黄芪颗粒联合辅酶Q10 治疗病毒性心肌炎患儿的疗效以及对外周血miR-133、miR-155的影响*

杜少英 武延秋 韩敬波 赵君华

病毒性心肌炎由柯萨奇B组病毒、巨细胞病毒、肠病毒等感染引起，病情迁延可引起各种心律失常、房室传导阻滞、扩张型心肌病、心力衰竭甚至死亡[1]。目前病毒性心肌炎的治疗缺乏有效的方法，西医以抗病毒、免疫治疗、抗心律失常、改善心肌代谢等方法为主，但是疗效欠佳[2]。中医认为病毒性心肌炎发病病机为正气不足，外邪入侵，累及心脉导致气血两虚，治疗以补气升阳，活血益气为主。黄芪颗粒主要成分为黄芪，具有补气升阳固表，抗病毒、调节免疫、抗细胞凋亡等功效，主要用于心悸、多汗、病毒性心肌炎等治疗，效果确切[3]。病毒性心肌炎发病机制复杂，病毒感染介导免疫反应引起心肌损伤是其主要病理基础，微小RNA是一类小编码RNA，在细胞增殖、炎症反应、免疫调节等病理生理过程中发挥重要作用[4]，其中miR-133、miR-155已证实参与心肌炎、心血管疾病发病，对疾病的临床诊治均有重要价值[5]。本研究拟探讨黄芪颗粒联合辅酶Q10 治疗病毒性心肌炎患儿的疗效以及对外周血miR133、miR-155的影响，旨在为临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2017-03-2019-06河北中西医结合儿童医院收治的100例病毒性心肌炎患儿，纳入标准：(1)符合病毒性心肌炎诊断标准[6]；(2)年龄≤12岁；排除标准：(1)先天性心脏病、代谢性疾病导致的心肌损伤；(2)肝肾功能不全；(3)既往有病毒性心肌炎病史。采用随机数字表法将其分为两组，每组各50例，另选择同期于本院儿科保健门诊体检的50例健康儿童为对照组，三组受试者年龄、性别比较无统计学差异(P>0.05)，常规治疗组与联合治疗组病程，并发心律失常、并发心力衰竭比例比较无统计学差异(P>0.05)，见表1。本研究获得本院伦理会批准(批准文号：2017020102)，患儿监护人均知情同意并签署同意书。

表1 各组基线资料比较

1.2 方法

病毒性心肌炎患儿入院后均卧床休息，必要时吸氧，给予抗病毒、免疫抑制、抗氧化、改善心肌代谢等治疗。常规治疗组：辅酶Q10(杭州民生药业有限公司，国药准字H19999547)1mg/kg/天，分2-3次口服。联合治疗组：在常规治疗组的基础上增加黄芪颗粒(四川百利药业有限责任公司，国药准字Z20003380)口服，4g/次，每日2次。两组患儿均连续用药2周。

1.3 观察指标和方法

病毒性心肌炎患儿分别于治疗前、治疗1周、治疗2周(对照组于体检当日)采集外周静脉血6ml平均注入干燥试管，待血液凝固后取上层液离心，取血清-30℃保存用于检测心肌酶和血清miR-133、miR-155表达。采用美国BECKMAN-CX20型全自动生化分析仪检测肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)、肌酸激酶同工酶(Creatine Kinase Isoenzyme，CK-MB)、乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase，LDH)。取血清样本加入TRIzol(美国Invitrogen公司)充分混匀，提取总RNA，ND-1000 紫外分光光度计(美国NanoDrop 公司)检测RNA纯度和完整性，选择A260 /A280 比值1.8-2.0 的RNA样品 ，M-MLV 逆转录酶(Epicentre 公司)按照试剂盒说明将其转录为cDNA。CFX96实时荧光PCR 仪(美国Bio-Rad)检测miR-133、miR-155表达，以U6 snRNA 为内参，采用2-ΔΔCt计算miR-133、miR-155的相对表达量。

1.4 疗效判断

参照《中药临床新药研究指导原则》评估患者治疗2周后临床疗效[7]: 显效，临床症状体征基本消失，心电图、心肌酶等恢复正常; 有效，临床症状体征有所改善，心电图、心肌酶谱有所改善; 无效，临床症状体征、心电图、心肌酶未见改善甚至加重。有效率=(显效例数+有效例数)/总例数×100%。

1.5 不良反应观察

观察两组患儿治疗过程中是否有过敏反应、消化道反应等不良反应发生。

1.6 统计学处理

2 结 果

2.1 两组疗效比较

治疗2周后，联合治疗组治疗有效率高于常规治疗组(P<0.05)，见表2。

表2 两组疗效比较 (n, %)

2.2 血清心肌酶比较

治疗前，常规治疗组与联合治疗组血清CK、CK-MB、LDH水平差异无统计学意义(P>0.05)。常规治疗组、联合治疗组内治疗前、治疗1周、治疗2周血清CK、CK-MB、LDH水平变化差异显著(P<0.05)，CK、CK-MB、LDH均呈降低趋势，联合治疗组治疗1周、治疗2周血清CK、CK-MB、LDH水平均低于常规治疗组(P<0.05)。常规治疗组和联合治疗组治疗前、治疗1周、治疗2周血清CK、CK-MB、LDH水平均高于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 常规治疗组、联合治疗组治疗前后以及与对照组血清CK、CK-MB、LDH 差异

