤除阴道栓。撤栓后12 h试情，羊发情后配种，做好记录。配种后6.5 d手术采胚。

2) 受体：2020年10月13日下午埋置阴道栓，放栓当天记为0 d。第12天上午撤栓，同时注射PMSG 330 U，12 h后试情，做好记录。

1.2.2 供体羊发情配种与受体羊试情 配种采取人工辅助自然交配方式进行。首先采用试情法鉴定母羊发情，将腹部捆好布兜的试情公羊与试验母羊按照1∶30的比例混群，观察母羊的发情表现，如母羊接受试情公羊爬跨，即被认为发情。试情时间每天早上8:00和晚上18:00各 30 min。然后对发情母羊用精神旺盛、体质健壮、外生殖器官健康的湖羊公羊采取人工辅助自然交配方式配种，同时记录羊只耳号及发情时间。受体羊试情鉴定方法同上，但不配种。

1.2.3 胚胎采集 供体羊在配种后6.5 d手术冲胚。方法：将供体母羊固定在手术架上，术部剃毛、消毒，打开术口，检查黄体，冲胚(子宫角法)，术口缝合、消毒，下手术台。术后观察创口恢复情况，肌肉注青霉素1～3 d。

1.2.4 胚胎鉴定 把盛有冲胚回收液的表面皿放在立体显微镜下仔细观察，收集胚胎转移至装有Holding液的培养皿中暂时保存，并对胚胎进行鉴定、划分等级。

1.2.5 胚胎移植 采用手术法对受体羊进行胚胎移植。移植部位与供体母羊冲胚部位一致。观察受体黄体发育情况，淘汰无黄体的受体羊。抽好胚胎以后，将受体羊黄体发育良好一侧的子宫角取出将胚胎移植进去，移植好后将子宫轻轻塞进腹腔，将创口缝合、消毒。

2 结果与分析

2.1 供体羊超数排卵效果

由表1可见，10只供体羊全部发情配种，共收集胚胎106枚，平均冲胚10.60枚/只，可用胚胎73枚，平均可用胚胎7.3枚/只，胚胎合格率为68.87%。

表 1 贵州半细毛羊供体羊的胚胎采集数及合格率

2.2 供体和受体羊同期发情情况

同期发情共处理供体和受体羊30只，其中采用公羊试情法鉴定发情29只，同期发情率达96.67%。

2.3 胚胎移植效果

由表2可见，在可用胚胎中挑选36枚优质胚胎移植到19只受体羊，术后3个情期内共计观察到有8只受体羊返情，返情率为42.11%，以不返情为标准确认为妊娠，妊娠率为57.89%，其中双胚胎妊娠率为52.38%。

表 2 贵州半细毛羊胚胎移植数及妊娠率

3 讨论

试验采用的同期发情处理方案，是在贵州半细毛羊上2次优化而成。研究结果表明，贵州半细毛羊同期发情率达96.67%，高于茹婷等[11]在巴美肉羊上采取相同方法获得的94%，也高于方案优化前郭振刚等[12]在秋季贵州半细毛羊上采用相同方法获得的95%。10只贵州半细毛羊供体共计获得胚胎106枚，平均冲胚10.60枚/只，平均可利用胚胎7.3枚/只，高于闫振富等[13]超排的可用胚胎6枚/只、陶萨茹拉等[9]超排的可用胚胎6.36枚/只和奥旭东等[14]超排的可用胚胎4.45枚/只，达国内平均水平。可能是贵州半细毛羊的发情期集中在10月和处理方案较优所致。

试验中，挑选优质胚胎36枚移植到19只受体羊，在术后3个情期内共计观察到有8只受体羊返情，返情率为42.11%，以不返情为标准确认为妊娠，则妊娠率为57.89%，且双胚胎妊娠率高达52.38%。该试验结果低于陶萨茹拉等[15]研究的妊娠率61.83%；高于奥旭东等[14]研究的妊娠率53.67%，但是双胚胎妊娠率低于其65.02%的结果。国内绵羊鲜胚移植妊娠率在54.4%～60.0%，此次研究的妊娠率为57.89%，试验结果高于国内平均水平，超排效果明显。

4 结论

采取埋置孕酮栓+PMSG法进行同期发情和递减法注射FSH进行超数排卵、自然交配等处理后，同期发情率达96.67%，平均冲胚10.60枚/只，平均可用胚胎7.3枚/只，胚胎合格率为68.87%，在可用胚胎中挑选36枚优质胚胎移植到19只受体羊，术后3个情期内返情率为42.11%，妊娠率为57.89%，双胚胎妊娠率为52.38%。试验对贵州半细毛羊开展胚胎移植技术推广提供了参考依据。