纹党米炒前后体外抗氧化活性及干预脾虚泄泻大鼠的药效对比研究

帖晓燕，张云鹤，张文广，王 丹，辛国雄，李 芸*，胡芳弟

• 药理与临床•

纹党米炒前后体外抗氧化活性及干预脾虚泄泻大鼠的药效对比研究

帖晓燕1，张云鹤1，张文广1，王 丹1，辛国雄1，李 芸1*，胡芳弟2

1.甘肃中医药大学，甘肃 兰州 730000 2.兰州大学，甘肃 兰州 730000

研究纹党米炒前后体外抗氧化活性变化规律及干预脾虚泄泻大鼠的药效差异。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和2,2-氮杂双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐（ABTS）2种方法，考察纹党米炒前后体外抗氧化活性的变化规律。建立脾虚泄泻大鼠模型，给予硫酸阿托品注射液、纹党和米炒纹党水提液进行干预，记录各组大鼠体质量；计算各组大鼠脾脏指数和胸腺指数；采用ELISA法检测各组大鼠血清中胃动素（motilin，MTL）、胃泌素（gastrin，GAS）、血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）、淀粉酶（amylase，AMS）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和IL-10水平；采用苏木素-伊红（HE）染色法观察各组大鼠十二指肠、空肠组织病理改变情况，比较纹党米炒前后治疗脾虚泄泻大鼠在免疫调节和消化吸收方面的疗效差异。体外抗氧化结果显示，纹党、米炒纹党的清除DPPH自由基半数抑制浓度（half inhibitory concentration，IC50）分别为（0.041±0.110）、（0.029±0.140）g/mL；其清除ABTS自由基IC50分别为（0.038±0.050）、（0.029±0.100）g/mL。药效结果显示，与对照组比较，模型组大鼠体质量、胸腺指数、脾脏指数、TNF-α、IL-10、MTL、GAS、VIP及AMS水平明显下降（＜0.05），IL-6水平明显上升（＜0.05），小肠病理切片结果显示十二指肠、空肠病变严重。与模型组比较，各给药组脾脏指数及血清TNF-α、IL-10、IL-6水平均具有明显差异（＜0.05）；除纹党低剂量组胸腺指数，纹党中、低剂量组与米炒纹党低剂量组MTL水平以及纹党低剂量组GAS水平在统计学上没有差异外，其余各给药组均可使大鼠胸腺指数、MTL、GAS、VIP及AMS水平明显上升（＜0.05），各给药组十二指肠、空肠病变不同程度地恢复。与相同剂量生品组比较，米炒纹党高、中剂量组脾脏指数及米炒纹党高、低剂量组胸腺指数明显上升（＜0.05），米炒纹党高、中、低剂量组TNF-α、IL-10、GAS及VIP水平，米炒纹党高剂量组MTL水平以及米炒纹党中剂量组AMS水平明显上升（＜0.05），米炒纹党高、中剂量组IL-6水平明显下降（＜0.05）。纹党米炒后抗氧化活性增强；纹党生熟饮片对脾虚泄泻大鼠免疫调节和消化吸收方面均具有明显治疗作用，且米炒品明显强于生品，可能与调节TNF-α、IL-6、IL-10水平密切相关，说明米炒纹党增强和胃健脾止泻的科学性、合理性。

