疏乳消结颗粒的成型工艺

高粉梅 于 博 潘新波 王 信 赵丽娟 吴 晶 贾 忠，*

1.甘肃农业大学,甘肃 兰州 734000；2.兰州市第二人民医院，甘肃 兰州 730046；3.兰州市中医医院，甘肃 兰州 730050

乳腺增生属于中医学“乳癖”范畴，是中年妇女的一种常见的非炎症性疾病，以乳房肿块和乳房胀痛为主要临床表现，其发病率占乳腺疾病的首位，有癌变之潜能[1]。随着生活水平的提高，工作节奏的加快，自然环境和社会环境的变化，竞争意识的增强以及饮食结构的改变，其发病率有逐年升高的趋势[2]。因此提高本病的药物治疗疗效，对预防乳腺癌的发生有重要意义。

疏乳消结颗粒是兰州市第二人民医院的经验方，是以乳核内消方为基础的加减方，由柴胡、茜草、夏枯草、赤芍、青皮、甘草、丝瓜络、郁金、香附、橘核、当归、山慈菇12味药材配伍而成，具有疏肝活血、疏肝散结的功效[3]。临床应用于治疗乳腺小叶增生病，症见乳房肿胀，有肿块，月经前症状明显，经至又见好转。临床应用中除了治疗乳腺小叶增生病外，对治疗痛经及黄褐斑有明显的功效[4]。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津LC-10AVP高效液相色说谱仪(包括SPD-10AVP二极管阵列检测器，LC-10AT二元泵，C-R10A色谱工作站)；FA2004N电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；HX-12型电热真空干燥箱(重庆市大足医用设备厂)；CQX25-12超声波提取器(上海必能信超有限公司)；PDA紫外检测器(日本岛津公司)；HH-8恒温水浴锅(江苏省金坛市环宇可约仪器厂)。

1.2 材料 芍药苷(批号：110736-201136)、迷迭香酸(批号：R0200-50MG)均购自中国食品药品检定研究所；实验药材均购自兰州安泰堂中药饮片有限公司，由兰州大学马志刚教授鉴定；甲醇、乙腈为色谱纯；β-环糊精、可溶性淀粉、乳糖、糊精、蔗糖、微晶纤维素均购自甘肃恒链业生物有限公司。水为蒸馏水，其余均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 疏乳消结颗粒的制备 本研究通过分析组方中各药材有效成分的理化性质，采用Box-Behnken实验进行水煎煮提取。12味药材进行水煎煮提取。将所得干膏浸粉加入相应辅料，辅料比为浸膏∶可溶性淀粉∶乳糖∶糊精=1∶0.75∶0.25∶0.75。干膏浸粉，辅料，混合均匀加入60%乙醇制成手捏成团，压之即化的软材，于105 ℃下烘干1 h，过筛，收集能过1号筛不能过5号筛的颗粒[5]。

2.2 制备工艺研究

2.2.1 制剂工艺指标 疏乳消结颗粒在前期研究中发现，芍药苷、迷迭香酸的含量在整个研究过程中较稳定，因此在本实验中将疏乳消结颗粒的浸膏得率，芍药苷含量以及迷迭香酸含量的综合指标作为提取工艺的指标[6]。将每个指标均标准化为 0～1之间的归一值，采用 Hassan 法对指标分别进行数学转换，计算归一值(di)=(Yi-Ymin) /(Ymax-Ymin) 。式中，Yi 为实测值， Ymin和 Ymax为每一指标在不同次试验中测得的所有值中的最小值和最大值。对各指标的 di 按“OD = ( d1 × d2 … × dn)1 /n”求得几何平均数[7]，即得总评归一值(OD) 。

2.2.2 色谱条件 色谱柱：Diamonsil 5 μm C18(2)250×4.6 mm；流动相：以乙腈为流动相 A，以 0.1%磷酸溶液为流动相 B；梯度洗脱：0～10 min，A-B(10∶90)，10～30 min，A-B(90∶10)，30～45 min，A-B(10∶90)；流速 1.0 mL/min；柱温室温[8]；进样量20 μL；检测波长：253 nm；理论塔板数按对照品芍药苷、迷迭香酸计算分别不低于3000。

