2019—2020年新疆部分地区种猪群主要疫病的抗体检测与分析

常军帅，段付霜，刘若彤，屈勇刚，梁 晏，李 娜，张小玉，党瑞莹

(1.石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003；2.动物疾病防控兵团重点实验室，新疆 石河子 832003)

随着规模化、集团化养猪业的快速发展，养猪业在新疆经济的快速发展中发挥着重要作用[1]。种猪群是猪场的重要组成部分，种猪群内疫病的出现不仅影响了猪场猪群的稳定，还严重制约了猪场的生产效益。研究证明，圆环病毒2型(PCV2)、蓝耳病病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)可导致母猪出现繁殖障碍、种公猪出现精子活力减弱；口蹄疫病毒(FMDV)虽然也可导致母猪出现流产现象，但最常见的危害为仔猪发生心肌炎、肥育猪料重比增加[2]。对于病毒性传染病，目前尚未研发出特效药用于治疗，生产中最常用的方法为疫苗免疫。为了解新疆部分地区免疫种猪群(疫苗及免疫程序均按照《国家中长期动物疫病防控规划(2012—2020)》中农业部制定的常见动物疫病免疫的推荐方案)主要传染病的免疫水平，本试验采用ELISA(酶联免疫吸附试验)抗体检测方法，对采集到的种猪血清进行了CSFV、PRRSV、FMD-O、PCV2、PRV-gB、PRV-gE的抗体检测，以期为该区的疫病防控提供帮助。

1 材料

1.1 样品

2019年1月至2020年12月期间从新疆石河子市、巴音郭楞蒙古自治州、伊犁哈萨克自治州、塔城地区、阿克苏市、奎屯市，随机采集654份血清样品，送至石河子大学动物科技学院传染病实验室进行检测。其中后备猪81份、种公猪100份、经产母猪473份。

1.2 材料和仪器

口蹄疫O型(FMD-O)LPB-ELISA抗体检测试剂盒，购自中国农业科学院兰州兽医研究所；猪瘟病毒(CSFV)ELISA抗体检测试剂盒、猪伪狂犬病病毒gB(PRV-gB)ELISA抗体检测试剂盒、蓝耳病病毒(PRRSV)抗体检测试剂盒、猪伪狂犬病病毒gE(PRV-gE)ELISA检测试剂盒均购自北京爱德士元亨生物科技有限公司；猪圆环病毒2型(PCV2)抗体酶免检测试剂盒，购自哈尔滨元亨生物药业有限公司；兽用一次性采血器5 mL为美康实业有限公司产品；自动酶标仪、微量移液器购自赛默飞世尔科技公司。

2 方法

2.1 样品处理

从前腔静脉采集约5 mL血液，室温下静置，采集合格的血清，收集至无菌EP管开始检测。

2.2 ELISA检测方法

根据各个检测试剂盒的不同，使用不同说明书中的检测方法进行CSFV、PRRSV、FMD-O、PCV2、PRV-gB、PRV-gE的抗体检测。注意各个检测过程中的温度及避光要求。

2.3 结果判定

FMDV-O：试验符合认可标准后，计算临界值。样品两个数据都小于临界值则为阳性；临界值介于样品两个数据间，则判定为可疑；样品两个数据都大于临界值则为阴性。

PRRSV：试验成立后，计算S/P值。其中S=样品OD650nm值-阴性对照OD650nm平均值，P=阳性对照OD650nm平均值-阴性对照OD650nm平均值。S/P≥0.4为阳性，S/P＜0.40判为阴性。

CSFV：在试验成立的基础上，计算阻断率。阻断率%=(阴性OD450nm均值-样品OD450nm均值)/阴性OD450nm均值。当阻断率≤30%时，为阴性；当30%＜阻断率＜40%时，为可疑；当阻断率≥40%时，为阳性。

PCV2：试验成立的条件是阴性对照的OD450nm均值≤0.15，阳性对照OD450nm均值≥0.60。若不符合，需再次进行试验。临界值=阳性对照OD450nm均值×1/4。被检样品OD450nm值＜临界值，判定为抗体阴性；被检样品OD450nm值≥临界值，则判定为抗体阳性。

PRV-gB、PRV-gE：当阴性均值-阳性均值≥0.3时，试验成立。通过计算S/N=样品OD650nm/阴性OD650nm，进行结果判定。当S/N＞0.70时，为阴性；当0.60＜S/N≤0.70时，为可疑；当S/N≤0.60时，为阳性。

2.4 数据分析

使用SPSS软件对数据进行统计分析，计算各猪群间的差异。

3 结果

3.1 FMDV-O抗体检测结果

由表1可知，种猪群整体的FMDV-O抗体阳性率为84.92%(169/199)，其中经产母猪、后备猪、种公猪的FMDV-O抗体阳性率分别是85.29%(58/68)、79.72%(59/74)、91.23%(52/57)。后备猪、种公猪抗体水平与经产母猪存在一定差异(P＜0.05)。

