活动期肺结核患者血清淀粉样蛋白4、凝溶胶蛋白检测及临床意义

庞 晖，王 丽，李 娜，孙宏磊

(陕西中医药大学附属医院检验科，陕西 咸阳712000)

肺结核是经呼吸道传播的慢性传染性疾病，曾被称为“白色瘟疫”。今年来，随着居住环境的破坏，结核病发病率居高不下，仍是危害人类健康的公共卫生和社会问题。2017年，我国得到确诊结核病患者达88.9万名。世界卫生组织指出，虽然全球在预防减少肺结核病发生方面取得重大进展，但仍有部分患者未得到有效诊断，最终导致的疾病快速传播[1]。由此可见，提高肺结核临床诊断效率，对于实现肺结核控制的全球性战略目标，降低其发病率至关重要。痰涂片操作快速简单，检测价格低廉，是肺结核临床诊断的传统方法，但越来越多的研究证实，其对患者体内病原菌数量有一定要求，特异性和敏感性均较差，容易出现漏诊[2]。T细胞斑点试验(T cell spot test，T-STOP.TB)虽相对灵敏度较高，但价格昂贵，限制了其临床推广应用。近年来，血清蛋白组技术的快速发展为各类复杂性疾病的诊断提供了许多新的契机。血清淀粉样蛋白4(Serum amyloid A4，SAA4)是肝脏组织内产生的急性期相蛋白，在机体遭受感染或发生炎症时，其表达水平可升高千倍，故可用于多种疾病的临床诊断中。以往有研究显示，肺损伤患者体内SAA4水平明显升高[3]。凝溶胶蛋白(Gelsolin)是机体内重要肌动蛋白结合蛋白，具有在控制肌动蛋白结构、细胞程序性死亡等方面发挥重要作用。以往重症肺炎预后诊断中的研究证实，重症肺炎死亡患者体内Gelsolin水平相较于存活者显著下降[4]。提示，Gelsolin可作为肺部疾病诊断的潜在血清标志物。本研究对SAA4和Gelsolin两种潜在血清标志物在肺结核患者中表达水平及临床意义进行了测定分析。现将分析结果总结如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2018年5月至2020年5月本院收治的结核病患者89例为研究对象。病例纳入标准：①符合《肺结核诊断标准(WS 288-2017)》[5]和《结核病分类》[6]中相关标准；②年龄≥18岁；③汉族；④初次诊断。排除标准：①入院前使用过抗生素、激素和免疫制剂治疗；②合并肺炎、矽肺、恶性肿瘤等非肺结核性肺部病变；③合并糖尿病或其他免疫性疾病；④严重肝肾功能障碍。选择同期进行健康体检者50例为对照组。研究组男52例，女47例；年龄26～65岁，平均(45.49±10.68)岁。对照组男30例，女20例；年龄28～63岁，平均(45.66±10.61)岁。两组性别、年龄等一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 血清指标测定:两组受试者在入组后次日清晨空腹状态下，采集其时静脉血液5 ml，离心，分离血清，-80 ℃保存。免疫透射比浊法测定血清C反应蛋白(C reactive protein，CRP，试剂盒由合肥莱尔生物科技有限公司提供)；酶联免疫吸附测定红细胞沉降率(Erythrocyte sedimentation rate，ESR，试剂盒由武汉博士康生物工程有限公司提供)；双抗夹心法测定两组受试者血清SAA4水平(试剂盒由武汉博士康生物工程有限公司)；酶联免疫吸附法测定血清Gelsolin水平(试剂盒由江苏江莱生物技术有限公司提供)；仪器选择Siemens-ADVIA 2400型全自动生化分析仪。

1.2.2 分析方法:①依据研究组患者是否并发肺外结核、是否合并糖尿病，将入选者分为单纯肺结核、合并肺外结核[7]和合并糖尿病者[8]，对比分析不同病症患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平变化趋势；②依据患者入院时病情严重程度将研究组入选者分为轻症(52例，结核病灶呈点状或索条状，未形成空洞，病灶≤2个肺野)和重症(37例，结核病灶片状，存在坏死、空洞等病变，病灶≥3个肺野)[9]，对比分析不同病情患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平。

2 结 果

2.1 两组血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比较 见表1。与对照组比较，研究组患者血清CRP、ESR、SAA4水平明显升高，Gelsolin水平明显下降(均P<0.05)。

表1 两组血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比较

2.2 不同病症肺结核患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比较 见表2。单纯肺结核、合并肺外结核和合并糖尿病患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin间差异存在统计学意义(均P<0.01)，研究组合并肺外结核和合并糖尿病患者血清CRP、ESR、SAA4水平明显高于单纯肺结核患者，Gelsolin水平明显低于单纯肺结核患者(均P<0.05)；但合并肺外结核、合并糖尿病患者血清各指标间差异无统计学意义(均P>0.05)。

表2 不同病症肺结核患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比较

2.3 不同病情肺结核患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比较 见表3。肺结核重症患者血清CRP、ESR、SAA4水平明显高于轻症患者，Gelsolin水平明显低于轻症患者(均P<0.05)。

