血清IFN-α、aCL和抗β2-GPⅠ抗体与系统性红斑狼疮患者血小板减少的相关性*

陈华良 廖永强 任妹 朱静茹

(萍乡市人民医院 1.检验科;2.风湿免疫科，江西 萍乡 337000)

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)在临床上的病因尚不明确，是一种慢性全身性自身免疫性疾病。患者以血清产生多种具有免疫活性的自身抗体为特征，促使免疫系统攻击自身组织，造成全身多脏器和组织受损[1-3]。其中，血小板减少是SLE患者的常见表现，且是评估SLE患者疾病活动性的重要指标之一，但SLE患者血小板减少原因尚不清楚。抗β2糖蛋白Ⅰ(β2-GPI)抗体和抗心磷脂抗体(aCL)作为抗磷脂抗体综合征的诊断指标，能促进血小板聚集增加患者血栓形成风险[4]。研究还发现，抗磷脂综合征患者接受干扰素α(IFN-α)治疗后，血清抗磷脂抗体滴度明显减低[5]。在SLE患者体内，IFN-α与抗磷脂抗体及与血小板减少的关系是否相关尚不清楚。本研究探讨血清IFN-α、aCL和β2-GPI抗体与SLE患者血小板减少的相关性,现将结果报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2018年1月～2019年12月我院门诊及住院诊治的SLE患者65例，均为女性，年龄14～75岁，平均(42.4±28.6)岁，所有患者均符合美国类风湿病学会2009年修订的SLE诊断标准[6]，活动性判定以SLEDAI-2000为标准[7]。其中血小板减少SLE患者20例(PLT<100×109/L,A组)，平均年龄(35.8±19.7)岁，无血小板减少组45例(101×109/L～370×109/L，B组)，平均年龄(40.2±21.5)岁。选取同期16例排除免疫因素引起的脾功能亢进(hypersplenism,HS)患者为疾病对照组(C组)，平均年龄(38.2±14.5)岁，所有入组病例均符合相应的疾病诊断标准。另选取同期我院体检中心的健康体检者60人(D组)，均为女性，平均年龄(40.9±16.7)岁。纳入标准：①认知能力正常，可配合研究。②造血、凝血等血液系统功能正常。③各项生命体征处于稳定状态。④对本次研究知情同意。排除标准：①妊娠及哺乳期女性。②合并恶性肿瘤。③患有精神类疾病。④参与同期其他医疗研究。本研究经医院医学伦理学委员会批准，且属自愿参与，四组性别、年龄组间差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法 抗aCL(IgG/IgM/总抗体)、抗β2-GPⅠ(IgG/IgM/总抗体)和抗双链DNA抗体检测采用酶联免疫吸附法(ELISA)，试剂盒购自欧蒙医学实验诊断股份公司。血清样本以201∶1稀释，样本、标准品及阴阳质控100 μL加入至抗β2-GPⅠ的杯孔中，设置孵育温度为18～25℃；30 min后，洗涤拍干(重复3次)，加入酶结合物，再次以18～25 ℃的温度孵育30 min；洗涤拍干(重复3次)，加入100 μL基质液，在18～25 ℃温度下孵育15 min；100 μL终止液终止反应。抗β2-GPⅠ抗体标准品浓度为2、20、200 RU/mL，≥20 RU/mL为阳性；抗aCL抗体标准品浓度为2、12、120 PLU/mL，≥12 PLU/mL为阳性。酶标仪为Bio-Rad Model 680，450 nm为主波长,620 nm为次波长。IFN-α检测ELISA，试剂购自R&D Systems China；CRP、补体C3和C4检测采用免疫比浊法，试剂购自自贝克曼库尔特(中国)公司，所有操作均严格按照试剂盒说明书进行。收集患者及健康对照的一般资料(性别、年龄)及实验室检查，实验室指标主要为血常规及骨髓穿刺活检结果。

2 结果

2.1 SLE患者的一般资料及临床特征 SLE患者平均病程为(14.8±9.6)月,主要临床症状为面部红斑、对光敏感、关节痛及免疫功能紊乱,A组临床症状比B组更为严重(P<0.05)，见表1。

表1 SLE患者一般资料及临床特征[n(×10-2)]Table 1 General information and clinical features of SLE patients

2.2 四组患者血清IFN-α水平、aCL和抗β2-GPI抗体滴度检测结果分析 A组患者血清IFN-α水平、抗aCL抗体(IgG/IgM/总抗)和抗β2-GPI抗体(IgG/IgM/总抗)滴度均显著高于其余三组(均P<0.01)；B组患者血清IFN-α水平、抗aCL抗体(IgG/IgM/总抗)和抗β2-GPI抗体(IgG/IgM/总抗)滴度均显著高于C组和D组(均P<0.01)，见表2。

表2 各组患者血清IFN-α、抗aCL抗体和抗β2-GPI抗体检测结果Table 2 Detection results of serum IFN-α anti-ACL and anti-β2-gpI antibody in each group

