■杨乾龙 鲍 坤 王晓旭 王 静 李光玉 郭肖兰 王凯英
(中国农业科学院特产研究所,特种经济动物分子生物学国家重点实验室,吉林长春 130112)
梅花鹿全身是宝,鹿茸、鹿血、鹿胎、鹿鞭等是名贵的中草药,在《本草纲目》中均有记录,被中医广泛应用。我国梅花鹿养殖量世界第一,初步估计舍饲梅花鹿约70万头,主要分布在东北地区,其中吉林省双阳区和吉林省东丰县较为集中[1]。2020年5月29日农业农村部把梅花鹿划分到《国家畜禽遗传资源品种名录》,这将为广大农民打开养鹿致富之门。降低饲养成本是扩大盈利的重要手段之一,近年来研究表明,降低日粮蛋白质水平同时适量添加赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、精氨酸等氨基酸,能够降低梅花鹿饲养成本,同时保持正常的生产性能[2-3]。可见饲料配方的优化对梅花鹿养殖行业以及企业的发展有着重要的作用。
采用单因素随机分组试验设计,选择体况相近的30 只健康的1 岁龄雄性梅花鹿,随机分为3 组(每组10个重复,每个重复1只),每组饲养在同一圈舍。A组(粗蛋白质20.81%、钙0.46%、磷0.34%、)、B组(粗蛋白质21.83%、钙0.45%、磷0.32%)和C组(粗蛋白质17.23%、钙1.69%、磷0.22%),具体配方及营养水平见表1。
表1 基础饲粮组成以及营养水平(风干基础,%)
试验期期梅花鹿每天饲喂3 次。早晨5:00 先喂精饲料后喂粗饲料,中午11:00 饲喂粗饲料,下午17:00 先喂精饲料后喂粗饲料。其中精饲料限量饲喂,粗饲料为玉米秸秆不限量饲喂,每天记录剩料量。每天早饲后打扫圈舍,换水。试验日期为42 d(2020年8月14 日~2020 年9 月24 日),在吉林省东丰县某鹿场进行试验。
1.3.1 血样采集
于试验最后1 d早饲前将鹿麻醉并进行颈静脉采血,采集的血样在带有分离胶的促凝管中静止至血清析出,3 500 r/min 离心10 min,血清倒入1.5 mL Ep⁃pendorf管中,-80 ℃低温保存,待测。
1.3.2 粪样采集
试验最后4 d 早饲前进行部分收粪法收粪,每个圈舍划区域收集10 组新鲜的粪样。每袋大约收集100 g。去除鹿毛和沙砾,将收集的粪样分成2份,1份喷洒10%稀硫酸固氮,65 ℃烘干至恒重,粉碎后过40目筛,制成的风干基础样品测粗蛋白。另1份85 ℃烘箱内灭菌2 h后,65 ℃烘干恒重后粉碎过18目筛测纤维。
1.4.1 饲料及粪样营养物质含量的测定
饲料以及粪样干物质(DM)含量参照GB/T6435—2014 进行测定;饲料以及粪样中的粗蛋白(CP)利用凯氏定氮法参照GB/T 6432—2018 进行测定;饲料以及粪便中的粗脂肪(EE)利用索氏脂肪浸提法参照GB/T 6433—2006 进行测定;饲料以及粪便中的中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)使用范式(Van Soest)方法参照GB/T 20806—2006 进行测定。各营养物质测定同时参照《饲料分析及饲料质量检测技术(第3 版)》。各营养物质表观消化率(%)=100-(100×A/A1×B1/B),其中,A为饲料中2 N盐酸不溶灰分百分含量;A1 为粪中2 N 盐酸不溶灰分百分含量;B1为粪中某营养物质百分含量;B为饲料中某营养物质百分含量,参照《动物营养学(第2版)》。
