维生素B6 乙酰水杨酸衍生物的制备研究

史兰香，牟 微，王永彬，张宝华

（1.石家庄学院 化工学院，河北 石家庄 050035；2.赵县农业农村局，河北 石家庄 051530）

0 引言

B 族维生素在同型半胱氨酸代谢中起着重要作用，当饮食中及血循环中维生素B 含量低时，同型半胱氨酸便可积聚. 同型半胱氨酸可促进血小板激活，使血小板的粘附性和聚集性亢进，使血栓易于发生. 研究表明，叶酸、维生素B6 和维生素B12 可降低血清中同型半胱氨酸浓度，从而减少冠心病等的发病率. 维生素B6 是体内辅酶的组成成分，是人体脂肪和糖代谢的必需物质，与氨基酸代谢关系密切[1]. 维生素B6 可以使二磷酸腺苷（ADP）及肾上腺素诱导的血小板聚集明显受抑，使胶原诱导的血小板聚集轻度受抑，具有一定的抑制血小板凝集与血液凝固的作用[2，3]. 但维生素B6 是易于相互转换的3 种吡啶衍生物-吡哆胺、吡哆醛、吡哆醇的总称，其水溶性很强，不耐高温，遇光和遇碱易被破坏失效，生物利用度较低.

阿司匹林（乙酰水杨酸）为抗血小板聚集药. 它通过对血小板的环氧合酶乙酰化来减少血栓素A2 的生成，从而不可逆地抑制血栓素A2 诱导的血小板聚集产生，具有阻抑血小板诱聚剂二磷酸腺苷或肾上腺素诱导血小板聚集作用，对低浓度胶原、凝血酶、抗体-抗原复合物、某些病毒和细菌所致的血小板聚集也具有抑制作用[4-7]. 但阿司匹林分子中含有羧基，口服给药对胃黏膜有刺激性，长期使用易引起胃溃疡及导致肾脏毒性. 为了克服维生素B6 和阿司匹林单独用药存在的缺点，依据药物拼合原理，本研究基于维生素B6 与乙酰水杨酸的抑制血栓功能，以维生素B6 与乙酰水杨酰氯为原料，在碱存在的条件下，制备了新型维生素B6 乙酰水杨酸衍生物，以期获得具有双重抑制血栓功能的前药，提高其生物利用度.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

AC-500 型核磁共振仪（Bruker 公司）；QX-200 型血小板聚集仪（上海隆拓仪器设备有限公司）；6460 型质谱仪（安捷伦公司）；EA 2400 II 型元素分析仪（珀金埃尔默公司）；维生素B6、乙酰水杨酰氯和二磷酸腺苷购于国药集团化学试剂有限公司；其他试剂均为分析纯.

1.2 方法

1.2.1 维生素B6 乙酰水杨酸衍生物的制备

将102.5 g（0.5 mol）维生素B6 悬浮于500 mL 有机溶剂中，加入 1.65 mol 碱，加热至一定温度，加入217.8 g（1.1 mol）乙酰水杨酰氯，保温反应一定时间后，过滤除盐，加入250 mL 水，搅拌，分层，有机溶剂萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，硅胶柱层析纯化[淋洗液∶V（石油醚）∶V（乙酸乙酯）=5∶1]，制得维生素 B6 乙酰水杨酸衍生物，收率为 93.7%.1H NMR（400 MHz，DMSO-d6），δ：10.62（brs，1H，HOAr），9.61（s，1H，CHAr），7.95～8.00（m，2H，CHAr），7.53（m，2H，CHAr），7.10～7.30（m，4H，CHAr），5.51（s，2H，CH2Ar），4.79（s，2H，CH2Ar），2.61（s，3H，CH3），2.34（s，6H，CH3）. ESI-MS（m/z）：494[M+H]+. 元素分析：C26H23NO9，计算值：C，63.28，H，4.70，N，2.84；实测值：C，63.26，H，4.71，N，2.85.

将维生素B6 乙酰水杨酸衍生物溶于乙酸乙酯中，加入等摩尔量的氯化氢乙酸乙酯溶液，在室温条件下搅拌2 h，过滤，干燥，制得维生素B6 乙酰水杨酸衍生物盐酸盐，收率100%. 合成路线如图1 所示.

