2016―2019年临沧市猪伪狂犬病病毒gE抗体流行病学调查

周玉照，张小苗*，陈云明，蔡高萍，李亚琴，谭东，杨静竹

(1.大理农林职业技术学院，云南 大理 671003； 2. 临沧市动物疫病预防控制中心，云南 临沧 677000)

猪伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的一种急性传染病，临床上主要表现为妊娠母猪流产、产死胎、木乃伊胎及弱仔，新生仔猪出现明显的神经症状以及腹泻死亡，育肥猪突然发热和呼吸困难等症状，是危害养猪业最严重的传染病之一[1]。自2011年以来，我国不同地区猪场相继出现接种 PRV 基因缺失弱毒疫苗后仍发生PR的现象，因此，加强PR的监测及防控对促进和保障养猪业的健康发展有重要意义[2]。苏琳琳[3]等对云南省部分地区规模猪场猪伪狂犬病进行流行病学调查，其结果显示PRV gE 抗体阳性率为 13.5%；昆明市PRV gE 抗体阳性率为16.6%；曲靖市PRV gE抗体阳性率为8.2%；德宏州PRV gE抗体阳性率为20.3%；玉溪市PRV gE抗体阳性率为20.7%；红河州PRV gE抗体阳性率为7.8%；楚雄市PRV gE抗体阳性率为21.8%；大理市的PRV gE 抗体阳性率为6.0%；宣威市PRV gE抗体阳性率为13.5%；西双版纳州PRV gE抗体阳性率为7.5%。说明云南省存在猪伪狂犬病病毒感染，但临沧市近几年没有猪伪狂犬病病毒感染情况的报道。本试验从临沧市8个县(区)采集了猪的血清样品，进行PRV gE抗体检测，从而了解临沧市近4年猪伪狂犬病病毒感染情况，为临沧市猪伪狂犬病的防控提供依据。

1 材料与方法

1.1 血清样品

2016—2019年从临沧市临翔区、凤庆县、云县、永德县、双江县、沧源县、耿马县、镇康县1 468个猪场中共采集免疫过PRV gE缺失疫苗的6 672份血清样品，血清样品置-20 ℃冰箱保存备用。见表1。

1.2 主要试剂与仪器

猪伪狂犬病病毒gE糖蛋白阻断ELISA抗体检测试剂盒，购自北京天之泰生物科技有限公司； 酶标仪 (型号为ELx800)，购自美国伯腾仪器有限公司；低速离心机(型号为 LD4-2A)，购自北京医用离心机厂；电子恒温水浴锅(型号为 HHW21.600)，购自北京市永光明医疗仪器有限公司。

1.3 方法

按照试剂盒说明书进行操作，最后于450nm处测定各孔的 OD 值。

1.4 结果判定

试验成立的条件是阴性对照孔OD450 nm算术平均值与阳性对照孔OD450 nm算术平均值差异应大于0.6；且阳性对照孔的抑制百分数(IN%)应大于60。

判定标准:如果样品孔的IN%<40.0，则判为阴性；如果40.0 ≤ IN% ≤ 45.0，则判为可疑；如果IN%>45.0，则判为阳性。

表1 2016—2019年临沧市猪血清样品采集情况

2 结果与分析

2.1 临沧市规模猪场PRV gE抗体检测结果

2016年从临翔区、凤庆县、云县、永德县、耿马县8个规模猪场采集了160份血清样品进行PRV gE抗体检测，结果全为阴性。2017年从临翔区、凤庆县、云县、永德县、耿马县8个规模猪场采集了70份血清样品进行PRV gE抗体检测，结果全为阴性。2018年从临翔区、双江县、沧源县、镇康县14个规模猪场采集了270份血清样品进行PRV gE抗体检测，结果检出6份阳性样品，其阳性率为2.22%。2019年从临翔区、凤庆县、云县、永德县、沧源县8个规模猪场采集了114份血清样品进行PRV gE抗体检测，结果全为阴性。2016—2019年临沧市规模猪场PRV gE抗体总阳性率分别为0、0、2.22%、0。其中只有2018年双江县和镇康县检测出PRV gE抗体阳性，阳性率分别为5.00%、1.00%。从检测结果看，2018年临沧市规模猪场存在PRV的感染，特别是双江县和镇康县。见表2。