1.4.2 血清样品的测定
低密度脂蛋白(LDL)含量采用直接法-表面活性剂清除法测定,三酰甘油(TG)含量采用GPO-PAP 法测定,胆固醇(CHO)含量采用CHOD-PAP 法测定,高密度脂蛋白(HDL)采用直接法-过氧化氢酶清除法测定,谷草转氨酶(AST)采用天门冬氨酸底物法测定,葡萄糖(GLU)采用己糖激酶法测定,碱性磷酸酶(ALP)采用NPP 底物-AMP 缓冲液法测定,白蛋白(ALB)采用溴甲酚绿法测定,总蛋白(TP)采用双缩脲法测定,乳酸脱氢酶(LDH)采用乳酸底物法测定,尿素(Urea)采用尿素酶-谷氨酸脱氢酶法测定,谷丙转氨酶(ALT)采用丙氨酸底物法测定。所购买的试剂来自中生北控生物科技有限公司,严格按照试剂盒使用说明书,使用威图-E生化分析仪测定。
1.4.3 饲料成本计算
饲料成本根据吉林省东丰县当地购买饲料原料价格计算。
所得试验数据先通过Excel 2016软件进行处理,然后采用统计软件SPSS 24.0进行one-way ANOVA方差分析,并且采用Duncan’s法多重比较,所得到的结果采用“平均值±标准误差”表示,以P<0.05为差异显著标准。
表2 梅花鹿营养物质表观消化率(%)
由表2 可知,A 组和B 组的CP、NDF、ADF、DM、OM 的表观消化率显著高于C 组(P<0.05),并且A 组和B组之间差异不显著(P>0.05);A组和B组EE的表观消化率显著低于C 组(P<0.05),并且A 组和B 组之间差异不显著(P>0.05)。
表3 梅花鹿血清生化指标
由表3 可知,与脂肪相关的生化指标LDL、HDL、TG 和CHO 组间差异不显著(P>0.05);与肝功能相关酶的生化指标ALP、AST、LDH和ALT组间差异不显著(P>0.05);与蛋白质、氨基酸代谢相关的生化指标中,A组和C 组的Urea 含量显著低于B 组(P<0.05),但是两者之间差异不显著(P>0.05);A组的TP含量显著低于B 组和C 组(P<0.05),后两者之间差异不显著(P>0.05);ALB和GLU含量3组之间差异不显著(P>0.05)。2.3 精饲料配比对梅花鹿粗饲料采食量和饲料成本的影响(见表4)
表4 梅花鹿粗饲料采食量和饲料成本
由表4可知,在定量精饲料和不限量粗饲料的条件下,A组的粗料采食量最高,比B组高4.1%,比C组高0.9%;A 组精料的价格最低,比B 组精料的成本每吨低10.0%,比C组精料成本每吨低4.0%。
营养物质表观消化率的高低在一定程度上表示动物对饲料的消化利用情况[4]。刘佰阳等[5]通过对梅花鹿仔鹿在不同蛋白质水平下营养物质消化率的研究,确定梅花鹿仔鹿精料适宜的蛋白质水平为21%,本试验中得到相似的结果,CP水平在21%左右的饲料其营养物质消化率高于CP水平为17%的饲料。黄杰[6]研究表明在正常范围内CP、DM、OM消化率随着蛋白质水平的升高而升高。于伟丽[7]和Lee等[8]研究结果表明DM、OM、ADF、NDF消化率随日粮蛋白的降低而降低,本试验得到相同的试验结果。刘可园等[9]和秦枫等[10]研究表明比格犬和仔兔日粮蛋白质水平升高会显著提高粗脂肪的表观消化率,本试验结果与之不同,3个组的粗脂肪含量基本相同,A组和B组粗蛋白质水平高于C组,但是C组的粗脂肪表观消化率显著高于A组和B组,可能是C组与A、B两组相比饲料原料组成及含量相差较大,C组饲料中含有易消化的短链脂肪酸较多,也可能是动物需要的能量来源包括蛋白质和脂肪,A组和B组饲料的蛋白质含量过高能给动物体提供足够的能量,而C组饲料蛋白质水平低需要脂肪提供更多的能量,最终导致C组的粗脂肪表观消化率显著增高。