纹党；米炒纹党；抗氧化；和胃健脾止泻；消化吸收功能；免疫调节功能

党参为典型的多基原中药，为桔梗科植物党参(Franch.) Nannf.、素花党参Nannf.var.(Nannf.) L.T.Shen或川党参Oliv.的干燥根[1]。现代药理学研究表明，其具有免疫调节、抗菌、抗肿瘤、抗溃疡、改善心血管功能、抗氧化、抗衰老等作用[2-3]，对脾肺气虚、中气不足、脾胃虚弱、热病伤津等均有良好的疗效。纹党为素花党参的干燥根，是甘肃文县特产，其有效成分含量居各类党参之首，是党参中的上品。历代本草典籍及各省炮制规范中记载党参的炮制方法有米炒、蜜炙、麸炒、蜜麸炒、清炒、土炒、蜜蒸、清蒸等[4-5]，其中米炒品是临床最常用的炮制品。《中国药典》2020年版一部党参项下仅收载了党参和米炒党参2种饮片规格，但只对生品党参饮片的功效进行了阐述，未收载米炒党参的功效，“十三五”规划教材《中药炮制学》明确指出党参米炒后气变清香，和胃健脾止泻作用增强。目前，党参生品化学成分和药理作用研究报道较多，有关米炒党参药效及作用机制研究尚未见报道，更未见纹党的相关报道。

党参气味甘、平，生用长于益气生津、气血双补，米炒后气变清香，和胃健脾止泻作用增强[6]，用于脾胃虚弱、食少、便溏等[7]。米炒是加固体辅料炒的常见炮制方法之一，党参与米共炒可以增强药物和胃健脾止泻的作用。因此，本研究以中医临床为指导，选择最优且更能契合中医用药历史的纹党为研究对象，采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和2,2-氮杂双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐（ABTS）2种方法，考察纹党米炒前后体外抗氧化活性的变化规律，并结合最常用的用药方式即汤剂，研究炮制对其“和胃”和“健脾止泻”功效相关药效指标的影响，从宏观动物系统药效学验证和评价纹党米炒后和胃健脾止泻作用是否增强，为进一步阐释米炒党参“生熟异治”的作用机制和指导临床精准用药提供理论依据。

1 材料

1.1 药材

纹党药材购自甘肃省陇南市文县仁和农副公司，经甘肃中医药大学附属医院杨锡仓主任中药师鉴定为桔梗科植物素花党参Nannf.var.(Nannf.) L.T.Shen的干燥根。

1.2 动物

6周龄SPF级Wistar大鼠144只，雌雄各半，体质量（200±20）g，购自甘肃中医药大学实验动物中心，动物许可证号SCXK（甘）2015-0002，饲养于甘肃中医药大学实验动物中心SPF级动物房，温度18～22 ℃，相对湿度50%～60%。所有动物实验遵循甘肃中医药大学有关实验动物管理和使用的规定，均符合3R原则。

1.3 药品与试剂

DPPH（批号1989-66-4）购自东京化成工业株式会社；ABTS（批号A6000020001）购自上海生工生物工程股份有限公司；无水乙醇、过硫酸钾均为分析纯；水为娃哈哈纯净水；利血平注射液（批号1911091）购自天津金耀药业有限公司；硫酸阿托品注射液（批号61909042）购自遂成药业股份有限公司；大鼠胃动素（motilin，MTL）ELISA试剂盒（批号L200811647）、大鼠血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）ELISA试剂盒（批号L200907040）、大鼠胃泌素（gastrin，GAS）ELISA试剂盒（批号L200907043）购自武汉优尔生商贸有限公司；淀粉酶（amylase，AMS）ELISA试剂盒（批号09／2020）购自南京建成生物工程研究所；大鼠白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）ELISA试剂盒（批号A30600115）、大鼠IL-10 ELISA试剂盒（批号A31090324）购自杭州联科生物技术有限公司；大鼠肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）ELISA试剂盒（批号222131-001）购自美国Invitrogen公司；4%多聚甲醛通用型组织固定液（批号69111800）购自北京兰杰柯科技有限公司；苏木素-伊红（HE）染色剂、分化液、返蓝液（批号分别为G1005、G1005-3、G1005-4）购自武汉赛维尔生物科技有限公司。

1.4 仪器

KQ-500DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BP211D型电子天平（德国Sartorius公司）；MH-1000型电热套（北京科伟永兴仪器有限公司）；DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）；HHS-11S型数显恒温水浴锅（上海宜昌仪器纱筛厂）；TG16B型台式高速离心机（金坛市科析仪器有限公司）；Epoch酶标仪（美国BioTeK公司）；RT-3100C型全自动洗板机（雷杜生命科技有限公司）；KD-BM型包埋机（浙江省金华市科迪仪器设备有限公司）；2016型切片机（德国Leica公司）；RX50型显微镜（宁波舜宇仪器有限公司）；XB-20型雪花制冰机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。

