全自动DNA图像分析系统在胰腺恶性肿瘤诊断中的价值

王 蕊，王 珩，吴 娟，纪晓坤，郭 晓，马 阳，杜 芸

（河北医科大学第四医院癌检中心，河北 石家庄 050011）

胰腺恶性肿瘤常见的类型是胰腺导管腺癌，约占所有胰腺恶性肿瘤的90%。尽管诊断和治疗技术不断进步，胰腺癌的死亡率仍然很高（5年生存率小于5%），这主要是由于诊断的延迟和胰腺癌极具侵袭性的生物学特性导致无法切除。因此，胰腺恶性肿瘤的早期诊断至关重要。超声内镜引导下细针穿刺（endoscopic ultrasound guided-fine needle aspiration，EUS-FNA）细胞学在诊断胰腺肿瘤中起着重要作用。但是胰腺EUS-FNA的诊断受到细胞病理学家的专业水平和经验的影响。DNA图像细胞术（DNA image cytometry，DNA-ICM）因其客观、方便、阳性率高等优点在诊断各种恶性肿瘤方面受到人们的关注。多项研究已经明确了DNA-ICM在诊断宫颈癌、食管癌、胃癌和口腔黏膜癌中的重要性，但其在胰腺恶性肿瘤中的应用报道较少，本研究就该技术在胰腺恶性肿瘤中的应用价值进行探讨。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集河北医科大学第四医院2016年10月—2019年7月收治的胰腺穿刺患者108例，男46例，女62例；年龄27～80岁，中位年龄58岁；患者影像学排除其他部位的转移，提示胰腺实性占位。本次实验病例还满足：①细胞量满足常规细胞学诊断及DNA-ICM检测；②具备最终诊断结果：除有明确的组织或细胞学病理诊断患者，其余患者随访大于1年且临床诊断明确；③患者或其家属同意参与研究并签署知情同意书。本次研究得到河北医科大学第四医院伦理委员会的批准。

1.2 标本的采集及处理

超声内镜采用环扫型电子超声内镜（奥林巴斯GFUCT240），穿刺针为超声内镜专用穿刺针（Wilson-COOK 22G）。EUS操作由内窥镜专家完成。现场Diff-Quik染色观察以确保标本足够。常规细胞学涂片用95%乙醇固定，HE法染色；DNA-ICM检测涂片用无水乙醇固定，Feulgen染色。对患者进行至少24 h的操作后观察。

1.3 DNA-ICM检测

涂片的染色及阅片步骤参见武汉兰丁公司DNA染色试剂及全自动DNA-ICM扫描系统说明书。以同张玻片上的正常上皮细胞和淋巴细胞为对照，通过测量染色后的细胞核DNA的综合光密度来测定细胞核DNA的含量。DNA指数（DNA index，DI）表示DNA含量：DI=被测细胞DNA光密度/正常细胞DNA光密度平均值；如果被测细胞处于G0/G1期，其光密度非常接近正常细胞的平均光密度，因此DI为1，即2C（1C为正常G0/G1细胞DNA含量的一半，2C细胞即二倍体细胞）；当细胞处于G2/M期时，其光密度约为正常细胞平均值的2倍，DI为2即4C，以此类推。根据AcCel lSavant软件系统提供的DNA倍体分析结果和建议，参照文献[3-8]制定本实验诊断标准，出现以下情况中的1种或1种以上，诊断为阳性病例：①出现＞5c的异倍体细胞；②出现异倍体峰；③4c细胞数占检测细胞总数的10%以上。

细胞学联合DNA-ICM诊断的规则：①如果其中任何一项检测为恶性肿瘤阳性，则认为阳性；②如细胞学诊断可疑，则认为组合结果为阳性；③如果两者检测均为阴性，则认为联合检测结果为阴性。

1.4 统计学方法

运用SPSS 19.0统计分析软件，组间比较采用四格表资料的

χ

检验及Fisher精确概率法，以

P

＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EUS-FNA细胞学诊断结果

108例患者经细胞病理学诊断恶性肿瘤59例（胰腺导管癌58例，神经内分泌癌1例），可疑恶性肿瘤23例（胰腺导管癌17例，胰腺腺泡细胞癌1例，神经内分泌肿瘤G2级3例，神经内分泌肿瘤G1级1例，胰腺炎1例），良性病变患者26例（胰腺导管癌6例，其他良性病变20例），见表1。4例神经内分泌肿瘤，细胞学诊断均未找到瘤细胞，考虑神经内分泌肿瘤，因为其具有潜在转移性，被归为可疑恶性肿瘤的范围。根据组织病理及临床随访结果，EUS-FNA细胞学诊断结果为，敏感性93.1%（81/87）、特异性95.2%（20/21）、阳性预测值98.8%（81/82）、阴性预测值76.9%（20/26）、准确率93.5%（101/108），见表2。

