血清miR-141-3p、IL-35、IL-10联合诊断前列腺癌的价值

张 勇，刘剑新，田长海，韩孝洲，刘 旺，于 澎，邱 瑾，鄢 阳

1.上海中医药大学附属上海市中西医结合医院泌尿外科，上海 200082;2.同济大学附属上海第十人民医院泌尿外科，上海 200072

前列腺癌是出现在前列腺的上皮性恶性肿瘤，是目前泌尿内科中男性较为常见的癌症之一，并且其发病率随着年龄的增加而升高[1]。前列腺癌是一种进展较为缓慢的癌症，在早期并不会出现明显不良反应，逐渐发展至中后期时，患者可出现尿频、尿急、尿痛、腰痛、排尿困难等症状[2]。早期前列腺癌是能够治愈的，但是随着病情的加重，到达中晚期时，治疗效果和预后效果极差。因此对于前列腺癌的早期筛查与诊断是极为重要的[3]。目前临床上对于前列腺癌的筛查主要是前列腺特异性抗原，但是其特异度较低，所以需要寻找更加有效的实验室标准。血清微小RNA-141-3p(miR-141-3p)是一种成熟的miRNA，有研究表示，miR-141-5p在前列腺癌组织内表达会上调，但对于miR-141-3p的研究较少[4]。白细胞介素-35(IL-35)是一种新型炎性因子，能够介导免疫逃逸并促进肿瘤的发生，还能够影响其他细胞因子的分泌，进而参与到肿瘤的发展当中[5]。有研究表示，前列腺癌患者体内IL-10会存在不同程度的改变[6]。所以本研究选取2017年9月至2020年9月上海中医药大学附属上海市中西医结合医院(下称本院)疑似前列腺癌患者181例以及同期体检的健康人群91例的临床资料进行分析，研究血清miR-141-3p、IL-35、IL-10联合诊断前列腺癌的临床价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年9月至2020年9月本院收治的疑似前列腺癌患者181例作为实验组，另选取同期健康体检人群91例作为对照组。其中实验组年龄45～72岁，平均(56.24±10.14)岁，体质量55～68 kg，平均体质量(60.54±3.05)kg，对照组年龄45～71岁，平均(56.08±10.23)岁，体质量55～68 kg，平均体质量(60.98±3.89)kg。实验组纳入标准：(1)患者年龄>18岁；(2)患者精神意志正常；(3)患者能够接受血清miR-141-3p、IL-35、IL-10检测；(4)患者资料完整。实验组排除标准：(1)患者年龄<18岁；(2)患者存在心肌梗死、脑梗死等重大疾病；(3)患者存在心、肺、肾等重要器官障碍；(4)患者存在严重凝血功能障碍；(5)患者中途死亡或退出。两组患者年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究所有患者及其家属知情且签署知情同意书，本研究已经本院伦理委员会批准。

1.2方法 患者入院后均进行细胞穿刺活检，通过组织病理学确诊为前列腺癌患者82例，均符合《前列腺癌临床诊疗学》[7]中前列腺癌病理学诊断标准；其余99例患者诊断为良性前列腺病变：硬化性腺病21例、肾源性腺瘤32例、基底细胞增生18例、前列腺硬化19例、不典型性腺瘤样增生9例，均符合《前列腺诊断病理学》[8]中诊断标准。IL-35、IL-10检测方法：抽取患者空腹静脉全血3.5 mL，高速离心分层，分离血清，送至检验科，IL-35选取上海晶抗生物工程有限公司的人IL-35酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒采用夹心法；IL-10选取上海酶联生物科技有限公司的IL-10 ELISA试剂盒，采用固相夹心法进行检测。IL-35前列腺癌阳性标准：>135.10 pg/mL，前列腺良性增生阳性标准：>48.93 pg/mL；IL-10前列腺癌阳性标准：>124.89 pg/mL，前列腺良性增生阳性标准：>45.11(pg/mL)。miR-141-3p检测方法：抽取患者空腹静脉血3.5 mL，采用Invitrogen公司的miRNA试剂盒对RNA总量进行提取，测量RNA浓度，采用实时转染实验，选取Ribo Bio公司的anti-miR-NC核苷酸，参考Lipofectamine 2000转染步骤进行转染视野，转染效率以荧光显微镜计算荧光素所标记的细胞百分比。miR-141-3p前列腺癌阳性标准：>54.96%，前列腺良性增生阳性标准：>13.40%。

1.3观察指标 对比3组患者血清miR-141-3p、IL-35、IL-10；检测前列腺癌组血清miR-141-3p、IL-35、IL-10阳性检出率，绘制曲线下面积(AUC)分析血清miR-141-3p、IL-35、IL-10定量联合前列腺癌与良性前列腺病变检测的诊断价值。

2 结 果

2.13组患者血清miR-141-3p、IL-35、IL-10比较 相比于对照组，前列腺癌组和良性前列腺病变组血清miR-141-3p、IL-35、IL-10水平显著更高；相比于良性前列腺病变组，前列腺癌组血清miR-141-3p、IL-35、IL-10显著更高，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组患者血清miR-141-3p、IL-35、IL-10对比