2 方法

2.1 纹党参饮片的炮制

2.1.1 纹党参饮片（生饮片）的炮制 将纹党药材去除杂质，洗净，盖过纹党药材的水量浸泡15～20 min，闷润3 h，切制长度为2～4 mm的厚片，置于烘干室50 ℃干燥[8]，取出备用。

2.1.2 米炒纹党参饮片（熟饮片）的炮制 取纹党参饮片，用米拌炒至表面深黄色，取出，筛去米，放凉（100 kg党参，用大米20 kg），备用[1]。该过程由“陇原工匠”杨锡仓主任中药师指导完成。

2.2 抗氧化活性测定

2.2.1 供试品溶液制备 分别取纹党、米炒纹党粉末（过3号筛）约2.5 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入250 mL蒸馏水，回流提取2次，每次1.5 h，共2次，滤过，合并续滤液，减压浓缩至0.1 g/mL的溶液，即得。

2.2.2 DPPH自由基清除能力测定[9]DPPH用无水乙醇配制成浓度为0.1 mmol/L的工作液，将供试品溶液稀释制成0.10、0.08、0.06、0.04、0.02 g/mL的溶液，精密吸取样品溶液和DPPH工作液各100 μL于96孔板中，避光静置30 min后，采用酶标仪测定517 nm处的吸光度（）值，以维生素C为阳性对照，计算DPPH自由基清除率，DPPH的清除能力用半数抑制浓度（half inhibitory concentration，IC50）表示。

DPPH自由基清除率＝[0－(－1)]/0

0为未加样品的DPPH值；为样品与DPPH反应后的值；1为溶剂与DPPH的值

2.2.3 ABTS自由基清除能力测定[10]将用纯净水配制的7 mmol/L ABTS溶液5 mL和2.45 mmol/L K2S2O8溶液5 mL混合产生ABTS+自由基，避光室温静置12～16 h，得ABTS工作液，备用。使用前取ABTS工作液1 mL，加纯净水稀释至该溶液在734 nm处值为0.700±0.002，现用现配。于96孔板中分别精密加入不同质量浓度（0.10～0.02 g/mL）的样品溶液40 µL，加入ABTS工作液160 µL，避光静置6 min后，采用酶标仪测定734 nm处的值，计算ABTS自由基清除率，ABTS的清除能力用IC50表示。

ABTS自由基清除率＝[0－(－1)]/0

0为未加样品的ABTS值；为样品与ABTS反应后的值；1为溶剂与ABTS的值

2.3 和胃健脾止泻药效对比研究

2.3.1 纹党、米炒纹党水提液的制备 根据本课题组前期研究，称取纹党、米炒纹党饮片各312 g，加入10倍量水，回流提取1 h，滤过，连续回流2次，合并2次滤液，水浴浓缩至1.62 g生药/mL，即浓缩至505 mL，于−20 ℃保存，备用。

2.3.2 分组、造模及给药 将适应性饲养7 d后的144只Wistar大鼠，按随机数字表分成9组，每组16只，分别记为对照组、模型组、阿托品（0.5 mg/kg）组黄丸纹党高、中、低剂量（16.2、10.8、5.4 g/kg）组及米炒纹党高、中、低剂量（16.2、10.8、5.4 g/kg）组。除对照组外，其余各组大鼠ip利血平（0.5 mg/kg）[11]，1次/d，持续造模15 d；对照组常规饲养，自由进食饮水。模型复制成功后，阿托品组ip硫酸阿托品注射液[11]，纹党和米炒纹党高、中、低剂量组ig纹党和米炒纹党水提液（20 mL/kg），对照组和模型组ig等体积蒸馏水，1次/d，连续15 d。给药期间，除对照组外，其余各组继续造模。