表1 EUS-FNA细胞学诊断结果（例数）

表2 EUS-FNA细胞学、DNA-ICM及两者联合诊断的诊断结果

2.2 DNA-ICM检测结果

DNA-ICM诊断结果，108例患者的细胞学检测中DNA-ICM诊断阳性81例（胰腺导管癌73例，神经内分泌肿瘤4例，胰腺腺泡细胞癌1例，神经内分泌癌1例，胰腺炎2例），阳性结果如图1所示；阴性27例（胰腺导管癌8例，其他良性病变19例），见表3。DNAICM诊断的各项指标分别为灵敏性90.8%（79/87）、特异性90.5%（19/21）、阳性预测值97.5%（79/81）、阴性预测值70.4%（19/27）、准确率90.7%（98/108），见表2和表3；DNA-ICM与细胞学诊断的上述5项指标差异均无统计学意义（均为

P

＞0.05）。

图1 DNA-ICM检测阳性结果

2.3 常规细胞学联合DNA-ICM检测

常规细胞学联合DNA-ICM检测诊断结果如表3所示，DNA-ICM联合细胞学诊断结果（表4），108例患者中联合诊断阳性85例，其中2例最终证实为胰腺炎，2例DNA-ICM诊断假阳性，其中1例细胞学诊断可疑癌细胞，另1例细胞学诊断阴性；阴性23例中有4例最终证实为胰腺导管癌，细胞学及DNA-ICM均阴性，两者联合的敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确率分别为95.4%（83/87），90.5%（19/21），97.6%（83/85），82.6%（19/23），94.4%（102/108），见表2和表4。两者联合诊断的敏感性、阴性预测值、准确率均高于单独诊断，但其差异均无统计学意义（均为

P

＞0.05）。

表3 DNA-ICM诊断结果（例数）

表4 两者联合诊断结果（例数）

3 讨论

EUS-FNA细胞学检测已被推荐为胰腺实性损伤的一线诊断工具，在胰腺占位性病变中具有诊断价值，目前的研究表明：EUS-FNA细胞学分析的诊断准确率为73.3%～94.8%。并且对胰腺的分期非常有用，该方法阴性预测值相对较低，为50%～85.2%。因此，如果临床高度怀疑胰腺病变为恶性肿瘤，而EUS-FNA阴性，则再次进行EUS-FNA细胞学检测，或者需要联合其他检查诊断肿瘤。关于EUS-FNA在胰腺囊性病变中的应用，争议颇多，如果诊断可能影响后续治疗，建议采用EUS-FNA，同时，可以进一步对抽吸液体进行生化分析。一项荟萃研究表明，EUS-FNA细胞学检测在胰腺占位性病变诊断中的合并敏感性为85%（95%置信区间为0.84～0.86），合并特异性为98%（95%置信区间为0.97～0.99）。本次研究中108例患者的胰腺占位，均为实性占位，诊断的敏感性、特异性、准确率相对较高，与之前的相关研究结果相似。

DNA-ICM是基于计算机的数字分析，用于定量评估染色体（DNA倍体）的变化，作为一种辅助检测，可用于多个器官肿物的良恶性判断。因此测定其细胞DNA含量可以作为临床诊断胰腺恶性肿瘤的客观依据之一。本研究发现，虽然DNA-ICM在胰腺癌的诊断中其各项诊断指标略低于细胞学，但具有很高的特异性和敏感性。在本次研究中有2例假阳性，均可见少许DNA异倍体细胞。1例细胞学诊断为可疑癌，考虑可能是由于胰腺炎导致的局部导管上皮增生，细胞核增大，出现＞5c细胞。同时，本次研究DNA-ICM诊断假阴性6例，镜下观察涂片上血细胞较多，DNA染色玻片上肿瘤细胞被覆盖，染色不佳。此外，还有4例肿瘤较小，取材较少，4例神经内分泌肿瘤均可见到＞5c的细胞，且3例G2期神经内分泌肿瘤均可见大量的DNA异倍体细胞，1例G1期的神经内分泌肿瘤可见少许DNA异倍体细胞。1例腺泡细胞癌可见大量的DNA异倍体细胞。DNA-ICM联合细胞学诊断的各项指标均高于单独细胞学诊断，但是其差异均无统计学意义。尤其是联合诊断的阴性预测值为82.6%高于单独细胞学诊断的76.9%，说明两者联合诊断阴性，较单独的EUS-FNA细胞学诊断阴性时，肿瘤良性的可能性更大。

综上所述，DNA-ICM作为细胞病理学诊断的一种辅助手段，具有客观、简单、省时、有效的优点。虽然诊断价值低于细胞病理学，但DNA-ICM检测仍然有很高的诊断准确性。作为一种辅助诊断手段，DNA-ICM在胰腺细胞学的临床诊断中有较大的应用价值。