8种杀菌剂对梅片树炭疽病菌的室内毒力测定

李静宇，蒲小明，蒲浩杰，孙金锴，张冬生，王继华

摘 要：梅片树作为一种传统中药—天然右旋龙脑提取的新资源，目前生产上正遭受炭疽病的严重威胁，为了有效防治梅片树炭疽病，本研究选择8种杀菌剂对病原菌进行了室内毒力测定与筛选。结果表明：8种杀菌剂对炭疽菌菌丝生长均有一定的抑制作用，其中25%吡唑醚菌酯悬浮剂、80%多菌灵可湿性粉剂和15%咪鲜胺微乳剂抑制效果最好，EC50值分别为0.039 mg/L、0.170 mg/L和0.260mg/L;而10%苯醚甲环唑水分散粒剂、68.8%噁酮锰锌水分散粒剂、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂、80%代森锰锌可湿性粉剂和75%百菌清可湿性粉剂抑制作用较弱。该研究结果为田间梅片树炭疽病防治杀菌剂选择提供了参考和理论依据。

关键词：梅片树;炭疽病;杀菌剂;毒力测定

中图分类号：S482.2+6                 文献标志码：A

Determination of Indoor Virulence of Eight Fungicides against Meipian Tree Anthracnose

LI Jingyu1，3，PU Xiaoming2，PU Haojie4，SUN Jinkai1，3，

ZHANG Dongsheng5， WANG Jihua1，3*

（1Guangdong Key Laboratory for Crops Genetic Improvement/Crop Research Institute， Guangdong Academy of Agriculture Sciences， Guangzhou， Guangdong 510640， China; 2Plant Protection Research Institute， Guangdong Academy of Agricultural Sciences / Guangdong Provincial Key Laboratory of High Technology for Plant protection， Guangzhou 510640， China; 3 Yunfu Yuncheng District Agricultural Rural and Water Bureau， Yunfu，Guangdong 527300， China; 4Meizhou Academy of Agricultural and Forestry Sciences， Forestry Research Institute， Meizhou，Guangdong 514014， China）

Abstract： Meipian tree is a new resource for extracting natural D-norneol——a traditional Chinese medicine. It is suffering from anthracnose in production. To control anthracnose， the indoor virulence effects of eight fungicides on the pathogen of anthracnose were determined. The results showed that the eight fungicides all had certain inhibitory effects on the mycelial growth， among them，25% pyraclostrobin SC，80% carbendazim WP and 15% prochloraz ME had the best effects， and their EC50 values were 0.039、0.170 and 0.260 mg/L， respectively;10% difenoconazole WG，68.8% famoxadone mancozeb WG，70% thiophanate-methyl WP， 80% mancozeb WP and 75% chlorothalonil WP had weak effects. This study provides reference and theoretical basis for selecting fungicides to control anthracnose in Meipian tree production.

Key words： Meipian tree; anthracnose; fungicides; virulence determination

梅片树是阴香（Cinnamomum burmannii）的一种生理变型，是1984年中科院华南植物园在广东省梅州市内发现的一种天然右旋龙脑新资源[1]。右旋龙脑又称天然冰片，是一种重要的传统中药，用于疾病的预防和治疗有超过2000年的历史，具有开窍醒神，退热止痛的功效，也是许多传统中成药中的重要组成成分[1]。天然右旋龙脑资源已近枯竭，从而导致国际上天然右旋龙脑奇缺、价格昂贵[1]。并且通过化学手段得到的合成龙脑，在储存过程中会逐渐降解产生有毒性的异龙脑[2]。梅片树叶挥发油中右旋龙脑含量高达68%[3]，是生产天然冰片的优良原材料。然而，梅片树正受到炭疽病的严重威胁，主产地广东省梅州市平远县部分大田发病率达到40% ～ 60%，病原菌侵染梅片树叶片产生灰色圆形坏死斑点，边缘呈深棕色，每片叶中会出现几个到十几个坏死斑點，发病后期，叶片会大面积变黑脱落，梅片树叶是主要的药用部位，梅片树炭疽病给当地带来了严重的经济损失。研究梅片树炭疽病的防治具有重要意义。