2.3.3 大鼠一般状态观察 分别观察各组大鼠造模前后及给药治疗后的一般状态，包括体质量、进食量、活动情况、精神状态、大便及是否存在脱肛现象等。给药第15天各组大鼠均禁食，自由饮水，记录末次给药24 h后大鼠体质量。

2.3.4 样本采集 末次给药24 h后，大鼠ip 10%水合氯醛麻醉，心脏采血并静置30 min，4 ℃、3500 r/min离心15 min，取上清液，于−80 ℃保存备用，采血完成后脱颈椎处死大鼠。

2.3.5 脏器指数的测定 摘取完整脾脏和胸腺，去掉筋膜及脂肪组织，用滤纸吸干脏器表面血污，分别称定质量，计算脾脏及胸腺指数。

脏器指数＝脏器质量/体质量

2.3.6 ELISA检测各指标含量 取各组经心脏采集处理得到的血清样品，按ELISA试剂盒说明书检测MTL、GAS、VIP、AMS、TNF-α、IL-6和IL-10水平。

2.3.7 小肠组织切片的制作与观察 摘取小肠，立即用0.9%氯化钠溶液冲洗干净，分别从十二指肠（距离幽门口5 cm处）、空肠（距离幽门口20 cm）取2 cm×1 cm全层组织块，在4%多聚甲醛固定液中固定1周，然后石蜡包埋、切片、烘焙，进行HE染色，于显微镜下观察并拍照。

3 结果

3.1 抗氧化活性

许多中药化学成分具有抗氧化活性，不同的化学成分可能通过不同的机制作用于氧化剂，因此一种孤立的方法很难完全评估复杂样品的抗氧化能力[12]，本研究通过2种体外抗氧化活性评价方法考察纹党米炒前后的抗氧化活性变化情况。纹党米炒前后抗氧化活性见图1，样品的抗氧化活性呈剂量相关性，维生素C、纹党及米炒纹党对DPPH、ABTS自由基的清除率随样品溶液质量浓度的增大而增大，计算纹党、米炒纹党的清除DPPH自由基IC50分别为（0.041±0.110）、（0.029±0.140）g/mL；其清除ABTS自由基IC50分别为（0.038±0.050）、（0.029±0.100）g/mL，IC50值越小表示提取液的抗氧化活性越强，2种体外抗氧化实验均表明米炒纹党抗氧化活性优于纹党，证明纹党米炒可显著增强其抗氧化活性。

3.2 大鼠一般状态观察

如图2和表1所示，对照组大鼠在实验过程中行为状态正常，皮毛浓密且有光泽，行动敏捷，饮食正常，扎堆现象不明显，体质量正常增长等。与对照组相比，模型组大鼠的表现为眯眼、倦卧嗜睡、体毛稀疏且失泽，反应迟钝并伴倦怠懒动，大便溏泄明显，出现弓背等现象，表明造模成功；体质量明显下降（＜0.05）；与模型组比较，各给药组大鼠体毛稀疏失泽、眯眼、少食怠动、消瘦倦卧、大便溏泄（或时干时稀）等症状逐渐减轻且活动度趋于正常，体质量明显升高（＜0.05）；与相同剂量生品组比较，米炒纹党高剂量组体质量显著升高（＜0.05）。表明纹党和米炒纹党对利血平致脾虚泄泻大鼠体质量有改善作用，且米炒纹党效果更佳。

图1 纹党米炒前后的抗氧化活性

图2 对照组(A, A1) 与模型组(B, B1) 大鼠的一般状态

表1 纹党米炒前后对脾虚泄泻大鼠体质量的影响(, n = 16)

与对照组比较：△＜0.05；与模型组比较：*＜0.05；与相同剂量生品组比较：#＜0.05，下表同

△<0.05control group;*<0.05model group;#<0.05same dose of raw product group, same as below tables