表1 不同类别种猪FMDV-O抗体检测结果

3.2 PRRSV抗体检测结果

由表2可知，种猪群整体PRRSV抗体阳性率为95.33%(531/557)，其中经产母猪、后备猪、种公猪的PRRSV抗体阳性率分别是94.62%(387/409)、98.21%(55/56)、96.74%(89/92)。不同种猪群的PRRSV抗体水平未存在差异(P＞0.05)。

表2 不同类别种猪PRRSV抗体检测结果

3.3 CSFV抗体检测结果

由表3可知，种猪群整体CSFV抗体阳性率为93.67%(577/616)，其中经产母猪、后备猪、种公猪的CSFV抗体阳性率分别是94.25%(426/452)、91.78%(67/73)、92.31%(84/91)。不同种猪群的CSFV抗体水平未存在差异(P＞0.05)。

表3 不同类别种猪CSFV抗体检测结果

3.4 PCV2抗体检测结果

由表4可知，种猪群整体PCV2抗体阳性率为92.86%(273/294)，其中经产母猪、后备猪、种公猪的PCV2抗体阳性率分别是94.02%(220/234)、93.18%(41/44)、75.00%(12/16)。不同种猪群的PCV2抗体水平未存在差异(P＞0.05)。

表4 不同类别种猪PCV2抗体检测结果

3.5 PRV-gB抗体检测结果

由表5可知，种猪群整体PRV-gB抗体阳性率为96.78%(451/466)，其中经产母猪、后备猪、种公猪的PRV-gB抗体阳性率分别是97.34%(329/338)、94.00%(47/50)、96.15%(75/78)。不同种猪群的PRV-gB抗体水平存在差异(P＜0.05)。

表5 不同类别种猪PRV-gB抗体检测结果

3.6 PRV-gE抗体检测结果

由表6可知，种猪群整体PRV-gE抗体阳性率为35.64%(170/477)，其中经产母猪、后备猪、种公猪的PRV-gE抗体阳性率分别是33.33%(112/336)、61.82%(34/55)、27.91%(24/86)。种公猪的PRV-gE抗体水平与经产母猪、后备猪存在一定差异(P＜0.05)。

表6 不同类别种猪PRV-gE抗体检测结果

4 讨论与分析

“母猪好，好一窝，公猪好，好一坡”，由此谚语可见，种猪群的健康决定着猪场的经济效益。为了解新疆部分地区种猪群主要疫病的抗体水平，所以采用ELISA方法对经产母猪、后备猪、种公猪进行了抗体检测。种猪群整体的FMDV-O抗体阳性率为84.92%(169/199)，高于国家规定的70%，刘鸽等[3]在2014—2016年曾对新疆19个规模化养猪场进行了FMDV-O抗体检测，得出种猪群抗体阳性率为84.60%(588/695)，与之相比，相差不大，说明该地区种猪群的FMDV-O抗体水平仍维持在较高水平；后备猪群FMDV-O抗体阳性率为79.72%(59/74)，在种猪群内水平较低，可加强免疫次数，提高整体稳定性。

CSFV、PRRSV、PCV2的抗体水平都维持在90.00%以上，与张家瑞等[4-5]、常军帅等[6]对该地区的CSFV、PRRSV、PCV2的抗体水平相比，种公猪的PCV2抗体水平有所提升。PCV2为免疫抑制性疾病，可引起猪群免疫力低下，继而引发其他疫病，所以针对种公猪群可加强抗体检测次数，调整免疫程序、评价不同疫苗的免疫效果，做到防微杜渐，切实保护好猪场的配种工作。

伪狂犬病主要危害仔猪与保育猪，提高了仔猪的死亡率，在疫苗免疫中，最常用为gE缺失疫苗，所以本次针对种猪群的PRV抗体检测过程中，采用了PRV-gB、PRV-gE两种检测方法。种猪群整体PRV-gB抗体阳性率为96.78%(451/466)，其中经产母猪、后备猪、种公猪的PRV-gB抗体阳性率均超过了90.00%，说明种猪群整体都存在PRV抗体。种猪群整体PRV-gE抗体阳性率为35.64%(170/477)，其中后备猪的PRV-gE抗体阳性率高达61.82%(34/55)，说明后备猪群PRV野毒感染率较高，可能受饲养管理、当地疫情流行、疫苗质量等影响。反映出了抗体检测在生产中的局限性，可能部分抗体阳性是由野毒感染导致的。针对这种情况，可结合抗原检测，测序分析出当地的流行毒株，为更换更加合适的疫苗及种猪的淘汰提供帮助。