不同处理方式对鲜丹参丹酚酸 B和丹参酮 IIA 含量的影响

李 浪，刘文超，钟亚楠，贾 萌，霍 旋，阎 岩

（1.铜川职业技术学院 孙思邈医学院，陕西 铜川 727031；2.陕西起源农业科技有限责任公司，陕西 铜川 727031；3.延安大学 生命科学学院，陕西 延安 716099）

丹参是Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，具有祛瘀止痛、活血通经以及清心除烦之功效，临床常用于冠心病、心绞痛等心脑血管疾病的治疗[1,2]。研究发现，丹参的功效主要源于以丹酚酸B为主的水溶性成分和以丹参酮IIA为主的脂溶性成分，故而中国药典（2015年版）也以丹酚酸B（≥3%）和丹参酮IIA（≥0.25%）作为丹参药材的质量控制指标[3]。周铜水等[4]研究发现，新鲜药材丹酚酸B含量甚微，干燥后含量明显增加，认为是干燥过程中经干燥胁迫诱导的产物，而非栽培期的原始积累成分，尽管丹参酮ⅡA和隐丹参酮等丹参酮类成分鲜丹参含量较高，但在干燥过程中也增加了1倍，故而认为它们也是干燥诱导产物。李冰等[5]研究认为，新鲜丹参中含有丹酚酸B，同时含有能够将丹酚酸B转化的物质存在，合理推测认为这种能够将丹酚酸B转化的物质是生物酶，因为生物酶的存在导致鲜丹参丹酚酸B的含量较低，但没有再进行深入研究。笔者对不同产地的鲜丹参进行不同方式的处理，以探究鲜丹参是否存在能够分解丹酚酸B和丹参酮类的生物酶以及生物酶对鲜丹参品质的影响。

1 材料

1.1 试剂

鲜丹参3批，购自陕西天士力植物药有限公司，产地分别为商洛、渭南和铜川，所有药材均经鉴定为唇形科植物丹参（Salviamiltorrhiza Bge.）的干燥根和根茎；丹参酮ⅡA对照品（批号:110766-201721）以及丹酚酸B对照品（批号:111562-201716）均购自中国药品生物制品检定所；乙腈、磷酸均为色谱纯，试验用水均为纯净水，乙醇、甲醇及盐酸等为分析纯。

1.2 仪器

Waterse 2695-2998 液相色谱仪（美国沃特世科技有限公司），离心机（上海安亭科学仪器厂），可见紫外检测器（青岛埃仑通用科技有限公司），电子天平（深圳市恒志福科技有限公司）。

2 实验方法

2.1 对照品溶液配制方法

丹参酮类对照品溶液配制:精密称取丹参酮IIA对照品20 mg，置于10 ml容量瓶中，加无水甲醇定容至刻度混匀（浓度2 mg/ml），移液枪吸取1 ml配置好的母液，置于50 ml容量瓶中，再加无水甲醇定容至刻度混匀（浓度0.02 mg/ml），配制好的对照品放入棕色瓶，4℃备用。丹酚酸B对照品溶液配制:精密称取丹酚酸B对照品10 mg，置于50 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，配制好的对照品放入棕色瓶，4℃冰箱备用。

2.2 供试品溶液制备方法

称取3份商洛鲜丹参，每份10 g，均先切片后再采用不同的处理方法进行处理。第一种处理方式:放入烧杯，加蒸馏水100 ml，静置30 min，搅碎，搅匀，离心，取上清液作为供试品溶液；第二种处理方式:放入盛有100 ml煮沸的蒸馏水烧杯中，水浴30 min，晾至室温，搅碎，搅匀，离心，取上清液作为供试品溶液；第三种处理方式:放入至盛有甲醇100 ml的烧杯中，静置30 min，搅碎后，搅匀，离心，取上清液作为供试品溶液。渭南和铜川产地的鲜丹参采取相同的处理方式对鲜丹参进行处理，总共获得供试样品9份，做好标记，4℃冰箱备用。

2.3 色谱条件

色谱柱:Waters C18（250 mm× 4.6 mm，5μm）；柱温:27℃。丹参酮ⅡA测定，流动相乙腈-0.1%磷酸溶液（22∶78）；检测波长270 nm，进样量:20 μL，流速1 ml/min，理论板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2 000。丹酚酸B测定，流动相甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）；检测波长288 nm，进样量:20 μL，流速1 mL/min，理论塔板数按丹酚酸B峰计算，应不低于4 000。

2.4 样品含量测定

取制备好的供试品溶液，依据设定好的检测条件对不同产地丹酚酸B和丹参酮IIA质量分数进行检测，用外标法计算。

2.5 其他

系统适用性试验、精密度试验、重复性试验、稳定性试验、回收率试验以及线性考察等方法参照《中国药典》2015年版四部丹参中丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量测定方法进行。

3 结果与分析

3.1 不同产地丹酚酸B和丹参酮IIA含量测定

经检测，不同产地丹参丹酚酸B和丹参酮IIA的含量不同，总体而言铜川丹参品质最优，丹酚酸B和丹参酮IIA均显著优于渭南，渭南的丹参品质优于商洛，它们两者之间比较具有显著差异（均P＜0.05），详见表1。

表1 不同产地丹酚酸B和丹参酮IIA质量分数测定结果（n=3）

3.2 不同处理方式对丹酚酸B和丹参酮IIA含量的影响

尽管产地不同，所有经过立即处理的鲜丹参丹酚酸B和丹参酮IIA含量均高于经自然晾晒后变干的鲜丹参，除第一种蒸馏水处理的鲜丹参丹酚酸B和丹参酮IIA含量与自然晾晒无明显差异外，其余2种处理方式均能够显著增加鲜丹参丹酚酸B和丹参酮IIA含量（均P＜0.05）。经切片后沸水煮沸后的第二种处理方式丹酚酸B含量高于另外三种处理方式，总体而言第二种处理方式高于第三种处理方式，第三种处理方式显著高于第一种处理方式。数据详见表2。

表2 不同处理方式对丹酚酸B和丹参酮IIA含量的影响

4 讨论

经HPLC检测，铜川产地丹酚酸B和丹参酮IIA含量均最高，说明产地不同品质存在明显差异，可能与当地的气候、土壤等因素存在密切关系。与此同时，研究发现，通过不同处理方式对鲜丹参进行处理，不同产地丹酚酸B和丹参酮IIA含量几乎存在相同的规律，即相较于用蒸馏水直接水提，甲醇提和沸水提丹酚酸B和丹参酮IIA明显较高，认为是经沸水和甲醇处理后，存在于细胞内和细胞浆之间的能够将丹酚酸B转化为其他物质的生物活性酶活性降低，分解丹酚酸B的能力降低所致[6]。相较于甲醇，沸水对生物酶活性的破坏更为彻底，故而经沸水预处理后的鲜丹参丹酚酸B含量更高，这一现象同样体现了丹参酮ⅡA的含量变化，故而推测鲜丹参体内是否也存在一种影响丹参酮ⅡA稳定性的物质，这需要进一步的研究进行证明。