3.3 指标检测

3.3.1 对大鼠脏器指数的影响 如表2所示，与对照组比较，模型组大鼠脾脏指数、胸腺指数明显降低（＜0.05），表明造模成功。与模型组比较，各给药组脾脏指数明显升高（＜0.05）；除纹党低剂量组外，其余各给药组胸腺指数明显升高（＜0.05）；与相同剂量生品组比较，米炒纹党高、中剂量组脾脏指数明显升高（＜0.05），米炒纹党高、低剂量组胸腺指数明显升高（＜0.05）。表明纹党及米炒纹党对脾虚泄泻大鼠脾脏及胸腺均有保护作用，且米炒品的保护作用更佳。

3.3.2 对大鼠免疫、炎症因子相关指标的影响 如表3所示，与对照组比较，模型组大鼠血清TNF-α及IL-10水平明显降低（＜0.05），IL-6水平明显升高（＜0.05），表明造模成功。与模型组比较，各给药组大鼠血清TNF-α及IL-10水平明显升高（＜0.05），IL-6水平明显降低（＜0.05）；与相同剂量生品组比较，米炒纹党高、中、低剂量组大鼠血清TNF-α及IL-10水平明显升高（＜0.05），米炒纹党高、中剂量组大鼠血清IL-6水平明显降低（＜0.05）。表明纹党及米炒纹党对免疫炎症相关指标方面具有一定的调节作用，且米炒品的调节作用更为显著。

表2 纹党米炒前后对脾虚泄泻大鼠脏器指数的影响(, n = 16)

表3 纹党米炒前后对脾虚泄泻大鼠血清中TNF-α、IL-6及IL-10水平的影响(, n = 16)

3.3.3 对大鼠消化吸收相关指标的影响 如表4所示，与对照组比较，模型组大鼠血清MTL、GAS、VIP及AMS水平明显降低（＜0.05），表明造模成功；与模型组比较，除纹党中、低剂量组与米炒纹党低剂量组对MTL及纹党低剂量组对GAS影响没有统计学意义外，其余各给药组大鼠血清MTL、GAS、VIP及AMS水平均明显升高（＜0.05）。与相同剂量生品组比较，对于血清MTL，米炒纹党高剂量组优于纹党对应剂量组（＜0.05）；对于血清GAS及VIP，米炒纹党对应剂量组均具有显著差异（＜0.05）；对于血清AMS，米炒纹党中剂量组优于纹党对应剂量组（＜0.05）。表明纹党及米炒纹党对消化吸收相关指标方面具有不同程度的调节作用，且米炒品的调节作用更为显著。

3.3.4 对大鼠小肠组织病理学的影响 如图3、4所示，对照组大鼠十二指肠与空肠上皮细胞排列整齐，细胞膜完整，细胞顶端有排列整齐紧凑的微绒毛结构，细胞间隙正常。与对照组比校，模型组大鼠十二指肠和空肠黏膜上皮细胞顶端微绒毛稀疏，部分脱落，长短不一，细胞间连接复合体被破坏，桥粒结构基本消失，胞间连接松散并出现降解，十二指肠肠腺萎缩，结构不完整。与模型组比较，阿托品组、纹党高剂量组和米炒纹党高、中剂量组黏膜层肠上皮结构完整，上皮细胞形态结构正常、排列紧密，固有层肠腺丰富；纹党中剂量组和米炒纹党低剂量组部分黏膜层肠上皮结构不完整，可见大量上皮细胞脱落，但程度较模型组有所减轻；与相同剂量生品组比较，米炒纹党高、中剂量组黏膜层肠上皮结构更为完整。

表4 纹党米炒前后对脾虚泄泻大鼠血清中MTL、GAS、VIP及AMS水平的影响(, n = 16)

图3 各组大鼠空肠组织病理切片图(HE, ×200)

图4 各组大鼠十二指肠组织病理切片图(HE, ×200)

