HPV E6/E7m RNA检测联合TCT检查在宫颈病变早期筛查中的应用价值

陈雪峰 王芝英 邓达 顾卉晴 韩琼波 林剑

宫颈癌是妇科疾病中比较常见的一种疾病,而且在女性生殖系统类的肿瘤疾病中,宫颈癌的发病率高居第一位。医学研究发现,宫颈癌主要是因为女性宫颈上皮内瘤变(CIN)演变而来的,在转为宫颈癌前,要经历一段可逆转的病变过程［1,2］。因此预防、治疗宫颈癌的核心,是争取在癌前病变、早期宫颈癌阶段及时检出,尽快采取相应医疗措施对病情进行干预。对宫颈癌进行筛查的目的是希望能够及时检出疾病,而机体中的E6/E7 基因的转录、翻译等都是高危型HPV感染所致上皮细胞恶性转化的必经之路,因此对E6/E7进行检测要比检测HPV 脱氧核糖核酸(DNA)更具有临床诊断价值与意义［3,4］。本次研究将以本院2018 年 5 月～2019 年6 月间收治的130 例宫颈病变患者为研究对象,旨在探究HPV E6/E7 mRNA 检测联合TCT 检查在宫颈病变早期筛查中的应用价值,现将研究结果整理如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2018 年5 月～2019 年6 月收治的130 例宫颈病变患者为研究对象,其中阴道镜下活检结果为宫颈炎患者35 例、CIN Ⅰ级17 例、CIN Ⅱ级 22 例、CIN Ⅲ级36 例、宫颈癌20 例；年龄27～56 岁,平均年龄(38.24±6.28)岁。纳入标准：①本次研究已获得医院伦理委员会批准,患者及其家属均签署医学研究同意书；②无精神方面障碍,可与外界正常沟通交流。排除标准：①中途退出研究者；②伴有肝肾功能衰竭者；③有HPV 感染史；④临床血常规检查结果存在异常者。

1.2 方法

1.2.1 采集患者标本 留取所有患者的TCT、HPV标本,取材前3 d 应当告知患者不要对阴道进行冲洗或者暂停使用阴道类药物。采集措施：①应用凯普宫颈细胞收集保存系统、RNA 酶宫颈细胞保存系统收集患者宫颈细胞的标本各1 份；②用阴道扩张器将受检者的宫颈口扩开,用无菌棉球收集宫颈分泌物；③用TCT 检测专用刷在宫颈鳞柱状上皮交界处进行顺时针旋转,约3～5 圈后,将前端放置在专用细胞保存液的试管中,室温保存等待检测。

1.2.2 筛查方法 主要是应用上膜式液基超薄细胞学与离心沉淀技术,对宫颈细胞进行细胞学检测,主要检测结果包括：①未见有上皮内病变细胞或者恶性肿瘤；②出现了不明意义的非典型鳞状细胞；③不排除上皮细胞高度病变的非典型鳞状细胞；④鳞状上皮内低度病变；⑤鳞状上皮内高度病变；⑥鳞状细胞癌。

1.2.3 HPV E6/E7 mRNA 检测 用聚合酶链式反应对HPV E6/E7 mRNA 水平进行检测,所应用技术为导流杂交基因芯片技术,在尚未明确TCT 结果的前提下,进行独立检测,共有15 种高危型HPV 病毒与7 种低危型HPV 病毒可进行检测。对待测标本进行离心操作,加入裂解液、蛋白酶K 等物质,在恒温环境下保存1.5 h,取出标本对其进行振荡操作,然后在96 孔的检测板上设置出2 孔空白对照,2 孔阳性质控,用两种不同的捕获针对mRNA 进行捕获,用3 级信号放大,加入底物及对应的催生物,让病毒mRNA 进行杂交,从而生成支链的DNA 复合物,判断阳性率。

1.3 观察指标 以阴道镜下活检结果为金标准,观察并记录所有患者分别使用HPV E6/E7 mRNA 检测与TCT 检查的宫颈病变情况。对比HPV E6/E7 mRNA 检测、TCT 检查、HPV E6/E7 mRNA 检测与TCT 检查联合检测三种检测方式的灵敏度与特异度。

1.4 统计学方法 采用SPSS21.0 统计学软件处理数据。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV E6/E7 mRNA 检测与TCT 检查的宫颈病变情况 HPV E6/E7 mRNA 检测与TCT 检查宫颈病变阳性检出率随病程增加而增加。HPV E6/E7 mRNA 检测与TCT 检查的宫颈癌阳性检出率均高于宫颈炎、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级的阳性检出率,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 HPV E6/E7 mRNA 检测与TCT 检查的 宫颈病变情况［n(%)］