2.2.3 溶液的配制 精密称定疏乳消结颗粒1 g，置250 mL容量瓶中，加入50%乙醇溶液约 100 mL，称定重量，超声处理(功率300 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用30%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液再经0.45 μm微孔滤膜过滤后，即得[9]。

精密称取五氧化二磷真空干燥12 h的芍药苷，迷迭香酸对照品，加甲醇制成浓度分别为210、208 μg/mL的混合溶液。精密吸取上述制备的溶液各20 μL，按照色谱条件注入色谱仪。结果如图1所示。

1.芍药苷；2.迷迭香酸；A.混合对照品溶液；B.供试品溶液图1 高效液相色谱图

2.2.4 线性关系的考察 分别精密吸取“2.2.3条件下的混合对照品溶液2、4、6、10、20 μL，按“2.2.2”项下色谱条件下进样，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程：芍药苷Y=3468.7X+3609.1(R=0.9996);迷迭香酸Y=995.11X+1379(R=0.9991)。结果表明，芍药苷，迷迭香酸含量分别在10.5～210、10.4～208 μg范围内线性关系良好。

2.2.5 精密度实验 精密吸取“2.2.3”条件下的混合对照品溶液各20 μL连续进样6次，记录峰面积，计算含量，结果芍药苷，迷迭香酸含量RSD分别为0.89%，1.57%。结果表明机器精密度良好。

2.2.6 重复性实验 称取同一批号(20200703)疏乳消结颗粒6份，按“2.1”方法制备，在“2.2.2”条件下进样测定。结果显示，6份疏乳消结颗粒中芍药苷，迷迭香酸RSD 分别为0.87%，1.63%，结果表明该方法重复性良好，符合分析测试要求。

2.2.7 稳定性实验 取同一供试品溶液，室温下分别于0、2、4、8、15、24 h进行测定，结果芍药苷，迷迭香酸含量RSD分别为2.13%，0.87%。

2.2.8 加样回收率 实验精密称取已知含量的同一批样品(批号：20200703)0.2 g，加入芍药苷(0.058 mg/mL)1 mL，迷迭香酸(0.22 mg/mL)1mL，制成供试品溶液，精密吸取6份供试品溶液，注入高效液相色谱仪。芍药苷平均加样回收率为99.54%，RSD=0.47%，迷迭香酸平均加样回收率为99.81%，RSD=1.14% (n=6)。

2.2.9 Box-Behnken优化设计 采用Design-Expert8.0.6软件中的Box-Behnken试验设计方案，选取提取时间(A)，加水量(B)，提取次数(C) 作为影响因素[10]，以芍药苷、迷迭香酸含量及浸膏得率的综合指标为观察指标，设计实验。因素水平及结果见表1、表2。

表1 因素与水平

表2 Box-Behnken实验结果

2.2.10 模型拟合与方差分析 采用Design Expert8.0.6软件处理数据，以浸膏得率为评价指标进行二项式拟合，得到回归方程R=18.04+0.46A-0.16B+4.72C-0.13AB+020AC-1.21BC-0.81A2+0.49B2-0.61C2(R=0.9737)。结果表明，多元二次方程相关系数较高，拟合效果较好。采用ANOVA分析回归参数，由表3可知，二项回归方程失拟项没有显著差异，拟合项差异极显著，说明该回归方程可以对任何条件下的提取工艺进行预测。三维响应曲面图如图2所示。

表3 方差分析

表3 方差分析

图2 各因素对OD值的响应曲面图

利用Design Expert8.6.1软件拟合结果显示最优工艺为加8倍量水，煎煮3次，每次60.52 min,考虑到实际情况，将提取工艺条件定为加8倍量水，煎煮3次，每次70 min。

2.2.11 验证试验 按照Box-Behnken试验优选出的最佳制备工艺参数生产 3 批疏乳消结颗粒颗粒(批号：202004，202005，202006)，进行验证实验，与预测值的偏差为 0.0031%，偏差较小，表明所选工艺稳定性好，可信度高。结果见表4。