4 讨论

党参具有清除自由基、抗衰老、抗氧化的作用[13]。本研究采用DPPH和ABTS 2种方法评价了纹党米炒前后抗氧化活性，结果表明米炒可显著增强纹党体外抗氧化活性。Cai等[14]发现，党参水提物可降低-半乳糖诱导的衰老小鼠血清中丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性，其抗衰老作用可能与微小RNA（miRNA）靶向作用有关。此外，研究发现，党参多糖可通过拮抗-半乳糖降低小鼠体内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性以及GSH水平，提高丙二醛水平，进而发挥抗衰老作用，其机制可能与增强机体免疫功能、清除自由基及抗脂质过氧化有关[15]，且硫酸化修饰可增强党参多糖的抗氧化活性[16]。

脾胃为气血生化之源，脏腑经络之根，是人体赖以生存的仓禀，故称“脾为后天之本”。同时，脾居中焦，为人体气机升降之枢纽，又是人体抗御病邪的重要防卫机构。若脾失健运，则会引起出现水谷精微运化障碍，表现为消瘦、气血衰少、倦怠、眩晕、水肿等脾虚湿困症状。纹党为党参中的上品，自古以来便因其“健脾运而不燥，滋胃阴而不湿，润肺而不犯寒凉，养血而滋腻，鼓舞清阳振动中气而无燥之弊”而广泛应用于临床，常用于治疗脾肺气虚、中气不足、脾胃虚弱、热病伤津等。清《时病论》曰“米炒，治脾土虚寒泄泻”[17]，米炒是加固体辅料炒的常见炮制方法之一，党参与米共炒可以增强药物和胃健脾止泻的作用。

脾虚证是脾胃病最多见的证型之一，脾虚动物模型的建立对于脾胃病的研究意义重大。脾虚动物模型建立的方法主要分为病因模型（如苦寒泻下法、饮食失节法、劳倦过度法等单病因模型；苦寒泻下结合劳倦过度法、劳倦过度结合饮食不节法等双病因模型；五味偏食加控制饮食结合劳倦过度法等多病因模型）、病理模型（如利血平法、新斯的明法、秋水仙碱法等）和病症结合模型[18]。本研究采用利血平复制脾虚模型是利用化学药的不良反应产生类似脾虚的临床表现，也是脾虚实验研究的常用模型[19]。利血平属于肾上腺能神经阻断剂，用药后交感神经系统的功能受到遏制，副交感神经系统的功能相对占优势，从而出现体质量减轻、腹泻、耐寒力差等与临床脾虚证相似的症状[20]。张帆等[21]采用利血平建立脾虚证小鼠动物模型探讨参苓白术散治疗脾虚泄泻的作用机制时发现，利血平致脾虚泄泻模型小鼠出现皮毛无光泽、拱背、扎堆、活动减少、倦卧、嗜睡、便溏、肛周污秽、食量减少、消瘦等症状，且血清-木糖及AMS含量均明显降低。利血平所致的脾虚大鼠模型在一定程度上反映了类似的病理改变，其表现和中医脾虚证有高度的相符性，且此模型干预因素简单，可控性好，易于重复[18]。本研究采用ip利血平复制脾虚泄泻大鼠模型，经过15 d造模后观察大鼠体征变化，发现模型组大鼠懒动、拱背、精神倦怠、嗜卧、眯眼现象严重，毛色或枯黄或稀少，受惊动时无神、抓取时挣扎无力，便溏、泄泻严重、受激排便率增高，体质量明显下降，模型组大鼠各项指标基本符合中华中医药学会脾胃病分会制定的“中医虚证参考标准”及“脾虚模型标准”[22]。结合模型组大鼠体质量、脾脏指数、胸腺指数及血清MTL、GAS、AMS、VIP等指标均与对照组大鼠具有显著性差异，表明脾虚泄泻大鼠模型制备成功。

