动物用中药饲料添加剂的抑菌和毒理学试验

俸海刀

（柳州市动物园管理处，广西 柳州 545005）

动物园养殖的动物种类多、数量多，动物园人员流动量大，动物饲养管理难度大，因此给各种动物疾病的传播创造了条件。抗生素和化学合成类药物虽然在防病治病方面发挥了巨大作用，但是也要看到这类药物不恰当使用带来的危害，如疾病的耐药性不断增强，残留的抗生素污染养殖场地环境等。尤其是动物园养殖了很多濒危野生动物，抗生素和化学合成类药物的不当使用，可能导致畸形胎、流产等现象发生，加大濒危动物的繁育难度。因此需要寻求有效的抗生素替代物，提高动物园动物的养殖成绩[1-15]。考虑动物园动物种类多、病因多的因素，因此在设计抗生素替代物时，需要满足广谱、高效、无毒、低毒的特点。中药具有益气养血、固本培元等功效，且绿色环保，笔者依据中药配伍的原理，配制两组中草药添加剂，用其前期提取液进行了抑菌和毒理试验，以期为动物的健康养殖提供参考[1-15]。

1 材料与方法

1.1 中药饲料添加剂前期提取物制备

配制中草药饲料添加剂前期提取液，A组中药松针、紫苏籽、泡桐花、黄精、韭菜子、淫羊藿、东革阿里按照质量比24∶20∶12∶15∶12∶10∶10组方，B 组中药党参、黄芪、当归、黄芩、栀子、淫羊藿、牛膝按照质重量22∶17.5∶10∶12.5∶10∶8∶8组方。

按照A 组B 组的组方进行药材的挑拣、清洗、干燥、混合粉碎，然后加沸水搅拌成糊状中药粉，冻融，经过3次醇提，合并滤液，除乙醇后再次浓缩，至相对密度1.18，即得试验所用中草药饲料添加剂前期提取液[16]。

1.2 试验动物和试验仪器

试验动物为均重20 g的成年小白鼠，由广东江门一号生态园提供；试验所需的器具为牛津杯、培养皿、低速台式水平离心机、低温冰箱、电热恒温水浴箱、显微镜等，均购于深圳市泰润仪器设备有限公司。

1.3 抑菌试验

1.3.1 药敏试验

将培养皿灭菌后分成6个扇区，在超净工作台中，用经酒精灯火焰灭菌的接种环挑取适量大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌4种细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。将牛津杯内加入100 μL 药液按顺序放入6 个扇区中央，37 ℃下培养24 h，测量抑菌圈直径。

1.3.2 最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）的测定

采用10 倍稀释法及2 倍稀释法，参考黄亚东等[16]的方法进行最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）的测定。

1.4 毒理学试验

1.4.1 急性毒性试验（LD50的测定）

设4 个剂量组，剂量分别是10000 mg·kg-1、20000 mg·kg-1、40000 mg·kg-1、80000 mg·kg-1，同时设立1个空白对照组。每组有10只小白鼠，连续给药1周，每天观察小白鼠精神状态、食欲和饮水情况、中毒情况，并记录白鼠的死亡数目[17-18]。

1.4.2 蓄积毒性试验

设4个剂量组（剂量分别为1000 mg·kg-1、2000 mg·kg-1、4000 mg·kg-1、8000 mg·kg-1）和1个空白对照组，灌胃给药，连续给药3 周，停止给药后再观察1 周，在4 周内每天观察小白鼠精神状态、食欲和饮水情况、体重情况以及中毒情况，并记录白鼠的死亡数目[19]。

1.5 数据处理及分析

试验结束用SPSS 10.0 软件， 采用one- way ANOVA 进行统计分析，并进行Duncan’s 多重比较。结果用“平均数±标准误”表示。

2 结果与分析

2.1 抑菌试验效果

2.1.1 抑菌圈直径

抑菌圈直径测定结果见表1。

表1 抑菌直径 mm

由表1 可知，2 组提取液均有一定的抑菌作用，从大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌4 个抑菌圈直径可以看出，A 组分别比B 组高出3.95 mm、2.35 mm、0.35 mm 和2.6 mm，说明A组提取液的抑菌效果强于B组提取液，其中A组大肠杆菌、沙门氏菌和副猪嗜血杆菌3个抑菌直径明显高于B组，差异显著（P＜0.05）。

2.1.2 MIC和MBC

MIC和MBC测定结果见表2。

表2 MIC和MBC测定结果 mg·mL-1

由表2可知，2组中药提取液的MIC和MBC 都较为理想。对比发现，除了巴氏杆菌两组的MIC和MBC 差异不显著外，试验A 组在大肠杆菌、沙门氏菌和副猪嗜血杆菌的MIC 和MBC 均明显优于试验B组，差异显著（P＜0.05）。

2.2 毒理学试验

2.2.1 急性攻毒试验

在急性攻毒后1周时间内，试验小白鼠的精神状态正常，即使在灌服最大剂量80000 mg·kg-1中草药提取液后，也没有出现任何中毒现象。因而无需测定半数致死量，即LD50＞80000 mg·kg-1。急性攻毒试验结果表明本试验所设计的动物用中草药饲料添加剂是属于无毒类物质。

2.2.2 蓄积毒性试验

在蓄积毒性试验给药3 周后，2 个试验组的小白鼠的精神状态，采食和饮水等情况均表现正常，也未出现中毒情况，停止给药1周后，小白鼠的精神状态、采食和饮水等情况均表现正常，见表3。

表3 蓄积毒性试验结果 g

由表3 可知，给药3 周后，各剂量组与空白对照组相比，在试验初始重、结束重和平均增重方面均无明显差异（P＞0.05）。

3 结 论

本试验所设计的中药提取液具有较好的抑菌（大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌）杀菌作用，无毒副作用，在动物饲养过程中可以作为中药添加剂使用。