袁鑫鑫,姚新奎,2,3,曾亚琦,2,王建文,2,孟 军,2*,任万路,2,王川坤,2,那贝·达尼亚尔
(1.新疆农业大学动物科学学院,新疆乌鲁木齐 830052;2.新疆农业大学马产业研究院,新疆乌鲁木齐 830052;3.新疆马繁育与运动生理重点实验室,新疆乌鲁木齐 830052)
新疆育马业正处于加速转型时期,扩大马匹繁育生产规模,提高幼驹的培育水平和母马繁殖成活率十分关键[1]。尽管马兽医学有所进步,但晚期胎儿死亡率高、流产等不良妊娠结局仍然是育马业的主要问题[2]。在饲养环节,母马与胎儿或胚胎的正常联系受到损坏,从而使母马妊娠停止而流产[3]。卢亚宾等[4]研究发现伊犁马在妊娠前期发生流产时,血液中雌二醇(E2)、孕酮(P)波动较大,可作为诊断母马早期是否受孕的依据。张秀坤等[5]研究发现三河马在妊娠前期常由于内分泌调节作用紊乱而发生流产。陈敦金等[6]研究发现,母体甲状腺(T4)水平与流产等不良妊娠结局相关,是一项重要的检测指标。Marinescu 等[7]研究发现,产前压力会导致孕妇皮质醇(COR)升高,并且与胎儿神经发育中断、胎盘异常、自然流产或早产有关。王蕴慧等[8]研究发现,孕妇妊娠期胰岛素(INS)水平增加会导致不良妊娠结局增加。因此,依据血清激素的变化可判断妊娠母马是否处于健康状态,胎儿是否正常发育[9]。
目前,在妊娠马中研究较多的为妊娠早期血清激素变化与妊娠结局的关系,而对于不同妊娠阶段及产后多种激素的变化情况研究较少。本研究通过对流产伊犁马与正常分娩伊犁马在妊娠第205、318 天及产后第2 天血清相关激素水平进行检测,探究伊犁马在妊娠期间血清激素水平的变化,为伊犁马在妊娠期发生不良妊娠结局相关研究提供理论依据。
1.1 试验动物 试验于2019 年12 月—2020 年6 月进行,选取伊犁哈萨克自治州昭苏马场内21 匹怀孕及7 匹空怀伊犁马,经马场兽医检查马匹状态为健康,怀孕马妊娠时间均为妊娠第203 天,年龄范围在4~12 岁。试验所选母马均集中统一饲养管理,膘情相近,妊娠状况良好。
1.2 试验方法 根据母马妊娠结局及妊娠状态,将5 匹流产及16 匹正常分娩母马分为流产组及正常分娩组;7匹空怀母马为对照组。流产组或正常分娩组中流产母马发生于妊娠第315~357 天。试验采用静脉不抗凝采血法,分别在妊娠第205、318 天及产后第2 天对母马进行颈静脉采血,每次采血5 mL,采集的血液立即以3 000 r/min离心20 min 后,取上层血清置于-20℃冰箱中待测。样品送北京北方生物技术研究所检测,通过XH6080 放免仪采用放射性免疫法分别检测血清中INS、COR、P、T4、E2含量。
1.3 统计分析 试验结果用Excel 软件进行数据整理,使用SPSS 26.0 分析软件对各组间血清激素指标运用One-Way ANOVA 方差分析以及Duncan's 多重比较。结果以平均值±标准误来表示。
2.1 不同妊娠状态母马血清激素水平变化 由表1 可知,妊娠第205 天空怀组COR 含量高于流产组和正常分娩组(P<0.01),但流产组和正常分娩组无显著差异。妊娠第205 天流产组和正常分娩组的E2含量高于空怀组(P<0.01),而INS、P、T4含量无显著变化。妊娠第318 天随着胎儿发育,空怀组INS 含量高于流产组和正常分娩组(P<0.01),COR 含量在各组间无显著差异,流产组P 含量高于空怀组(P<0.05),空怀组T4含量高于正常分娩组(P<0.05)和流产组(P<0.01),流产组和正常分娩组的E2含量高于空怀组(P<0.01)。空怀组由于不存在分娩情况故不进行对比。产后第2 天正常分娩组T4高于流产组(P<0.01),INS、COR、P、E2含量在流产组和正常分娩组之间无显著性差异。
表1 空怀、流产及正常分娩母马血清激素水平含量
2.2 5 种血清激素在妊娠时期的变化 如图1-A 所示,空怀组INS 含量在妊娠第205、318 天无显著差异,流产组INS 含量在产后第2 天高于妊娠第318 天(P<0.05),正常分娩组妊娠第205 天INS 含量高于妊娠第318 天和产后第2 天。空怀组COR 含量在妊娠第205 天高于妊娠第318 天和产后第2 天(P<0.01),流产组COR含量在产后第2 天出现升高(P>0.05),正常妊娠组COR 含量在妊娠第205、318 天及产后第2 天均无显著差异(图1-B)。空怀组P 含量在妊娠第205、318 天无显著差异,流产组、正常分娩组P 含量呈现先上升后下降的趋势(图1-C)。空怀组和正常分娩组的T4含量呈上升趋势,流产组呈下降趋势,各组T4含量在各个时期无显著差异(图1-D)。空怀组、流产组和正常分娩组的E2含量在整个时期内均呈下降趋势,流产组E2含量为妊娠第205 天>妊娠第318 天>产后第2 天(P<0.01),正常分娩组E2含量在妊娠第205 天高于妊娠第318 天及产后第2 天(P<0.01)、妊娠第318 天高于产后第2 天(P<0.05),空怀组下降不显著(图1-E)。