脏器指数是衡量机体免疫功能的初步指标，脾脏及胸腺指数的改变可直观反映机体及细胞免疫水平的变化。利血平致脾虚泄泻模型大鼠的脾脏指数与胸腺指数明显降低，与对照组比较有显著性差异，表明脾虚可使机体免疫力下降。TNF-α是由单核巨噬细胞产生的免疫调节多肽细胞因子，在介导炎症中起着重要作用；IL-6主要由活化的巨噬细胞、淋巴细胞及上皮细胞分泌，在慢性肠道炎症中，IL-6的过度表达会影响肠上皮细胞的电解质分泌，使其通透性增加，使中性粒细胞浸润到炎症部位[23]；IL-10主要由CD4＋Th2辅助细胞亚群产生，是细胞免疫反应的负性调节因子[24]；本研究发现，利血平致脾虚泄泻模型组大鼠血清中TNF-α、IL-10水平明显降低，IL-6水平明显升高，表明脾虚可使机体免疫功能下降；纹党米炒后可显著增加脾虚泄泻小鼠的脾脏及胸腺指数，能够调节脾虚泄泻模型大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-10水平，显著改善脾虚泄泻大鼠的免疫功能，有效地降低IL-6和提高TNF-α、IL-10水平，提示党参及米炒党参对机体有很好的免疫保护作用。研究发现，党参多糖是增强机体免疫能力的主要生物活性成分[25]，党参中的免疫活性成分可能通过调控TNF、转录因子p65（RELA）、IL-10、IL-6等靶点，T细胞受体信号通路，核苷酸结合寡聚化结构域（nucleotide-binding oligomerization domain，NOD）样受体信号通路等多个途径发挥增强机体免疫功能的作用[26]。

MTL是产生于十二指肠和空肠的一种肽类激素，其主要功能是影响胃和肠道的蠕动，并能刺激胃蛋白酶和胰液的分泌及胆囊的收缩[27]，若水平异常，则能够诱发胃肠道功能紊乱。作为调节胃肠功能的另一种激素，GAS在消化道运动、食物的吸收和代谢、正常免疫功能的发挥等方面有着重要调节作用，通过结合相应受体，促进胃肠道中胃蛋白酶、胃酸、胰酶的合成，还能促进胃肠道粘膜组织生长，促进上皮组织中多种细胞的增殖、分化，调节胃、肠及胰腺中DNA、RNA、蛋白质的合成，具有营养胃肠道的作用[28]。AMS是一种重要的消化酶，主要由唾液腺和胰腺分泌，淀粉酶分泌不足，机体的消化功能必然受到影响。VIP是调节中枢神经系统与胃肠运动收缩连接的重要脑肠肽，由肠道神经元释放，在消化系统的主要作用是舒张肠道平滑肌，并使食管下段括约肌、肠道平滑肌和肛门内括约肌松弛，同时又可促进肠道水分和电解质的分泌[29]。VIP分泌异常可致胃肠动力和分泌功能紊乱，引起肠道平滑肌规律性运动障碍，肠道分泌物增多，进而导致腹泻[30]。本研究发现，模型组大鼠血清MTL、GAS、AMS及VIP水平均显著低于对照组，各给药组大鼠血清MTL、GAS、AMS及VIP水平均有不同程度升高，且米炒纹党在改善消化吸收功能方面优于纹党。

综上，纹党及米炒纹党可升高脾虚泄泻小鼠AMS、MTL、GAS、VIP、TNF-α、IL-10、脾脏指数和胸腺指数水平，降低IL-6水平，从而减轻脾虚泄泻症状，且米炒纹党和胃健脾止泻作用更为显著，表明米炒纹党增强和胃健脾止泻的科学性、合理性。引起纹党及米炒纹党在免疫调节和消化系统方面的作用差异可能的机制为辅料大米气味甘、性平，具补中益气、健脾和胃、止泻痢等功效，与纹党共炒后，气变清香，醒脾开胃作用增强；纹党米炒后，产生了与健脾止泻作用相关的化学成分，具体变化后续采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC- MS/MS）进一步研究。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Comparative study on effects ofbefore and after stir-baking with rice on anti-oxidationand regulation of immune function and digestive absorption in diarrhea rats with spleen deficiency

