血清维生素D检测方法研究进展研究

吴亮 邵振宝

浙江花园生物高科股份有限公司 浙江东阳 322121

维生素D属于脂溶性维生素，在人体健康维持中发挥着至关重要的作用。维生素D缺乏易患佝偻病、软骨病，出现关节疼痛、多汗、失眠等症状，严重降低患者生活质量；维生素过量容易出现心律不齐、头痛、痢疾、心律不齐、软组织石灰化等中毒症状[1]。既有研究证实，维生素D在心脏病、糖尿病、高血压、精神分裂症、骨质疏松、女性老年痴呆症、肥胖症等防治中发挥着至关重要的作用[2]。人体代谢循环中的维生素D主要以25（OH）D形式存在。同时临床研究发现25（OH）D在血清的稳定性较强，不容易受机体调节影响，故临床上多用25（OH）D作为衡量维生素D的重要指标，通过测定血清或血浆25（OH）D水平进行机体内维生素D状况的评价[3]。鉴于此，本研究主要对血清25（OH）D检验方法研究进展进行综述，具体如下。

1 高效液相色谱法

高效液相色谱法又被称为“高速液相色谱法”、“近代柱色谱法，是检验领域应用较为广泛的一种检测技术。具有分析速度快、灵敏度高、分离效能高、应用范围广等优质。在维生素D检测中，既能够测定出血清25（OH）D2含量，也能够测定出血清25（OH）D3含量。王剑以甲醇沉淀蛋白作为样品，以二氯甲烷-正己烷混合溶剂为样品提取溶剂，以甲醇—水（88:12）为流动相进行小儿血清25（OH）D3测定，结果显示线性范围10-200μg/L，回收率93-106%，日内变异系数＜4.5%。也有学者以类似方法进行成人血清25（OH）D3测定，指出线性范围8-160μg/L，回收率92-109%，日内变异系数＜4.6%。可见用高效液相色谱法检验血清维生素D具有较好灵敏度、准确性。但也有研究指出高效液相色谱法操作难度较高，且对于血清25（OH）D2含量测定无法达到检验要求，不适于临床普及应用。

2 液相色谱-串联质谱法

液相色谱-串联质谱法在国际上被认为是维生素D检验金标准，对血清25（OH）D具有较高灵敏度、准确性、特异度。且相对于高效液相色谱法而言，对25（OH）D2含量的测定效果更好。张敏,解晓露[7]等研究者以7岁以下儿童为研究对象，根据液相色谱-串联质谱检测原理，构建了用于检验末梢全血干血点25-OH-VitD3与25-OH-VitD2的定量检验方法，结果显示25-OH-VitD3在0.5-100ng/mL范围内具有良好线性关系，相关系数超过0.99；25-OH-VitD2在0.5-50ng/ml范围内具有良好线性关系，相关系数超过0.99，定量限的最小值为0.5ng/ml。提示该方法在儿童维生素D水平检验中具有较好应用效果，且适用于采血条件有限群体。韩吉春,王小臣等学者在研究中心证实了液相色谱-串联质谱法在血清25（OH）D水平检验中具有较高的准确度、精密度。但值得注意的是，液相色谱-串联质谱法对样品具有较高要求，样品处理相对复杂，且前期投入成本较高，使其应用和推广受到一定限制。

3 化学发光免疫检测法

化学发光免疫检测技术是基于免疫技术、化学发光技术结合发展下形成的一种检测技术。具有检测速度快、操作简单、可自动化、可控制等优质。于伟越、赵瑞、刘洪川等学者对比分析化学发光免疫检测法与液相色谱-串联质谱法在血清维生素D水平检验中的应用效果，结果显示化学发光免疫检测法与液相色谱-串联质谱法的检测结果具有相关性，对血清25（OH）D含量测定具有较高准确性、特异度，能够取代液相色谱-串联质谱法应用于临床实践进行大规模血清25（OH）D水平测定，掌握受检者维生素D情况。

4 电化学发光免疫测定法

电化学发光免疫测定是基于电化学发光技术、免疫技术、链霉亲和素包被技术等有机结合下形成的一种检验方法，主要用于血清25（OH）D总含量测定，灵敏度、精准度较高。邢晏,冯长焕研究表示电化学发光免疫测定法在血清25（OH）D检验中具有较好应用性能，符合临床检测标准。黄少珍,薛雄燕等学者运用电化学发光免疫测定法检验青少年血清25（OH）D水平获得较好结果，并有效验证了25（OH）D水平与研究对象自身免疫性甲状腺疾病存在的相关性。

5 其他检测方法

除上述检测方法外，酶联免疫吸附法与全自动生化分析法也是检测血清25（OH）D水平进行维生素D应用状况评估较为常用方法。酶联免疫吸附法与全自动生化分析法能够对25（OH）D总量进行测定，操作方法相对简单，适用于大规模维生素D营养状况评估，进行维生素D缺乏者筛查。目前关于该方法的研究相对较少，其检验价值需要进一步研究验证。

6 结语

总而言之，血清25（OH）D水平测定是检验人体维生素D状况的主要途径。在科学技术创新发展驱动下，血清25（OH）D水平测定方法呈现出多样化发展态势。且测定方法不同检验原理、检验步骤、检验结果也存在一定差异性。这就需要根据检验条件、检验环境、工作人员能力，结合对血清25（OH）D水平检测要求进行分析，保证所选用方法应用的合理性、科学性、可行性。