HPLC 同时测定白芍、炒白芍配方颗粒芍药苷含量

毕莹，许兵兵

1.南昌市洪都中医院，江西 南昌 330006；2.江西省中医药研究院，江西 南昌 330046

白芍为毛莨科植物芍药Paeonia lactifloraPall.的干燥根，春、秋二季采挖，除去头尾及细根，置沸水煮后除去外皮或去皮后再煮，晒干。白芍主产于安徽、山东、四川等地，具有养血柔肝、缓中止痛、敛阴收汗等功效，常用于胸腹胁肋疼痛、泻痢腹痛、自汗盗汗、阴虚发热、月经不调、崩漏带下等症的治疗［1］。白芍含有单萜及其苷类、三萜类、黄酮类、鞣质及多糖类等多种化学成分［2］。现代研究表明，芍药总苷为白芍的有效部位，主要含芍药苷、芍药内酯苷等活性成分，具有广泛的药理作用，如镇静、镇痛、抗炎、抗抑郁、保肝等［3-8］。

中药配方颗粒是以符合炮制规范的中药饮片为原料，经现代制剂工艺而成，用于代替中药饮片供临床配方使用的粉状或颗粒状产品［9］。白芍与炒白芍配方颗粒是白芍或炒白芍饮片经水提、浓缩、喷雾，加适量糊精制成的颗粒，临床应用普遍。相关研究表明，白芍配方颗粒能够显著改善CCl4诱导的肝损伤，能够用于肝细胞损伤性疾病的预防和治疗［10］。目前关于白芍配方颗粒的研究主要集中在提取工艺优化［11］、原药材质量控制［12］等，而相关质量控制研究相对薄弱。本研究以白芍配方颗粒和炒白芍配方颗粒为目标，采用高效液相色谱建立质量控制方法；在此基础上，分析比较两者芍药苷含量的差异，为白芍配方颗粒和炒白芍配方颗粒质量标准研究提供依据，为其实际生产与临床应用提供参考。

1 实验材料

Agilent 1200 Series 高效液相色谱仪（美国，G1316B DAD 检测器，G1311A 四元低压梯度泵，G1322A 在线真空脱气机，G1329A 自动进样器，G1316A 柱温箱）；Agilent Chemstation 色谱工作站；MS105 型1/10 万电子天平（Mettler Toledo），CP214型万分之一电子天平［奥豪斯仪器（上海）有限公司］，KQ-250E 型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）。

配方颗粒样品选自南昌市洪都中医院药房，白芍配方颗粒（广东一方制药有限公司，批号：7055162），炒白芍配方颗粒（广东一方制药有限公司，批号：6053682），芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110736-201741），色谱乙腈（西陇科学股份有限公司），甲醇（分析纯，西陇科学股份有限公司），乙醇（分析纯，西陇科学股份有限公司），磷酸（分析纯，西陇科学股份有限公司），水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备

取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每l mL 含60 μg 的溶液，进样前过0.45 μm 微孔滤膜。

2.2 供试品溶液制备

样品研细，取约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，称定重量，超声处理（功率240 W，频率45 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 mL，置10 mL 量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，即得。

2.3 色谱条件

Welch C18 色谱柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm），流动相乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86），流速1.0 mL/min，柱温25 ℃，检测波长230 nm；进样量10 μL。对照品及样品溶液HPLC 图谱见图1。

图1 芍药苷对照品（A）及白芍配方颗粒（B）HPLC图

2.4 方法学考察

2.4.1 标准曲线及线性方程 取芍药苷对照品适量，加甲醇分别制成每1 mL 含芍药苷5.92、11.84、29.60、59.20、88.80、118.40 μg 的对照品溶液，分别进样10 μL。以芍药苷峰面积（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标绘制芍药苷的标准曲线，得到芍药苷的线性回归方程：Y=10.065X-2.429 9，r=0.999 8，线性范围：0.059 2 μg～1.184 μg。

2.4.2 精密度 取“2.1”项下混合对照品溶液进样，每次10 μL，重复进样6 次，按照“2.3”项下色谱条件测定峰面积，芍药苷峰面积RSD 分别为0.75%，表明仪器精密度良好。

2.4.3 重复性 分别精密称取6 份白芍配方颗粒样品，按照“2.2”项下供试品制备方法制备6 份供试品溶液，按照“2.3”项下色谱条件测定，测得6 份白芍配方颗粒中芍药苷含量分别为：64.16、63.72、63.88、64.15、64.91、64.07 mg/g。白芍配方颗粒中芍药苷含量RSD 值分别为0.64%，表明样品制样重复性良好。

2.4.4 稳定性 取同1 份白芍配方颗粒供试品溶液，按照“2.3”项下色谱条件测定分别测定0、2、4、8、12、18、24 h 芍药苷峰面积，白芍配方颗粒中芍药苷峰面积RSD 值为0.88%，表明样品在24 h 内基本稳定。

2.4.5 加样回收率 精密称取已知含量的白芍配方颗粒样品6 份，准确加入一定量的芍药苷对照品，按照“2.2”项下供试品制备方法制备供试品溶液，按照“2.3”项下色谱条件测定，进样10 μL。计算得白芍配方颗粒中芍药苷加样平均回收率为100.19%，RSD 值为1.91%。见表1。

表1 白芍配方颗粒中芍药苷加样回收实验（n=6）

2.5 样品测定

取白芍配方颗粒及炒白芍配方颗粒样品，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液。按照“2.3”项下色谱条件测定，进样10 μL，重复3 次，以芍药苷对照品为参照，白芍配方颗粒中芍药苷含量为63.11 mg/g、炒白芍配方颗粒中芍药苷含量为46.82 mg/g。

3 讨论

采用全波长对芍药苷UV 吸收波长进行扫描，芍药苷在230 nm 波长处有最大吸收，因此选择230 nm 作为测定波长。另外，由于芍药苷易水解，因此在流动相中加入0.1%的磷酸抑制其水解，提高稳定性。在相同色谱条件下，分别采用Welch C18色谱柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）、Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）、Agela C18 色谱柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）3种不同厂家色谱柱对样品进行分析，所获得色谱图中芍药苷均具有较好分离度，表明该方法重现性及耐受性良好。

相关文献表明，白芍原药材不同炮制品芍药苷含量为白芍>炒白芍［13］。本实验中，白芍配方颗粒中芍药苷含量高于炒白芍配方颗粒，实验结果与文献相符。芍药苷具有一定的水溶性，（炒）白芍药材经水提后制成的配方颗粒能够保留其成分。因此，以芍药苷作为（炒）白芍配方颗粒质控指标具有一定的合理性。本文所建立的（炒）白芍配方颗粒HPLC 含量测定方法重复性好、准确度高，能够用于（炒）白芍配方颗粒中芍药苷含量分析与质量控制，同时，可为（炒）白芍配方颗粒的实际生产与临床应用提供参考。