2.3 血清miR-133、miR-155比较

治疗前，常规治疗组与联合治疗组血清miR-133、miR-155水平差异无统计学意义(P>0.05)。常规治疗组、联合治疗组治疗前、治疗1周、治疗2周血清miR-133、miR-155水平变化差异显著(P<0.01)，两组miR-155均呈降低趋势，miR-133呈增高趋势，联合治疗组治疗1周、治疗2周血清miR-155水平低于常规治疗组(P<0.05)，miR-133高于常规治疗组(P<0.05)。常规治疗组、联合治疗组治疗前、治疗1周、治疗2周血清miR-133低于对照组(P<0.05)，miR-155高于对照组(P<0.05)。见表4。

表4 常规治疗组、联合治疗组和对照组血清miR-133、miR-155 差异

2.4 两组不良反应比较

两组治疗期间不良反应发生率比较无统计学差异(P>0.05)，见表5。

表5 两组不良反应发生率比较(n, %)

3 讨 论

病毒性心肌炎是常见的儿科疾病，多继发于病毒感染，免疫细胞介导的心肌炎症反应是导致心肌水肿、充血、炎性细胞浸润，心脏功能下降的主要原因[8]。病毒性心肌炎是小儿获得性心衰、心肌病和心脏移植的主要病因，早期治疗对改善预后有益。抗炎、免疫抑制、免疫调节剂和抗病毒治疗效果不理想，长期服用易产生耐药性，导致病情迁延不愈。中医认为病毒性心肌炎属于“心悸”、“胸痹”、“怔忡”范畴，邪毒犯心，阻遏心气，耗伤心阴，心阴阳失调，气血失活，进而导致心功能减弱，出现胸闷、发热、心悸等症。气虚阴虚、气虚血瘀是病毒性心肌炎的主要病机，应以益气养阴、补气行血为治疗大法[9,10]。

本研究中患者治疗后心肌酶CK、CK-MB、LDH水平均下降，说明两种治疗方法对改善心肌损伤均有一定价值。黄芩颗粒是由黄芩加工而成的中成药，黄芪具有扶正固本、益气活血、补气升阳功效，曾用于治疗气虚血瘀证[11]，治疗病毒性心肌炎与其病机相吻合。从西医药理来讲，黄芪主要活性成分黄芪皂苷、黄芪多糖、异黄酮类等参与心肌代谢，可增强心肌收缩和心排血量，并具有抗病毒，保护心肌的作用[12，13]。黄芩还具有扩血管和降压作用，对于改善心功能，降低心律失常的发生也有重要意义[14]。本研究中联合治疗组治疗有效率高于常规治疗组，且治疗1周、治疗2周CK、CK-MB、LDH水平降低较常规治疗组更明显，辅酶Q10具有抗氧化、清除自由基、增加心肌收缩力、为心肌提供氧气，改善心肌缺氧，因此在基础治疗上应用辅酶Q10对于改善心肌代谢，减少心肌缺氧性损伤有益。

病毒性心肌炎患儿体内多存在微小RNA表达异常，miR-133可通过抑制ERG(一种癌基因)表达，调节心肌细胞钾离子通道，进而抑制病理性QT 间期延长介导的心肌电生理重塑[15]。miR-133表达失常可导致病毒性心肌炎患儿发生恶性心律失常及心功能下降[16]。miR-155可抑制成纤维细胞增殖，促进成纤维细胞炎症反应[17]，病毒性心肌炎大鼠miR-155显著上调，敲除miR-155后心肌细胞损伤及炎症反应明显减轻[18]。以上结果均说明miR-133、miR-155可能参与了病毒性心肌炎的发生。本研究结果显示经临床治疗后两组患儿血清miR-155水平下降，miR-133水平上升，说明随着临床干预时间延长，miR-133、miR-155表达出现一定程度变化，可能与病毒毒性得到控制，心肌代谢得到改善，心肌缺血缺氧、炎性损伤、免疫反应得到抑制有关。联合治疗组治疗1周、治疗2周miR-155表达低于常规治疗组，miR-133表达高于常规治疗组，说明黄芩颗粒联合辅酶Q10能更好的抑制miR-155表达，上调miR-133表达，进而保护心肌功能。黄芩颗粒联合辅酶Q10对miR-133、miR-155调控机制尚不清楚，miR-155在病毒性心肌炎表达上调可能与病毒感染介导免疫应答，激活促炎细胞因子释放有关，而黄芩颗粒中黄芩通过靶向丝裂原活化蛋白激酶14、肿瘤坏死因子受体超家族成员1A、表皮生长因子受体、E-选择素等，抑制炎性因子生成或炎性因子与受体结合，进而阻断炎症反应[19]，因此在炎症反应得到抑制时，miR-155表达明显下降。miR-133在病毒性心肌炎患儿表达下调的原因为病毒性心肌炎患儿心肌缺血缺氧，肌细胞增强因子-2、肌分化因子-1表达下调，导致上游调控基因miR-133转录作用下降，表达下调[20]。黄芩可扩血管，增加心肌血液和氧气供应，因此经治疗后miR-133表达逐渐上调。

综上，本研究结果显示黄芪颗粒联合辅酶Q10 治疗病毒性心肌炎具有显著疗效，且能降低血清心肌酶水平，下调miR-155表达，上调miR133表达，保护心肌功能，在儿童病毒性心肌炎治疗中具有较高应用价值。

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