炭疽病是由致病真菌刺盘孢属（Colletotrichum spp.）引起的植物病害，宿主非常广泛，包括各种豆类、蔬菜、水果和多年生作物，可以侵染宿主的叶片、茎秆和果实。病原菌通常通过产生分生孢子附着在植株幼嫩或受伤的部位，形成附着器，产生侵入钉侵入组织细胞，引起病害，造成植物组织坏死。炭疽病发病的典型症状包括产生呈同心圆状的凹陷坏死病斑，或产生粘性、粉色的小点状物。造成的症状包括叶斑、梢枯、枝枯、溃疡和果腐等。炭疽病给茶树[4]、桃[5]、葡萄[6]、苹果[7]、芒果[8， 9]等经济作物带来了严重的损失，目前对炭疽病的化学防治研究发现肟菌·戊唑醇和嘧菌酯对钩藤炭疽病博宁炭疽菌（Colletotrichum boninense）毒力较强[10];75%百菌清对甜柿炭疽病果生刺盘孢（C. fructicola）防治效果较好[11];400 g/L氟硅唑乳油、10%苯醚甲环唑微乳剂、80%戊唑醇可湿性粉剂、30%肟菌·戊唑醇悬浮剂和43%氟菌·肟菌酯悬浮剂对油茶炭疽病菌胶孢炭疽菌（C. gloeosporioides）的抑制效果较好[12]。吡唑醚菌酯、咪鲜胺、苯醚甲环唑和甲基硫灵对核桃炭疽病胶孢炭疽菌（C. gloeosporioides）的菌丝生长抑制效果较好[13， 14]。不同作物炭疽病防治效果好的药剂有所差别，炭疽病致病菌株不同和物种之间的差异可能是造成这种现象的原因之一。对梅片树进行炭疽病的杀菌剂筛选具有重要意义。

为了在田间更好的防治梅片树炭疽病，对杀菌剂进行室内筛选具有重要意义。本研究选择了8种杀菌剂进行室内筛选试验，以期为田间梅片树炭疽病用药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 梅片树炭疽病菌

本实验所用梅片树炭疽病菌株MPS-2，为炭疽菌（Colletotrichum sp.）属于胶孢炭疽菌复合种，分离自广东省梅州市梅片树病叶，经过分子鉴定回接等实验鉴定为梅片树炭疽病原菌，保存于广东省农业作物与遗传重点实验室。

1.1.2 试验杀菌剂

实验药剂主要有10%苯醚甲环唑水分散粒剂（先正达南通作物保护有限公司）、25%吡唑醚菌酯悬浮剂（浙江世佳科技股份有限公司）、80%多菌灵可湿性粉剂（一帆生物科技集团有限公司）、68.8%噁酮锰锌水分散粒剂（美国杜邦公司）、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂（允发化工（上海）有限公司）、80%代森锰锌可湿性粉剂（陶氏益农农业科技（中国）有限公司）、75%百菌清可湿性粉剂（先正达（苏州）作物保护有限公司）和15%咪鲜胺微乳剂（海南博士威农用化学有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 室内毒力测定

采用菌丝生长速率法[21]。配制合适浓度的母液，吸取适量母液加入灭菌的PDA培养基中混匀，制备PDA含药平板，每药剂对半稀释成5～7个浓度系列。将实验室保存的MPS-2菌株活化，接种于PDA平板上，用5mm的打孔器取菌丝边缘菌饼转接于含药剂PDA平板中央，并同时设置空白对照，将菌饼转接在不含药剂PDA平板上，每个浓度梯度做三次重复。待对照长满平皿后，十字交叉法测定其他浓度的菌落直径，计算每种药剂不同浓度的抑制率。

菌丝生长抑制率（%）=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-菌饼直径）×100

1.2.2 数据分析

通过Microsoft Excel 2019、SPSS数据处理平台计算菌丝生长抑制率机率值与药剂浓度对数值之间的线性回归方程、各药剂对梅片树炭疽菌的有效抑制中浓度（EC50），比较该病原菌对各药剂的敏感性。

