GCDFP-15、ER、PR、C-erbB-2、Her2/Neu表达与乳腺癌超声征象的关系

郁玉文，范晓芳

(江南大学附属医院，江苏 无锡 214062)

我国乳腺癌的发病率增速位列全球首位，原位乳腺癌并不致命，但肿瘤细胞脱落后会随血液循环和淋巴循环向全身转移，危及患者生命[1]，因此，对原位乳腺癌的早期诊断与治疗具有重要意义.乳腺彩超是目前乳腺癌筛查的常用手段，但对微小钙化灶的检查敏感性低，同时多普勒血流显像又受到声束、血流速等因素影响，在乳腺癌鉴别诊断中的应用效果不够理想.随着近年来基因检测和分子生物学技术的快速发展，为恶性肿瘤的早期诊断提供了新型标志物[2].有研究[3]发现：巨大囊肿病液体蛋白-15(GCDFP-15)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、原癌基因C-erbB-2和Her2/Neu在乳腺癌组织中均有表达，可用于乳腺癌的诊断和预后评估.本研究探讨了乳腺癌组织中GCDFP-15、ER、PR、C-erbB-2、Her2/Neu表达与超声征象的关系，旨为乳腺癌的诊断和预后评估提供参考.

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2018年5月—2019年8月在江南大学附属医院就诊的100例乳腺癌患者，患者年龄38～64岁，平均(48.22±7.40)岁；肿瘤直径0.83～8.96 cm，平均(2.27±0.51)cm.肿瘤组织标本采集获得本医院伦理委员会批准(批号：2018-JSLL-015).

入选标准：符合中国抗癌协会乳腺癌专业委员会2017年颁布的《乳腺癌诊治指南与规范》中的诊断标准[4]；初次诊断为乳腺癌，接受手术治疗，术前行乳腺彩超检查；理解和意识状态正常，自愿参与此次研究.

排除标准：合并其他类型恶性肿瘤的患者；术前超声检查资料或术后乳腺癌组织标本不完整的患者.

1.2 方 法

1.2.1 乳腺彩超检查

应用LOGIQ 5 Pro彩色超声诊断仪(GE公司，美国)进行检查，高频探头频率为8～10 MHz.患者取仰卧位，充分暴露双侧乳房及腋窝，首先常规扫描病灶大小、边缘、内部微小钙化、腋窝淋巴结肿大等；采用彩色多普勒超声血流显像技术分析乳腺癌病灶内部和周边血流情况，并对血流显像进行分级.

1.2.2 免疫组化检测

术后使用甲醛溶液固定乳腺癌组织标本，常规石蜡包埋，4 μm切片，应用免疫组化SP法(试剂盒为上海康朗生物科技有限公司)检测GCDFP-15、ER、PR、C-erbB-2、Her2/Neu的表达情况.操作步骤：将石蜡切片脱蜡至水，3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶10 min，应用柠檬酸盐缓冲液修复抗原，滴加鼠抗人GCDFP-15单克隆抗体(1∶500稀释)、鼠抗人ER、PR单克隆抗体(1∶300稀释)、鼠抗人C-erbB-2单克隆抗体(1∶1 000稀释)、鼠抗人Her2/Neu单克隆抗体(1∶200稀释)，4 ℃过夜，滴加山羊抗鼠IgG(1∶2 000稀释)，37 ℃反应30 min，加入显色液A、B，37 ℃反应10 min，滴加终止液.

1.2.3 观察指标

GCDFP-15蛋白判断标准：高倍镜视野下随机选取10个视野，统计黄色、棕黄色、棕褐色细胞数；阳性细胞比例<10%赋1分，10%～50%赋2分，51%～75%赋3分，>75%赋4分；染色强度评价：黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分；阳性细胞比例评分与染色强度评分的乘积≥3分为GCDFP-15蛋白阳性(+)，反之为阴性(-).ER、PR判断标准：高倍镜视野下观察细胞核呈棕色、棕黄色为阳性(+)，无染色为阴性(-).C-erbB-2、Her2/Neu判断标准：高倍镜视野下随机选取10个视野，未着色或<10%细胞着色为阴性(-)，≥10%细胞着色为阳性(+).

1.3 统计学分析

应用SPSS 25.0对数据进行处理与统计学分析，本研究中均为计数资料，以百分率(%)表示，行χ2检验，以P<0.05为差异具有统计学意义.

2 结 果

2.1 超声检查结果

乳腺彩超检查显示：病灶直径<2 cm的42例，直径≥2 cm的58例；边缘毛刺征68例，周围高回声晕象30例，内部微小钙化62例；血流显像分级：0～1级28例，2～3级72例；病灶内部回声区82例，淋巴结转移46例.

2.2 免疫组化检测结果

免疫组化检测显示：100例乳腺癌患者中GCDFP-15蛋白阴性61例(61.00%)，ER蛋白阳性50例(50.00%)，PR蛋白阳性36例(36.00%)，C-erbB-2蛋白阳性62例(62.00%)，Her2/Neu蛋白阳性45例(45.00%).