动物的血清生化指标可以反映动物体内环境的稳定,脂肪、蛋白质等营养物质的利用状况,肝脏的状况,综合表现动物机体的健康状况[11]。与脂肪代谢相关指标包括LDL、HDL、TG以及CHO等,能够反映机体脂肪代谢的状况,LDL和HDL具有运输脂类物质CHO的作用,两者的作用途径都是外周组织与肝脏之间,但是方向相反[12];TG是脂类代谢的中间产物,是机体能量来源的重要物质,能分解产生甘油和挥发性脂肪酸[13]。本试验中LDL、HDL、TG以及CHO差异不显著,表明3种配方对脂肪代谢有同样的作用,间接反映仔鹿对脂肪的沉积无明显区别。与肝功能相关的酶包括ALP、AST、LDH 和ALT 等,ALP 是机体钙、磷代谢的标志之一,能够促进钙、磷形成骨盐[14],处在骨骼生长发育期的动物,体现动物骨骼生长发育情况[15];LDH是参加糖无氧酵解和糖异生的重要酶,对于糖类的合成和代谢具有重要作用[16];AST 和ALT 表示机体蛋白质的代谢状况和肝脏损伤情况,正常范围内,活性越高越利于促进机体蛋白质氨基酸的转化,促进机体组织生成[17]。A 组鹿ALP、AST和ALT最高,表明A组鹿的营养摄入更为合适,更适合仔鹿的生长发育。和蛋白质、能量代谢相关指标包括TP、ALB、Urea和GLU等,TP和ALB是机体内环境稳定的重要部分,TP和ALB等血清蛋白能反映动物对蛋白质和氨基酸的摄入吸收以及在体内的代谢情况[18],结果表明降低蛋白质水平或者蛋白质吸收障碍会导致TP含量显著降低[19],本试验结果与之矛盾,蛋白质水平高的A组TP显著低于B和C组,可能是合适的氨基酸组成在促进蛋白质吸收的同时也促进了蛋白质的代谢,这表明A组鹿的机体更新快,导致蛋白质在动物体内代谢相应增高。Urea是蛋白质代谢产生的,直接反映了动物对蛋白质的利用率和氨基酸的平衡性,氨基酸平衡的日粮,其蛋白质合成率高[20],表现为Urea含量低[21]。试验中A组和C组的Urea含量显著低于B组,说明A组和C组的氨基酸更为平衡,蛋白质利用率更高。血清葡萄糖是机体内糖代谢途径的产物,反映了动物对营养物质利用和能量的需求[22],葡萄糖水平低,表明动物对于能量的摄入不足或者对于营养物质的消化能力低,降低了饲料的利用率[23]。本试验中三组的葡萄糖含量虽然差异不显著,但是A组的含量最高,分别比B 组和C 组高16.0%、20.6%。说明A组的饲料能量摄入充足,饲料利用率高。
在本试验条件下采食量的高低,主要受日粮组成、营养成分平衡和适口性的影响较大,A 组的粗料采食量最高,比B 组高4.1%,但是和C 组基本相等。从营养成分表和实测值中可知,B 组的大豆含量比A组高,脂肪实测值也是3 组中最高的,研究表明脂肪含量能导致采食量降低[24],可能B 组精料能提供足够的能量,降低了梅花鹿对粗料的需求。而反刍动物需要采食粗饲粮促进反刍,这也间接地说明了A组精料更有利于反刍动物的生长和生产需求;A组精料的价格最低,比B组精料的成本每吨低10.0%,比C组精料成本每吨低4.0%,梅花鹿养殖目前正面临难得的发展机遇,切实降低饲料成本是提高饲养效益的主要手段之一,同时也是饲料行业提高竞争力的有效手段。
综合分析各组饲料成本、营养物质表观消化率及血清生化指标,在本试验条件下A组精饲料配比最适宜1岁龄雄性梅花鹿应用。