2 结果与分析

2.1 田间发病情况

梅片树叶片中炭疽病发病时会产生灰色圆形坏死斑点，边缘呈深棕色，每片叶中会出现几个到十几个坏死斑点，发病后期，叶片会大面积变黑（如下图1）。

2.2 8种杀菌剂对梅片树炭疽病菌菌丝生长的抑制效果

本研究选取8种常用化学杀菌剂对梅片树炭疽病菌MPS-2进行室内毒力测定。经过预实验对所选杀菌剂的浓度进行初步筛选后，分别选取适宜浓度进行毒力测定。如下表1和图2所示，8种杀菌剂均对MPS-2菌丝生长产生抑制作用，并且随着PDA平板中药剂浓度的增加，对mps-2菌丝生长抑制率越大。其中25%吡唑醚菌酯抑制效果最好，在药剂质量浓度为0.49 ～ 250.00 mg/L范围内，其抑制率为58.68% ～ 93.92%;在80%多菌灵的质量浓度为0.49 ～ 2000.00mg/L时，其抑制率为57.21% ～ 89.46%;在15%咪鲜胺在药剂质量浓度为0.08 ～ 25 mg/L范围内，其抑制率为20.34% ～ 97.89%;在70%甲基硫菌灵质量浓度为0.98 ～ 125.00mg/L时，其抑制率为0.74% ～ 89.31%;在10%苯醚甲环唑质量浓度为3.13 ～ 800.00mg/L时，其抑制率为5.10% ～ 93.92%;在68.8%噁酮锰锌质量浓度为15.60 ～ 250mg/L时，其抑制率为34.41% ～ 70.29%;在80%代森锰锌质量浓度为15.60 ～ 250mg/L时，其抑制率为7.84% ～ 79.90%;其中75%百菌清对梅片树炭疽病菌mps-2的抑制作用最弱，在质量浓度为125.00 ～ 16000.00mg/L时，其抑制率为19.90% ～ 90.54%。

2.3 室内毒力测定结果

利用SPSS软件对药剂质量浓度的对数值（x）和抑制率（y）数据进行分析，分别得出8种杀菌剂的毒力回归方程、相关系数R2和EC50值。由表2可知，8种杀菌剂的EC50值差异比较显著，25%吡唑醚菌酯的EC50值最小，75%百菌清的EC50值最大。8种杀菌剂的EC50值由小到大依次为25%吡唑醚菌酯、80%多菌灵、15%咪鲜胺、70%甲基硫菌灵、10%苯醚甲环唑、68.8%噁酮锰锌、80%代森锰锌和75%百菌清，其EC50值分別为0.039、0.170、0.260、12.117、48.150、62.144、107.597和898.049 mg/L。

3 讨论

本实验中使用的8种杀菌剂对梅片树炭疽病的防治效果差别较大，其中25%吡唑醚菌酯、80%多菌灵和15%咪鲜胺抑制效果最好，EC50值分别为0.039、0.170和0.260mg/L;70%甲基硫菌灵、10%苯醚甲环唑、68.8%噁酮锰锌、80%代森锰锌和75%百菌清对梅片树炭疽病的室内防治效果较差。研究发现，吡唑醚菌酯和咪鲜胺在核桃炭疽病胶孢炭疽菌（C. gloeosporioides）防治中也具有很好的效果[13， 14]，而吡唑醚菌酯和咪鲜对胺钩藤炭疽病博宁炭疽菌（C. boninense）的防治效果一般[10]，推测可能是梅片树炭疽菌和核桃炭疽菌都属于胶孢炭疽菌复合种，所以在杀菌菌防治效果有相似性。75%百菌清对甜柿炭疽病果生刺盘孢（C. fructicola）防治效果较好[11]，但在梅片树炭疽病防治中效果较差，可见杀菌剂效果在不同作物炭疽病之间有所差异。苯醚甲环唑属于甾醇14α脱甲基抑制类三唑类杀菌剂，其杀菌机理是通过破坏病原菌细胞膜功能从而导致细胞死亡[15]。苯醚甲环唑对芒果炭疽病复合种中的C. cordylinicola也具有很好的防治效果[16]。吡唑醚菌酯是一种广谱、高效、毒性低的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，是一种较为安全的杀菌剂[17]。吡唑醚菌酯对苹果叶片和果实上炭疽菌防效达到97%以上[18]。咪鲜胺在茶叶炭疽病[19]、菩提树炭疽病[20]和砀山酥梨炭疽病[21]等多种其他植物炭疽病室内毒力测定中均具有较好的效果。咪鲜胺能通过抑制麦角甾醇的生物合成，使菌体细胞膜功能受破坏而起到杀菌作用，在植物体内有一定的内吸传导作用，是咪唑类广谱低毒杀菌剂。

4 结论

本研究利用含药平皿法测定8种杀菌剂对梅片树炭疽病的室内毒力，发现25%吡唑醚菌酯、80%多菌灵和15%咪鲜胺对梅片树病原菌菌丝生长具有较好的抑制效果。本文的研究结果为梅片树炭疽病的田间防治的药剂选择提供了理論依据，以期能有效解决梅片树炭疽病带来的经济损失。

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