2.3 辅料选择

2.3.1 辅料种类的筛选 以颗粒制剂常用的辅料可溶性淀粉，乳糖，糊精，蔗糖，微晶纤维素为考察对象。分别于已制得的浸膏按1∶1的比例混匀，干法制粒，并测定吸湿率，优选出防潮效果好、经济且实惠的辅料[11]。5种辅料吸湿结果见表5。

表4 工艺验证结果

表5 五种辅料吸湿比例表

从上表中可以看出，五种辅料的吸湿率：可溶性粉淀粉>乳糖>糊精>蔗糖>微晶纤维素。考虑到经济与口感等问题，研究中选用乳糖，可溶性淀粉，糊精3种辅料联合配用作为本实验中颗粒剂的辅料。

2.3.2 辅料配比的选择 按照上述实验方法优选出防潮效果较优的辅料，考虑3种辅料连用以降低制剂成本与辅料用量。实验以吸湿率，成型率，休止角为考察对象，筛选适宜的辅料用量比。

综合得分计算方法如下：①一次成型率分值=实验一次成型率/最大一次成型率；吸湿率=(吸湿后浸膏粉质量-吸湿前浸膏粉质量)/吸湿前浸膏粉质量×100%；休止角分值=1/(实验休止角/最大休止角)。②综合得分=一次成型率分值×40+吸湿分值×30+休止角分值×30[12]。

表6 因素水平表

表7 正交实验设计及结果

2.3.3 正交实验结果 由表8方差分析结果可以看出，糊精，乳糖，可溶性淀粉与浸膏的比值均没有显著影响，得到最佳工艺条件为糊精∶浸膏=0.75∶1，乳糖：浸膏=0.25∶1，可溶性淀粉∶浸膏=0.75∶1。

2.3.4 验证试验 按优选的最佳条件进行3次验证试验，糊精∶浸膏=0.75∶1，乳糖∶浸膏=0.25∶1，可溶性淀粉∶浸膏=0.75∶1。结果见表9。表明该工艺稳定可行。

表8 方差分析

表9 验证实验

3 讨论

疏乳消结颗粒遵循“肝欲散，急食辛以散之”之要，以疏肝理气为主，活血散结为辅，使肝郁得疏，血瘀得化，结癖得散；补肝体，助肝用，体用同治[13]；理气养血活血，气血兼顾；疏通乳络，软坚散结。前期试验发现疏乳消结颗粒适合用水提取。因此选取提取时间，加水倍数，提取次数3个影响因素，基于Box-Behnken试验，以综合测评法优选出疏乳消结颗粒的最佳提取工艺。试验结果表明，最佳提取工艺为加8倍量水，提取3次，每次70 min。在前期试验发现，加水倍数并不能影响提取率、芍药苷及迷迭香酸的含量，而随着提取时间与次数的增加，浸膏得率、芍药苷及迷迭香酸的含量也随着增加。在后面的验证实验中也证实了这一点。因此，选择加8倍量水，提取3次，每次提取时间为70 min的最佳提取工艺。

疏乳消结颗粒浸膏粉吸湿性较强，直接制粒有很大的困难。选择临床常用的几种辅料，选出适合疏乳消结颗粒的辅料。经测定发现可溶性淀粉，乳糖，糊精3种辅料与疏乳消结颗粒浸膏粉合用能够大大提高疏乳消结颗粒的抗潮效果。考虑到经济等各种因素，选择这3种辅料连用。采用正交实验优选辅料的最佳配比，以成型率、休止角及堆密度的综合评分为考察指标，优选出最佳配比为浸膏∶可溶性淀粉∶乳糖∶糊精=1∶0.75∶0.25∶0.75。

研究采用多指标综合测评法为保证疏乳消结颗粒提取与辅料添加的客观准确性。浸膏得率、芍药苷及迷迭香酸含量考察了疏乳消结颗粒的提取工艺。以成型率、休止角及堆密度为指标考察了辅料配比的最优工艺，全面考察了辅料种类及用量对颗粒成型的影响。本研究中疏乳消结颗粒的成型工艺研究较为全面，可以为疏乳消结颗粒的制备工艺提供参考。