TIE Xiao-yan1, ZHANG Yun-he1, ZHANG Wen-guang1, WANG Dan1, XIN Guo-xiong1, LI Yun1, HU Fang-di2

1.Gansu University of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China 2.Lanzhou University, Lanzhou 730000, China

To comparative the effects of Wendang () before and after stir-baking with rice on the antioxidationand regulation of immune function and digestive absorption in diarrhea rats with spleen deficiency.DPPH and ABTS methods were used to investigate the changes of antioxidant activity ofbefore and after stir-baking with rice.The model of diarrhea of rats with spleen deficiency was established.The sulfate injection and water extract ofbefore and after stir-baking with rice were given for intervention, body weight of rats in each group was recorded, spleen index and thymus index of rats in each group were calculated.Levels of MTL, GAS, VIP, AMS, TNF-α, IL-6, and IL-10 in serum of each group of rats were determined by ELISA.HE staining method was used to observed the pathological changes of duodenum and jejunum of each group of rats.The effects ofbefore and after stir-baking with rice on diarrhea of spleen deficiency rats in terms of immune regulation, digestion and absorption were compared.Results of antioxidationshowed that IC50of scavenging DPPH free radical ofbefore and after stir-baking with rice were (0.041 ± 0.110) and (0.029 ± 0.140) g/mL, IC50of scavenging ABTS free radical were (0.038 ± 0.050) and (0.029 ± 0.100) g/mL.Compared with control group, body weight, thymus index, spleen index, TNF-α, IL-10, MTL, GAS, VIP and AMS levels in model group were significantly decreased (< 0.05), while the level of IL-6 was significantly increased (< 0.05).The pathological changes of duodenum and jejunum were severe in model group.The treatment of each experimental group had different effects on spleen index, TNF-α, IL-10 and IL-6 as compared to model group.There was no statistical difference in thymus index between low-dosegroup, the level of MTL was not statistically different between medium- and low-dosegroups and low-doseafter stir-baking with rice group, and level of GAS in low-dosegroup had no statistically difference.All the other groups could significantly increase the thymus index, MTL, GAS, VIP and AMS levels in rats (< 0.05).The pathological changes of duodenum and jejunum were ameliorated in different degrees in each treatment group.Compared with same dose group, spleen index of high- and medium-doseafter stir-baking with rice group and thymus index of high- and low-doseafter stir-baking with rice group were significantly increased (< 0.05).The levels of TNF-α, IL-10, GAS and VIP in high-, medium- and low-doseafter stir-baking with rice groups, MTL level in high-doseafter stir-baking with rice group, and AMS levels in medium- doseafter stir-baking with rice group were significantly increased (< 0.05), the level of IL-6 in high- and medium-doseafter stir-baking groups with rice was significantly decreased (< 0.05).Antioxidant activity ofwas enhanced after stir-baking with rice.Raw and cooked slices ofhave obvious therapeutic effects on diarrhea in rats with spleen deficiency in therms of immune regulation, digestion and absorption.after stir-baking with rice is obviously stronger than raw products, which may be closely related to the regulation of levels of TNF- α, IL-6 and IL-10, which demonstrates thatafter stir-baking with rice can harmonize stomach, invigorate and relieve diarrhea scientifically and reasonably.

;after stir-baking with rice; anti-oxidant; harmonizing stomach, invigorating and relieving diarrhea; digestive absorption; immune function

R285.5

A

0253 - 2670(2021)22 - 6871 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.22.012

2021-06-21

国家重点研发计划（2018YFC1706303）；全国中药特色技术传承人才培训项目（T20184828005）

帖晓燕（1995—），女，硕士研究生，从事中药炮制与制药工艺研究。Tel: 18153675913 E-mail: 1194570175@qq.com

通信作者：李 芸（1973—），女，教授，博士生导师，从事中药化学成分分离分析、中药加工炮制工艺研究与中药大健康产品开发。Tel: 13893362959 E-mail: liyunherb@163.com

[责任编辑 李亚楠]