2.2 三种检测方式的灵敏度与特异度对比 HPV E6/E7 mRNA 检测与TCT 检查联合检测的灵敏度、特异度均高于HPV E6/E7 mRNA 检测和TCT 检查,差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 三种检测方式的灵敏度与特异度对比(%)

3 讨论

在已知恶性肿瘤中,宫颈癌是唯一被明确了病因的癌症,医学研究发现HPV 病毒感染就是诱发宫颈癌的主要因素,高危型的HPV 病毒诱发宫颈癌的几率可达90%左右,因此检测HPV 成为了预防、治疗宫颈癌的主要措施［5,6］。

HPV 属于一种多孔病毒,被HPV 病毒感染后,机体细胞将出现DNA 损伤应答,在已知的百余种HPV 病毒中,约有30%是致癌型。HPV E6/E7 mRNA 是小双链HPV 基因组,它与宫颈癌的发生、病理过程等都有十分紧密的联系,可以说E6/E7 是其中关键的致癌基因,当E6 与基因P53 结合之后,将出现明显的抑制作用,它将阻止机体细胞的正常凋亡,促进癌症肿瘤细胞的异常扩散与繁殖,加大机体患癌的几率；而E7 同样可以对抑癌基因pRb 起到相应的抑制作用,肿瘤细胞将因此实现异常增殖。在海外学者的研究中,认为E6、E7 基因致癌蛋白表达上调与患者宫颈上皮癌变有着十分密切的相关性,甚至被认为是诱发女性宫颈细胞出现恶性变化的重要原因［6,7］。其实在HPV 病毒的感染早期,E6/E7 mRNA 还是只处于低表达或无表达的状态,导致E6/E7 基因出现高表达的因素主要是因为持续性的HPV 感染,长时间的感染会激活E6/E7 mRNA 的转录与翻译,最终导致癌蛋白的形成,使得细胞发生癌性转化；TCT 检查在妇科中比较常见,它是对女性宫颈细胞进行细胞学诊断,是目前临床上应用较为广泛的先进性检查技术,与宫颈巴氏涂片检查技术相比,具有操作方便简单、检出率较高以及受检者依从性较强等优势。在收集好患者的细胞标本后,还需对标本进行漂洗,这样最终的标本获得率更高,组织中的残迹将明显减少,癌变细胞更能够被检测出来。

医学认为,从一位女性出现临床症状到确诊为宫颈癌,至少还会经历三个阶段的宫颈病变,即CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级。不过,虽然宫颈癌前病变在女性群体中比较常见,但是它并不能被认定为宫颈癌,宫颈癌的发展具有明显的渐变性,有些患者的发病时间可以是几年,而有些则可以是几十年,在病情不断发展的过程中,它仍旧是可以逆转的,换言之病变有可能会消 失［8,9］。

在本次研究中,发现HPV E6/E7 mRNA 检测、TCT 检查宫颈病变的阳性表达率随着病程增加而增加,再次说明HPV E6/E7 mRNA 的变化与患者宫颈的病情发展有着较为紧密的联系,国内有学者认为女性宫颈癌的早期病变筛查如果应用了HPV E6/E7 mRNA 检测与TCT 检查联合检测后,其灵敏度与特异度比较高,可以为临床诊断提供重要的医学依据；本次研究结果还显示,HPV E6/E7 mRNA 检测的灵敏度要略低于TCT 检查,而特异度则略高于TCT 检查,两种检测方式联合检测后,将起到协同作用,可以弥补彼此的不足,提高灵敏度与特异度。在筛查宫颈癌中,不管是细胞形态学的低敏感性,抑或是HPV DNA 检测仍旧有需要提升的空间,尤其是对于年轻的女性群体,建议还是选择联合检测法,国外也有关于更推荐HPV E6/E7 mRNA 检测与TCT 检查联合检测的医学研究报告,说明至少在目前的妇科疾病的临床检测中,联合检测确实得到了普遍的认可［10］。

综上所述,随着女性宫颈疾病病程的不断增加,HPV E6/E7 mRNA 检测、TCT 检查的阳性检出率也将逐渐增加,而且HPV E6/E7 mRNA 检测与TCT 检查的联合检测在宫颈病变的早期筛查中具有更高的灵敏度和特异度,因此建议受检者选择联合检测对病变情况进行诊断,应在妇科检查中进行应用与推广。