HPLC法测定中蒙药哈日阿嘎如中栀子苷含量

张艳茹，菅艳艳，宝山，巴乙拉

（1包头市食品药品检验检测中心，内蒙古 包头；2内蒙古国际蒙医医院，内蒙古 呼和浩特）

0 引言

哈日阿嘎如由35味药组成，其中含有进口沉香、豆蔻、旋复花、木棉花、没药、肋柱花、牦牛心、马钱子(制)味等。具有调“赫依”热“粘”交争。哈日阿嘎如在临床中多用于治疗“山川间热”“赫依”、热兼盛，胸满气短，干咳少痰，游走刺痛，心悸失眠，谵妄等。哈日阿嘎如中的主要药物之一是栀子，其含有环烯醚萜类、三萜类、黄酮类化合物、多糖类等化合物[1-3]。而栀子的主要成分为栀子苷[4,5]，本文以栀子苷作为测定指标，建立了HPLC法测定栀子中栀子苷的含量，结果表明HPLC法的操作简洁、灵活度较高，而且专属性强，处方中其他成分均未对栀子苷的测定造成相关的干扰[6]。

1 仪器与材料

1.1 主要仪器

U3000型高效液相色谱仪；隔膜真空泵(巩义市英峪仪器厂)；KQ-250DB型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Heal Force NW15UV型超纯水系统；ADVENTURERTM型 电 子 天 平（万 分 之 一）；Ohaus Discovery型电子天平（十万分之一）；FW400A型多功能粉碎机（材茂科技有限公司）。

1.2 试剂材料

栀子苷对照品（批号：110749-201919），由中国食品药品检定研究院提供；供试品三批（批号：202011、202012、202013），由内蒙古国际蒙医医院提供，自制样品一批由包头市食品药品检验检测中心制；甲醇、乙腈为色谱纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Alltima C18柱(250mm×4. 6 mm，5μm)；流动相的选择：乙腈-水溶液(15:85)；柱温：33℃；流速1.0ml/min；检测波长：238nm；理论塔板数：按栀子苷计不得低于1500。

2.2 配制对照品溶液

取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含46.5μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 配制供试品溶液

准确称量约1.0g的供试品粉末，置具塞锥形瓶中，准确添加25ml的甲醇，称量，超声处理30min（功率250kW，频率40kHz），冷却后，再次称量，对于已经损失的重量使用甲醇进行补足处理，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

2.4 配制阴性对照溶液

以不含栀子的阴性供试品按处方配比制备阴性对照液。

2.5 提取方法的选择及提取时间的考察

参考文献[7]“栀子”项下，以甲醇作为提取溶剂进行超声处理（功率90Hz），试验中考察了不同提取时间（超声10min、20min、30min、40min等）对提取效率的影响，结果见表1。

表1 栀子苷提取时间考察

从表中数据可见，超声处理30min时，在供试品中提取栀子苷的含量最高，故将提取时间定为30min。

2.6 专属性

准确称量阴性对照，供试品和对照品溶液各10μl，将其注入色谱仪并记录色谱图。

在同一保留时间8.0min处，在相同的保留时间内，供试品在栀子苷色谱图中具有相同的栀子苷吸收峰，阴性对照在栀子苷相同保留时间内无吸收峰，提示，该方法具有较好的特异性、专属性。

2.7 线性关系考察

取栀子苷对照品约7.3mg，精密称定，置100ml量瓶中，加纯甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀(栀子苷实际浓度为0.0734mg/ml)，然后吸取上述溶液1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、12μl、15μl、20μl分别进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对栀子苷的进样量进行回归分析，结果栀子苷在进样体积在1-20μl范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y=0.135223X-0.07817，r2=0.9996。

2.8 稳定性试验

一份相同的供试品溶液分别在0h、2h、4h、5h、6h、7h、8h进样测定，结果见表2。

表2 不同时间测定供试品中栀子苷的峰面积积分值

从表中数据可见，栀子苷在8h内的峰面积积分值基本稳定不变。

2.9 精密度试验

取同一份供试品0.10036g，连续进样6次，测定栀子苷峰面积积分值，测定供试品含量，RSD为1.08%，液相色谱仪精密度良好。

2.10 重复性试验

按含量测定项下的方法，用同一批样品配制供试品溶液6份，测得了峰面积积分值，并计算了含量。平均含量为0.9985mg/g，RSD为1.80%。表明该方法重复性良好。

2.11 加样回收试验

取供试品6份，均约0.5g，精密称定，6份样品中分别加入10 ml用甲醇配制的栀子苷对照溶液(栀子苷浓度：0.0465mg/ml)，测定各样品的含量，按含量测定法计算回收率。结果表明，平均加样回收率为95.34%(n=6),RSD为1.95%，本方法准确度较好。

2.12 样品含量测定

取样品以及自制品各约1.0g，精密称定配制成供试品溶液，注入10μl，记录色谱图，以外标法计算栀子苷含量。数据显示，三批样品的含量1.62mg/g与自制样品栀子苷含量1.00mg/g，这说明栀子药材的质量，对成品中栀子苷的含量影响较大。

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取栀子苷对照品溶液在200-600nm波长处进行光谱扫描，结果表明，栀子苷在238nm波长处吸收最大，与文献[7]“栀子”项下有关规定一致,故选择238nm作为检测波长。

3.2 含量限度的测定

三批供试品中栀子苷的含量最低为1.55mg/g，自制样品中栀子苷的平均含量为1.00mg/g，实验中用相同方法对生产用相同栀子药材进行了含量测定，测得栀子苷的含量为30.13mg/g（3.013%）。根据本品处方量折算，理论上每1g供试品含栀子药材20/704=0.0284g，本品栀子苷的含量=0.0284g/g×1000×3.013%=0.856mg/g。再根据文献[7]“栀子药材的栀子苷的含量限度不得少于1.8%”，还考虑不同产地木香药材质量差异，下浮20%[8-10]，木香烃内酯含量低限=0.0284g×1000×1.8%×80%=0.409mg/g。结合实际测定结果最低含量为1.55mg/g，综合评判，确定本品以木香烃内酯计不得少于0.50mg。