图1 维生素B6 乙酰水杨酸衍生物合成路线

1.2.2 体外血小板聚集的抑制

抗凝血离心分离富血小板血浆（PRP）和贫血小板血浆（PPP）. 以生理盐水为阴性对照，以乙酰水杨酸和维生素B6 为阳性对照，分别配制0.5，1.0，2.0 g/L 的维生素B6 乙酰水杨酸衍生物水溶液，分别加入富血小板血浆，于37 ℃下搅拌10 min，再加入二磷酸腺苷诱聚剂，记录5 min 内最大聚集率，利用式（1）计算药物的聚集抑制率：

2 结果与讨论

2.1 溶剂的筛选

以三乙胺为碱，固定反应温度为室温，反应时间6 h，按1.2.1 节操作，对有机溶剂进行筛选（表1）. 结果表明，相同反应条件下，以二氯甲烷为溶剂时，产物收率最高，而以乙酸乙酯为溶剂时，产物收率略低. 但考虑到二氯甲烷在制药行业属二类溶剂，毒性较大，本着药物制备尽量选择低毒溶剂的原则，优选乙酸乙酯为反应溶剂.

表1 溶剂的筛选

2.2 碱的筛选

固定反应温度为室温，反应时间6 h，乙酸乙酯为溶剂，按1.2.1 节操作，对碱的种类进行筛选（表2）. 结果表明，以三乙胺为碱时，产物收率最高. 以碳酸氢钠与醋酸钠为碱时，收率明显降低，原因可能是在乙酸乙酯中它们的溶解性较差，对反应产生的氯化氢中和速度较慢，影响了酯化反应的进行. 以碳酸钾为碱时，收率最低，原因是碳酸钾碱性较强，与维生素B6 结构中的酚羟基形成了钾盐，钾盐与乙酰水杨酰氯进一步发生反应，产生了副产物，导致收率低. 因此，为确保维生素B6 结构中的酚羟基不发生或少发生副反应，所选缚酸剂的碱性强弱一定要适中，这也是影响产品收率的关键因素之一，优选三乙胺为碱.

表2 碱的筛选

2.3 反应温度的影响

固定反应时间6 h，乙酸乙酯为溶剂，三乙胺为碱，按1.2.1 节操作，考察反应温度对反应的影响，如表3所示. 结果表明，随着反应温度的升高，产物收率增大，这说明升温可以加快该反应的进行. 当反应温度为45～50 ℃时，产物收率达到93.7%，继续升温至回流，收率不再有大的改变，故优选反应温度为45～50 ℃.

表3 反应温度的影响

2.4 反应时间的影响

固定乙酸乙酯为溶剂，三乙胺为碱，反应温度45～50 ℃，按1.2.1 节操作，考察反应时间对反应的影响（表4）. 结果表明，随着反应时间的延长，产物收率逐渐提高，反应时间为5 h 时，产物收率最高，继续延长反应时间，产物收率不再发生变化，故优选反应时间为5 h.

表4 反应时间的影响

2.5 摩尔配比的影响

固定乙酸乙酯为溶剂，三乙胺为碱，反应温度45～50 ℃，反应时间5 h，按1.2.1 节操作，考察物料摩尔配比对反应的影响（表 5）. 结果表明，当 n（VB6）∶n（乙酰水杨酰氯）∶n（三乙胺）=1.0∶2.2∶3.3 时，产物收率最高，继续增大乙酰水杨酰氯和三乙胺的用量，对产物收率影响有限.

表5 摩尔配比的影响

2.6 体外血小板聚集抑制效果评价

按1.2.2 节操作，对维生素B6 乙酰水杨酸衍生物盐酸盐的血小板聚集抑制率进行了考察（表6）. 结果显示，维生素B6 乙酰水杨酸衍生物盐酸盐对血小板聚集抑制率显示出一定的量效关系，浓度越高对血小板聚集抑制越强. 在2.0 g/L 的浓度下，相较维生素B6 和乙酰水杨酸，维生素B6 乙酰水杨酸衍生物盐酸盐的血小板聚集抑制率分别提高了3.8 倍和2 倍. 相较1 mol 维生素B6 与2 mol 阿斯匹林的混合物，维生素B6乙酰水杨酸衍生物盐酸盐的血小板聚集抑制率提高了1.18 倍，这充分说明了维生素B6 乙酰水杨酸衍生物前药的抗血栓效果优于维生素B6 与阿司匹林联合给药效果，更优于维生素B6 和乙酰水杨酸单独使用抗血栓的效果，充分体现出了前药的优越性.

表6 体外血小板聚集抑制效果评价

3 结论

制备了新型维生素B6 乙酰水杨酸衍生物盐酸盐. 乙酸乙酯为溶剂，三乙胺为碱，n（VB6）∶n（酰氯）∶n（三乙胺）=1.0∶2.2∶3.3，反应温度 45～50 ℃，反应时间 5 h 为最优反应条件，在该反应条件下，维生素 B6 乙酰水杨酸衍生物盐酸盐的收率达93.7%. 体外血小板聚集抑制效果评价表明，维生素B6 乙酰水杨酸衍生物盐酸盐对血小板聚集抑制率显著优于维生素B6 和阿司匹林联合用药和二者单独用药，值得进一步深入研究.