2.2前列腺癌组血清miR-141-3p、IL-35、IL-10阳性检出率 miR-141-3p诊断前列腺癌阳性率91.46%(75/82)；IL-35诊断前列腺癌阳性率87.80%(72/82)；IL-10诊断前列腺癌阳性率85.36%(70/82)。见表2。

表2 前列腺癌组血清miR-141-3p、IL-35、IL-10阳性检出率(n)

2.3血清miR-141-3p、IL-35、IL-10定量联合前列腺癌与良性前列腺病变检测的诊断价值分析 从各个指标的检测结果分析，三者联合检测明显优于单个检测的诊断效率，三者联合检测前列腺癌的灵敏度为96.30%、特异度为95.30%，AUC为0.975。三者联合检测良性前列腺病变的灵敏度为41.40%、特异度为87.90%，AUC为0.620。见表3、4。见图1、2。

表3 血清miR-141-3p、IL-35、IL-10定量联合诊断前列腺癌诊断价值分析

图1 血清miR-141-3p、IL-35、IL-10定量联合检测前列腺癌ROC曲线

表4 血清miR-141-3p、IL-35、IL-10定量联合诊断良性前列腺病变诊断价值分析

图2 血清miR-141-3p、IL-35、IL-10定量联合检测良性前列腺病变ROC曲线

3 讨 论

前列腺癌是发生于前列腺上皮细胞的恶性肿瘤，主要以前列腺腺泡异常并且出现异常生长为特征的病理性改变[9-10]。前列腺癌的发病率随着男性年龄升高而增加，所以对于前列腺癌的早期诊断与筛查较为重要。近年来，前列腺癌的早期敏感血清学指标是临床上研究的重点[11-13]。

miRNA是近年来新发现的单链小分子RNA，往往在转录后对基因的表达进行调控。miRNAs能够与靶miRNA的3端非翻译区进行不完全的互补配对，以达到抑制基因表达，在细胞的生长发育、凋亡分化当中起到重要的作用[14]。miR-141属于miR-200的一种，是人类的12号染色体，在肿瘤组织内容易出现突变、染色体缺失以及易位等[15]。有研究表明，miR-141在前列腺癌组织内表达上升，同时在前列腺癌患者血清内也能够检查到[16]。miR-141-3p是miRNA-141剪切后生成的成熟产物，能够靶向表皮生长因子受体进而对游途径蛋白进而对骨肉瘤细胞的生长与转移进行抑制。本研究表明，与对照组比较，前列腺癌组和良性前列腺病变组血清miR-141-3p水平显著更高；与良性前列腺病变组比较，前列腺癌组血清miR-141-3p显著更高，差异有统计学意义(P<0.05)。说明，前列腺癌患者体内miR-141-3p水平会显著提高，而在良性前列腺病变当中也会有所提高。本研究结果表示，miR-141-3p诊断前列腺癌阳性率91.46%(75/82)。说明，miR-141-3p对于前列腺癌的诊断价值较高。miR-141-3p在前列腺癌中表达提高，对KLF9的表达进行抑制从而促进前列腺癌的增殖与分化[17]。IL-35是一新的趋化因子，已被证实在肺癌、胰腺癌和咽癌当中发挥着作用。IL-35是通过人体特殊的信号通路与T细胞表面的受体相结合，进而分泌新的免疫细胞。本研究结果表示，相比于对照组，前列腺癌组和良性前列腺病变组血清IL-35水平显著更高；相比于良性前列腺病变组，前列腺癌组血清IL-35显著更高，差异有统计学意义(P<0.05)。说明IL-35是能够作为筛查前列腺疾病的血清指标，尤其是前列腺癌最为敏感。本研究结果表示，IL-35诊断前列腺癌阳性率阳性率为87.80%(72/82)。因为IL-35是属于IL-12的一种，是由T淋巴细胞分泌而成，所以IL-35是能够被当做肿瘤免疫的首要因子[18]。IL-10是一种Th2类因子，是人类免疫反应中较为重要的炎症抑制细胞因子的一种，主要由单核巨噬细胞分泌，同时又主要作用于单核巨噬细胞[19]。本研究表示，与对照组比较，前列腺癌组和良性前列腺病变组血清IL-10水平显著更高；与良性前列腺病变组比较，前列腺癌组血清IL-10显著更高，差异有统计学意义(P<0.05)。有研究报道，恶性肿瘤能够促使患者自身合成并分泌免疫抑制因子，使Th1逐渐倾向于Th2型免疫，进而使IL-10剧烈升高[20]。本研究结果表示，IL-10对前列腺癌的检出率为85.36%(70/82)。说明IL-10对于前列腺癌的诊断价值较高。本研究结果表示，3个指标联合检测明显优于单个检测的检出率，3个指标联合检测前列腺癌的灵敏度、特异度，AUC线下面积均显著高于联合检测良性前列腺病变。说明，3种指标的联合检测适用于前列腺肿瘤的检测。

综上所述，血清miR-141-3p、IL-35、IL-10联合诊断前列腺癌的灵敏度、特异度均较高，适合临床上对于前列腺癌的早期诊断。