表2 2016—2019年临沧市规模猪场PRV gE抗体检测结果

2.2 临沧市散养户猪场PRV gE抗体检测结果

2016年从临沧市8县(区)的455个散养户猪场采集了1735份血清样品进行PRV gE抗体检测，结果沧源县、耿马县、镇康县抗体阳性率分别为0.23%、0.67%、1.00%，其他县均为阴性。2017年从临沧市8县(区)的382个散养户猪场采集了1528份血清样品进行PRV gE抗体检测，结果耿马县、镇康县抗体阳性率分别为8.42%和0.18%，其他县均为阴性。2018年从临沧市8县(区)的423个散养户猪场采集了1709份血清样品进行PRV gE抗体检测，结果临翔区、凤庆县、永德县、沧源县、耿马县、镇康县抗体阳性率分别为8.57%、5.49%、3.33%、1.27%、0.60%、3.30%，云县和双江县均为阴性。2019年从临沧市8县(区)的369个散养户猪场采集了1122份血清样品进行PRV gE抗体检测，结果凤庆县、永德县抗体阳性率分别为11.67%、3.89%，其他县均为阴性。2016—2019年临沧市散养户猪场8个县(区)PRV gE抗体总阳性率分别为4.35%、6.86%、0、2.86%、0、0.39%、1.68%、1.21%，其中以凤庆县PRV gE抗体阳性率最高，而云县和双江县PRV gE抗体阳性率均为0(图1)。2016—2019年临沧市散养户猪场各年度PRV gE抗体总阳性率分别为0.58%、1.11%、2.87%、2.50%，其中以2018年PRV gE抗体阳性率最高。从结果可以看出临沧市存在PRV的感染，而且每个县的散养户感染差异较大。见表3。

表3 2016—2019年临沧市散养户猪场PRV gE抗体检测结果

图1 2016-2019年临沧市8个县(区)散养户猪场PRV gE抗体总阳性率

3 讨论与结论

PRV的感染给我国的生猪养殖生产造成了严重的经济损失。近年来，使用基因缺失疫苗进行免疫，有效地控制了该病的暴发，但不能够控制该病的零星发生[4]。2011—2015 年我国PR的流行有持续上升的趋势，样品阳性率由 13.6%上升至41.3%，猪场阳性率由41.7%上升至78.1%[5]；杨孟鸿对赣州地区规模化猪场猪伪狂犬病血清学流行病学调查，结果在 2014—2015 年PRV野毒感染率为 27.5%；在 2015—2016 年PRV野毒感染率为 64.8%[6]；何淑芝[7]等对广东省规模化猪场伪狂犬病抗体检测分析，结果显示PRV gE 抗体阳性率为4.65%；何文峰对江苏省猪伪狂犬病野毒感染的抗体调查，结果显示PRV gE 抗体阳性率为37.8%[8]；张利平对河南省部分种猪场猪伪狂犬病血清学调查，结果显示PRV gE 抗体总阳性率为 12.24%[9]；胡玲玲对贵州省猪伪狂犬病的分子流行病学调查及变异分析，结果显示PRV gE 抗体阳性率为1.89%[10]；2019年李圣元对福建省龙岩市部分地区猪伪狂犬病野毒感染血清学调查，结果显示样品PRV gE 抗体总阳性率为 30.41%[11]；宁慧波[12]等对我国规模化猪场伪狂犬病毒感染及传播风险因素调查，结果显示华北、华东、华中地区的猪场阳性率、样品阳性率相对较高；华南及西南地区的阳性率相对较低。

本试验通过对2016—2019年临沧市猪伪狂犬病病毒gE抗体进行检测，结果表明，临沧市存在猪伪狂犬病野毒的感染，2018年临沧市规模猪场存在PRV的感染，2019年PRV gE 抗体全为阴性；2016—2019年临沧市散养户猪场每年都存在猪伪狂犬病野毒的感染。

研究表明，猪伪狂犬病毒新分离毒株存在变异现象且变异株的致病性有所增强，现有的 PRV基因缺失疫苗难以对新的流行毒株提供安全有效的保护，导致无法有效阻止 PRV 在猪群之间乃至地区之间的传播循环，这很有可能是伪狂犬病野毒感染率居高不下的一个重要原因[13]。目前，加强猪场生物安全措施以及科学使用疫苗免疫接种仍是防控PR的主要方法。所以猪场应当选择场内流行或者区域内流行的毒株作为 PRV 疫苗株，制定科学合理的免疫程序，定期开展 PRV gB 和PRV gE 抗体监测及风险评估，得到原始的基础数据资料，准确分析猪场的免疫现状，科学制定免疫方案，把控好每一个免疫环节，选择质量优质的疫苗，提升中和抗体水平，提高免疫效果[14]。同时定期开展血清抗体监测，制定合理的免疫程序，及时淘汰PRV gE抗体阳性猪，确保疫苗的免疫保护效果，最终达到净化目的[15]。临沧市存在猪伪狂犬病野毒的感染，特别是散养户猪场每年都存在猪伪狂犬病野毒的感染，应加强对散养户的疫苗免疫，及时淘汰PRV gE抗体阳性猪。