2.3 A组与B组患者疾病活动性指标比较 A组抗dsDNA抗体滴度、CRP浓度和SLEDAI显著高于B组(均P<0.01)，补体C3和C4显著低于B组(均P<0.01),见表3。

表3 血小板减少组与无血小板减少组疾病活动性指标比较Table 3 Comparative analysis of disease activity indexes between thrombocytopenia and normal SLE patients

2.4 SLE患者血清IFN-α水平与aCL和抗β2-GPⅠ总抗体滴度及它们分别与血小板的相关性 对SLE患者血清IFN-α水平与aCL和抗β2-GPⅠ总抗体滴度及它们分别与血小板的相关性分析发现，血清IFN-α水平与aCL和抗β2-GPⅠ总抗体滴度呈正相关(均P<0.01)(图1A、图1B)。IFN-α水平、aCL和抗β2-GPⅠ总抗体滴度均与血小板呈显著负相关(均P<0.01)，见图1C、图1D、图1F。

图1 SLE患者血清IFN-α水平与aCL和抗β2-GPⅠ总抗体滴度及它们分别与血小板的相关性分析Figure 1 Correlation analysis among serum IFN-α level and total antibody titer of ACL and anti-β2-gpⅠ and platelet in SLE patients

3 讨论

SLE是自身免疫介导的、以产生多种自身抗体为特点的多器官受累的弥漫性结缔组织病，易继发抗磷脂综合征，抗磷脂综合征的首发症状常为血小板减少，且为血液系统损伤最常见表现，发生率约为7%～40%[8]，严重可形成下肢静脉血栓、动脉血栓、诱发脑血管意外，威胁患者生命[9-10]。SLE患者并发血小板减少的机制尚不清楚，自身抗体介导的免疫损伤是引起血小板减少的主要原因[11]。aCL是一种以血小板和内皮细胞膜上带负电荷的心磷脂作为靶抗原的自身抗体，aCL持续阳性的SLE患者更易形成血栓，这与aCL可促进血小板聚集有关[12]。β2-GPI是一种能与活化的血小板或者凋亡小体表面磷脂类物质、脱氧核糖核酸(DNA)、带负电荷分子如肝素、极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)等结合的粘附蛋白。研究表明，β2-GPI及其抗体能促进血小板聚集，参与血栓的发生发展过程[13]。在SLE患者并发抗磷脂抗体综合征患者中，抗β2-GPI抗体检出率极高，且抗体滴度居高不下，是发生心血管事件的独立危险因素[14]。本文检测各组的aCL和抗β2-GPI抗体及疾病活动性指标，发现血小板减少组aCL(IgG/IgM/总抗)和抗β2-GPI抗体(IgG/IgM/总抗)滴度显著高于血小板正常组、脾功能亢进组和健康对照组，这与上述报道一致。我们分析还发现，血小板减少组SLE患者疾病活动性评分和CRP显著高于血小板正常组，而补体C3和C4显著低于血小板正常组，本课题组前期研究发现，SLE患者高滴度抗磷脂抗体与低补体相关[3]，Ergeta Ktona等[15]研究发现，血小板减少及疾病活动度指标是预测SLE患者疾病进展的指标，说明aCL、抗β2-GPI抗体、C3、C4，CRP和血小板一起参与疾病的发生发展。

SLE患者抗磷脂抗体(aPL)的存在如何导致临床表现的机制尚不完全清楚，但是内皮细胞的改变，aPL免疫复合物的形成、血小板活化和所有的补充系统激活导致促凝血状态是临床常见表现[16-17]。本文对所有SLE患者临床特征分析发现，血小板减少组关节痛、红斑和肾功能损伤的发生率显著高于血小板正常组，且aPL滴度也显著升高，与上述研究结果一致。自身抗体和核酸抗原形成免疫复合物通过Toll样受体(TLR-7)刺激浆细胞样树突状细胞(pDCs)产生IFN-α[18-19]，IFN-α作用于内皮细胞导致内皮功能障碍参与早期动脉粥样硬化的形成[20]。有研究发现，IFN-α也能活化抗原提呈细胞，促进aPL等自身抗体的产生和增加细胞凋亡[21]。本文研究发现，血小板减少组SLE患者血清IFN-α水平显著高于血小板正常组，且IFN-α水平与aCL和抗β2-GPI抗体总滴度均呈正相关，这与上述报道一致。我们还发现，SLE患者血清IFN-α水平、aCL和抗β2-GPI抗体总滴度均与血小板呈负相关，说明在SLE患者体内，IFN-α或许可通过TLR-7或9信号通路调节aCL和抗β2-GPI抗体表达，一同参与血栓的发生发展。

4 结论

SLE患者血清IFN-α水平与aCL和抗β2-GPI抗体总滴度均呈正相关，而IFN-α水平、aCL和抗β2-GPI抗体总滴度均与血小板呈负相关。说明IFN-α或许可以通过某种信号通路调控aCL和抗β2-GPI抗体的产生，与血小板一起参与SLE患者疾病的进展。本研究仅为实验室检测数据分析，具体的调控机制还需进一步深入研究。