2.3 GCDFP-15、ER、PR表达情况

有内部微小钙化、血流显像分级2～3级、淋巴结转移的乳腺癌患者GCDFP-15阴性率明显高于无内部微小钙化、血流显像分级0～1级、无淋巴结转移的患者，差异具有统计学意义(P<0.01)；不同病灶大小、边缘毛刺征、周围高回声晕象、病灶内部回声区的乳腺癌患者GCDFP-15阴性率之间差异无统计学意义(P>0.05).有边缘毛刺征和周围高回声晕象的乳腺癌患者ER、PR阳性率明显高于无边缘毛刺征和周围高回声晕象的患者，差异具有统计学意义(P<0.01)；有淋巴结转移的乳腺癌患者ER、PR阳性率明显低于无淋巴结转移的患者，差异具有统计学意义(P<0.01)；不同病灶大小、内部微小钙化、血流显像分级、病灶内部回声区的乳腺癌患者ER、PR阳性率之间差异无统计学意义(P>0.05).见表1.

2.4 C-erbB-2、Her2/Neu表达情况

内部微小钙化、血流显像分级2～3级、淋巴结转移的乳腺癌患者C-erbB-2、Her2/Neu阳性率明显高于无内部微小钙化、血流显像分级0～1级、无淋巴结转移的患者，差异具有统计学意义(P<0.05)；不同病灶大小、边缘毛刺征、周围高回声晕象、病灶内部回声区的乳腺癌患者C-erbB-2、Her2/Neu阳性率之间差异无统计学意义(P>0.05).见表2.

3 讨 论

原位乳腺癌不会直接导致患者死亡，但随着病情的发展肿瘤细胞会脱落，并通过血液循环和淋巴系统向全身转移，威胁患者生命安全，早期诊断和治疗原位乳腺癌是改善患者预后的关键.超声检查是乳腺癌早期筛查的常用手段，超声血流显像受仪器调节、信号采集与处理、超声物理特性等多种因素影响，会降低检查的准确率.近年来，随着分子生物学的快速发展，细胞因子、基因检测逐渐应用于乳腺癌的早期诊断，并取得了良好的临床效果.相关研究[5]显示：细胞因子和基因的异常表达会引发组织的病理学改变，具有一定的影像学特征，因此，通过乳腺彩超可能反映出乳腺癌的生物学行为特征.

GCDFP-15是人体大汗腺的标志物，表达于所有的大汗腺、泌乳腺、涎腺[6]，因此，GCDFP-15被认为是一种与汗腺分泌明显相关的腺体分化标志物.多数乳腺病变与大汗腺异常分化有关，有研究[7]通过分子生物学和免疫组化技术也发现了在乳腺癌中有GCDFP-15表达，且表达阴性率明显高于正常乳腺组织，提示GCDFP-15低表达可能与乳腺癌的发生发展有关.本研究中乳腺癌患者GCDFP-15阴性率高达61.00%.进一步分析与超声征象的相关性显示：有内部微小钙化、血流显像分级2～3级、淋巴结转移的乳腺癌患者GCDFP-15阴性率明显高于无内部微小钙化、血流显像分级0～1级、无淋巴结转移的患者.其原因可能为血流显像分级2～3级的乳腺癌患者病灶周围血流丰富，更易发生淋巴结转移和侵袭，病灶中坏死组织易发生钙化，肿瘤恶性程度更高.

ER、PR是目前研究较多的载体类激素受体，其表达水平与乳腺癌病变严重程度和临床预后明显相关[8].有边缘毛刺征和周围高回声晕象提示肿瘤分化程度好，侵袭能力不强，肿瘤细胞的增殖和分化仍受到体内激素的调控，此时进行针对性内分泌治疗能够取得较好的效果[9].本研究乳腺癌患者中ER阳性表达率为50.00%，PR蛋白阳性表达率为36.00%，且边缘毛刺征和周围高回声晕象的乳腺癌患者ER、PR阳性率明显高于无边缘毛刺征和周围高回声晕象的患者，ER、PR高表达促进了病灶周围细胞间质结缔组织的反应性增生，抑制了肿瘤细胞的扩散，但具体保护机制仍需深入研究.近年来研究[10]发现：ER阳性的乳腺癌患者病灶分化程度较好，转移风险较低，且对内分泌治疗的敏感性更高.本研究中彩超显示淋巴结转移的乳腺癌患者ER、PR阳性率明显低于无淋巴结转移的患者.

C-erbB-2、Her2/Neu是肿瘤相关基因，C-erbB-2是一种原癌基因，参与肿瘤细胞的增殖、分化，Her2/Neu能够提升人体蛋白水解酶的分泌水平，增强肿瘤细胞的运动、侵袭、转移能力，肿瘤细胞恶性程度更高[11].本研究显示：乳腺癌患者中C-erbB-2阳性表达率为62.00%，Her2/Neu阳性表达率为45.00%.内部微小钙化、血流显像分级2～3级、淋巴结转移的乳腺癌患者C-erbB-2、Her2/Neu阳性率明显高于无内部微小钙化、血流显像分级0～1级、无淋巴结转移的患者，血流供应充分的乳腺癌细胞活性更强，增殖、迁移和侵袭的发生率更高，病灶组织液更易出现微钙化现象.

综上所述，乳腺癌超声征象能够在一定程度上反映患者病灶组织中GCDFP-15、ER、PR、C-erbB-2、Her2/Neu的表达情况，有助于临床评估乳腺癌患者的预后.