表3 不同病情肺结核患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比较

2.4 血清SAA4、Gelsolin水平与CRP、ESR相关性 见表4。Pearson相关系数分析显示，肺结核患者血清SAA4与血清CRP、ESR水平显著正相关，Gelsolin则与之显著负相关(均P<0.01)。

表4 血清SAA4、Gelsolin水平与CRP、ESR相关性

2.5 血清SAA4和Gelsolin水平诊断肺结核的效能分析 见表5。ROC曲线分析显示，血清SAA4和Gelsolin诊断肺结核的AUC均大于血清CRP和ESR，而SAA4与Gelsolin联合诊断的效能明显高于单一指标。

表5 血清SAA4和Gelsolin水平诊断肺结核的效能分析

3 讨 论

肺结核是结核分枝杆菌感染所致的呼吸系统传染性疾病，活动期传染性最强。因此，及时发现并治疗对于控制疾病传播具有重要临床意义。传统的依靠痰培养诊断肺结核的周期较长，通常需要2～8周，诊断时效性较差。结核分枝杆菌侵入人体呼吸系统，刺激宿主细胞发生复杂性生化反应，影响机体内稳态和对病原菌的清除功效。越来越多研究证实，在感染性疾病诊断中可依靠宿主体内细胞因子表达水平变化进行判断[10-11]。

CRP是肝脏组织释放的急性时相蛋白，机体受炎症刺激4～6 h后其表达水平显著升高，是临床诊断感染性疾病的常用生化指标。ESR是指红细胞在静止状态下的下沉速率。正常情况下，红细胞膜表面因负电荷存在而分散悬浮下降；但在机体发生感染或其他器质性变化时，红细胞表面带电情况发生变化，导致细胞间排斥作用减弱，ESR增大。以往报道显示，活动期肺结核患者体内CRP和ESR水平显著升高[12]；但ROC曲线分析发现，两者用于肺结核诊断的特异性较差[13]。SAA4是属于载脂蛋白家族内的急性时相蛋白，可与机体内高密度脂蛋白结合，促进淀粉样纤维原形成，促进细胞粘附。与CRP一样，SAA4亦是临床常用的早期感染性炎症反应水平监测的敏感性指标。黄琪淋等研究显示，涂阴肺结核患者体内SAA4显著高表达[14]，与本研究活动期肺结核患者测定结果相一致。表明，结核分枝杆菌感染可刺激机体内急性时相蛋白SAA4高表达。进一步分析显示，合并肺外结核和合并糖尿病的肺结核患者血清SAA4水平明显高于单纯肺结核，重症肺结核患者血清水平显著高于轻症患者。表明，并发肺外结核和糖尿病等病症，或随着患者病情加重，其血清SAA4表达呈现显著增强趋势。提示，临床可通过监测肺结核患者血清SAA4水平变化预测患者病情发展。Pearson相关系数和ROC曲线分析显示，肺结核患者血清SAA4表达水平与血清CRP和ESR显著正相关，其在肺结核诊断中的AUC面积大于CRP和ESR，灵敏度高于CRP和ESR。进一步证实，血清SAA4水平测定可用于活动期肺结核临床诊断中。Gelsolin是调节控制细胞移动、凋亡、细胞骨架重排中信号转导等重要结合肌动蛋白分子，其N端存在Ca2+不敏感性结构域，C端存在Ca2+敏感性结构域，确保其既能清除机体内循环中肌动蛋白，又可中和机体炎症因子，维持内环境稳定；此外，其还具有保护血管内皮细胞功能，抑制肺内毛细血管通透性增加，减轻急性肺损伤患者体内氧化应激性损伤等功效[4]。以往报道显示，临床可通过降低血液中Gelsolin水平，改善患者预后[16-18]。本研究测定分析显示，研究组血清Gelsolin水平明显低于对照组。提示，结核分枝杆菌感染可抑制Gelsolin表达。进一步分析显示，合并肺外结核和合并糖尿病的肺结核患者血清Gelsolin水平明显低于单纯肺结核，重症肺结核患者血清水平低于轻症患者。表明，并发肺外结核和糖尿病等病症，或随着患者病情加重，其血清Gelsolin表达受抑制状态越明显。提示，临床可通过监测肺结核患者血清Gelsolin水平变化预测患者病情发展。Pearson相关系数和ROC曲线分析显示，患者血清Gelsolin水平表达状态与CRP和ESR显著负相关，在肺结核诊断中的AUC面积同样大于CRP和ESR，灵敏度高于CRP和ESR。证实，血清Gelsolin水平测定可用于活动期肺结核临床诊断。且两种指标联合测定，对于活动期肺结核的诊断效能强于其单一诊断[19-20]。

综上所述，肺结核患者活动期血清SAA4高表达，Gelsolin低表达，且不同类型和不同病情活动期患者血清SAA4和Gelsolin表达水平存在差异，可作为肺结核诊断和病情判断的潜在血清学指标，两者联合有助于提高肺结核诊断效能。