高效液相色谱法测定雷西纳德原料药的含量

苏有为，王新妍，晏斐，朱海，黄艳*(海南医学院药学院，海南 海口 571199)

0 引言

雷西纳德(Lesinurad)是首个上市的尿酸转运蛋白1抑制剂，临床上主要与黄嘌呤氧化酶抑制剂联用，用于治疗与痛风相关的高尿酸血症[1]。雷西纳德对轻、中度肾功能不全的痛风患者有效，具有较好的耐受性，能加速痛风患者尿酸的消除。将其与黄嘌呤氧化酶抑制剂联用，可降低血浆中尿酸水平，且安全性较高[2]。目前，雷西纳德在国内还未上市，开发的市场前景良好。为了保证雷西纳德的质量，现对自制的雷西纳德原料药含量测定方法进行研究，使用了高效液相色谱法(HPLC)测定雷西纳德的含量。方法简便、快速，准确度、精密度良好，适用于雷西纳德的含量测定。

1 仪器与试药

赛默飞Ultimate3000高效液相色谱仪，甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为双蒸水，雷西纳德(自制，批号为20201001、20201002、20201003)，雷西纳德对照品(自制，批号为D2020003，含量为99.5%)。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制及测定法

取雷西纳德供试品、雷西纳德对照品适量，精密称定，分别加流动相超声溶解并稀释制成每1 mL约含雷西纳德30 µg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液、对照品溶液。分别精密量取上述两种溶液各10 µL进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

色 谱 柱 为Luna C18(2)100 A(150×4.6 mm,5 um)；以 甲 醇-2% 冰醋酸溶液(60:40)为流动相；检测波长为290 nm；流速1.0 mL·min-1。精密量取2.1项下供试品溶液、对照品溶液及空白溶剂各10 μL进样，记录色谱图，结果如图1所示。理论板数按雷西纳德峰计算为7 458，雷西纳德峰拖尾因子为0.99，与相邻的峰分离度为3.32，空白溶剂不干扰雷西纳德的含量测定，色谱条件可以满足系统适用性试验要求。

图1 对照品与供试品色谱图

2.3 进样精密度

取2.1项下的对照品溶液10 μL进样，连续测定6次，各色谱峰面积的RSD为1.03%。表明进样精密度良好。

2.4 专属性试验

精密称取雷西纳德供试品约25 mg，置于50 mL量瓶中，加流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取3 mL(共6分)，分别置于50 mL量瓶中，按以下条件试验：一份加流动相稀释至刻度，摇匀；一份加30%的过氧化氢溶液0.5 mL，摇匀，室温下放置2 h，加流动相稀释至刻度，摇匀；一份加1 mol/L盐酸溶液2 mL，摇匀，室温下放置2 h，用1 mol/L氢氧化钠溶液2 mL中和，加流动相稀释至刻度，摇匀；一份加1 mol/L氢氧化钠溶液2 mL，摇匀，室温下放置2 h，用1 mol/L盐酸溶液2 mL中和，加流动相稀释至刻度，摇匀；一份加溶剂适量，置沸水浴加热1 h，取出，放冷至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀；一份于太阳光下照射2 h，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别取上述6种溶液滤过，取续滤各10 μL进样，记录色谱图，结果如图2所示，各条件下产生的降解产物，均能与主峰完全分离，能够满足本品的含量测定的要求。

图2 专属性试验色谱图

2.5 溶液稳定性试验

取批号为20201001的供试品溶液，分别放置0、2、4、6、8 h后进样测定，主峰峰面积的RSD为0.46%，结果表明供试品溶液8 h内稳定。

2.6 线性关系考察

取雷西纳德对照品适量，精密称定，置50 ml量瓶中，加流动相超声溶解并稀释制成每1 mL中约含雷西纳德500 μg的对照品储备液，分别精密量1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于50 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，分别量取续滤液10 µL进样，记录色谱图，以浓度C(µg/mL)对峰面积A绘制标准曲线，回归方程为A=0.238 6 C-0.047 6，r=0.999 8，雷西纳德在浓度为10.19～50.94 μg/mL范围内，线性关系良好。

2.7 回收率试验

精密称取雷西纳德对照品约20 mg、25 mg、30 mg各3份，用流动相超声溶解配制成约相当于供试液浓度的80%、100%、120%的溶液，分别进样测定，计算回收率。回收率为99.07%～100.63%，平均回收率为99.68%，RSD为0.62%(n = 9)。结果表明方法准确度良好。

2.8 重复性试验

取同一批号供试品6份及对照品适量，精密称定，照2.1项下的方法制备溶液。分别取10 µL进样测定，含量分别为99.56%、99.06%、100.45%、99.68%、99.42%、99.09%，RSD为0.52%。结果表明方法重复性良好。

2.9 耐用性试验

分别调整流动相比例为甲醇-2%冰醋酸溶液(65:35)及(55:45)、流速0.8的情况下进行试验，主峰的拖尾因子、主峰与杂质峰分离度均符合规定，能够满足本品的含量测定的要求，说明方法耐用性良好。

2.1 0 含量测定

取3批供试品及对照品适量，精密称定，照2.1项下的方法制备溶液并进样测定，以外标法按峰面积计算含量，3批供试品的含量分别为99.37%、99.51%、99.75%。

3 结语

3.1 测定波长的选择

取浓度为30 μg/mL的雷西纳德对照品溶液，照分光光度法[3]，于200～400 nm波长范围内扫描，雷西纳德在293.2 nm波长处有最大吸收，此处空白溶液无吸收，因此，结合参考文献[4-5]，选择测定波长为290 nm。

3.2 色谱条件选择与优化

分别考察乙腈-水、甲醇-水与甲醇-冰醋酸溶液为流动相，结果显示：以乙腈-水、甲醇-水为流动相时，色谱峰均有明显的拖尾现象；以甲醇-2%冰醋酸溶液(60:40)为流动相时，主峰保留时间适中，拖尾因子与分离度均符合《中国药典》的要求。

3.3 专属性试验

雷西纳德在氧化、强碱及光照条件下杂质均无明显变化，且未产生新的降解杂质；在高温及强酸条件下，在相对保留时间1.36处未知杂质有所增加，其他杂质均无明显变化，欲知此未知杂质是什么物质，还有待进一步研究。