图1 5 种血清激素在妊娠时期的变化
3.1 不同妊娠状态母马血清激素对比分析 E2、P 水平增加是妊娠前期母马完成胚胎附植并建立妊娠的标志[10],本试验中妊娠第205 天流产组和正常分娩组母马的E2含量均极显著高于空怀组,说明在妊娠前期母马已成功完成胚胎附植并建立妊娠,导致E2水平升高[11]。Canisso[12]等监测了18 匹母马在妊娠第100 天至马驹足月体内E2的水平变化规律,发现在妊娠中期E2含量维持较高水平,与本试验妊娠第205 天正常怀孕组和流产组的E2水平相似,这可能是此时胚胎在母马体内正常生长,与空怀马相比雌激素水平明显升高。COR在应激状态下可迅速升高,持续应激因素存在时血液中COR 会长时间地维持在较高水平[13]。本试验中空怀组母马可能在妊娠第205 天产生了应激,从而引发血清COR 含量升高。妊娠后期母马已适应胎儿的生长发育[14],胎儿营养需求量也随胎龄的增加而增长,母体进入妊娠后期激素也处于不断变化的一个状态[15]。INS 是机体内唯一能使血糖降低的激素[16],处于妊娠后期的妊娠母马INS 含量极显著低于空怀母马,可能是妊娠后期母马会优先将葡萄糖输送给胎儿,保障胎儿对营养物质的需求,因此导致了母马血液中的葡萄糖维持在较低水平,INS 含量也因此降低[17]。正常怀孕母马在妊娠后期E2与P 水平均高于未怀孕母马激素水平。此外,T4具有促进胎儿的脑、生殖器官和骨骼正常发育的作用,而在妊娠中后期胎儿还未能自身合成,需要母体供给[18]。因此本试验中妊娠第318 天试验组母马血清T4水平降低,可能正是由于母马将部分激素供给胎儿所致。研究发现,分娩启动时,子宫内环境发生很大变化,就生殖激素而言,分娩时孕激素含量降低,雌激素含量急剧增加,分娩后孕激素、雌激素则迅速下降,产后INS、COR 含量均无显著性变化[19-22]。T4含量在整个生命周期中变化很大,而T4分泌失衡可对生命健康造成严重不良影响[23]。而在本试验中,流产组分娩后第2 天T4水平极显著低于正常分娩组,可能是由于在妊娠后期流产组母马出现病理现象导致甲状腺激素分泌紊乱,内分泌失调,最终造成流产[24]。因此在妊娠后期可通过测定妊娠母马体内甲状腺激素含量,监测母马妊娠状况。
3.2 血清激素在妊娠期及产后的变化 母马妊娠期血清激素水平的正常调控是保障胎儿能够正常发育及分娩的必要条件,同时,母体本身的健康状况亦是能否正常分娩的关键[25]。怀孕伊犁马在整个妊娠期内,血液中INS、COR、P、T4和E2浓度存在动态变化过程。有研究发现,妊娠母马血清INS 水平随着妊娠时间的增加而下降[26]。本试验中,随着妊娠时间增加,正常分娩组和流产组INS 水平下降,可能是由于妊娠后期胎儿快速发育,需要从母体吸收大量葡萄糖作为营养物质,因此导致母体血清中葡萄糖含量降低,胰岛素含量也因此而下降。但流产组的INS 含量在产后显著升高,说明母体内存在大量葡萄糖,胎儿在子宫内长时间没能获得充足营养物质,导致胎儿发育不良,母马最终流产。本试验中,正常妊娠组在整个妊娠期COR 含量处于稳定状态,而流产母马COR 含量在产后第2 天出现升高,可能是在流产前母马受到了应激,从而引起COR 含量升高,最终流产[27]。P 在母马维持正常妊娠的过程中具有非常重要的作用,其水平变化对妊娠结局的预测具有重要的应用价值[28]。有研究监测了雌性蓝狐在妊娠期血清中P 的变化规律,发现在妊娠后期达到最高,而在产后达到最低[29]。赵鹏鹏等[30]也检测到围产期雌性大熊猫分娩前P达到最高值后出现迅速下降,分娩完成后E2、P 下降至最低,此趋势与本试验结果一致。母体T4缺乏将会造成流产等不良妊娠结局的发生[22]。本试验中,监测到流产母马血清甲状腺激素在整个妊娠期内呈现下降趋势,这可能由于怀孕母马出现甲状腺功能减退导致母马流产。
本试验结果显示,伊犁马血清激素含量在妊娠第205、318 天及产后第2 天均有不同变化,空怀母马血清中除COR 含量外其余激素均无显著性变化;正常分娩母马INS 和E2含量在妊娠第205、318 天及产后第2天处于下降趋势,T4含量处于上升趋势,COR 含量无明显变化,而P 含量出现先升高后下降的趋势;流产母马在产后第2 天的INS 和COR 含量相对于正常分娩组异常升高,而T4含量下降,此外P 和E2含量与正常妊娠组没有显著性变化。因此,在妊娠期间应定期对母马进行血清激素等妊娠检查,通过血清激素变化判断胎儿是否在母马体内正常生长发育,根据母马血清激素变化及时采取相应措施,以防止母马与胎儿或胚胎的正常联系受到损坏导致不良妊娠结局。