分光光度法测定不同食品基质中氰化物的方法验证

◎ 许 萍，王春华，刘晓丹，马金龙，于宝平

（1.上海城建职业学院，上海 201415；2.通标标准技术服务（上海）有限公司，上海 200233；3.中检科（上海）测试技术有限公司，上海 201206）

氰化物分为有机氰化物和无机氰化物，均属于高毒性化合物[1]。氰化物是具有极高活性的小分子物质，在细菌、真菌、节肢动物、脊椎动物和植物中均能自然产生[2]。日常生活中常见的粮食类食品，例如木薯、玉米、小麦、豆类等都有天然氰化物的存在。在使用粮食作为酿酒原料时，氰化物会被带入成品酒中。因此，针对粮食和蒸馏酒及其配制酒，氰化物的安全风险必须得到重视。

为了控制粮食和蒸馏酒及其配制酒的氰化物风险，国内外监管机构规定了详细的限量要求。欧盟于2007年发布通报，规定直接食用的杏仁中氢氰酸不得大于20 mg·kg-1。日本对水果、蔬菜、豆类谷物、小麦粉等食品的氰化物含量（以氢氰酸计）作出不同限量的具体规定[3]。我国是蒸馏酒生产、消费大国，因此加强对蒸馏酒及其配制酒的氰化物监管非常重要。在《食品安全国家标准 蒸馏酒及其配制酒》（GB 2757—2012）中明确规定氰化物（按100%酒精度）不大于8.0 mg·L-1。

目前氰化物的测试方法较多，主要有分光光度法、气相色谱法、离子色谱法[4]和滴定法等。我国测试标准以GB 5009.36—2016为主，包括分光光度法、气相色谱法和定性法。分光光度法仪器成本低，并且操作简便、可靠性好[5]，适合不同规模的实验室，应用较广泛。本文参照GB 5009.36—2016分光光度法，对不同食品基质中氰化物进行测试，验证了方法的线性关系、精密度、回收率，建立了可靠的测试能力。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

瓦里安Cary 100 Scan型紫外分光光度计；梅特勒-托利多ME 204E电子天平。

异烟酸、吡唑酮（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）、N-二甲基甲酰胺、氯胺T（有效氯含量≥11%）、水中氰标准溶液（50 mg·L-1，中国计量科学研究院）。

样品为市售木薯粉、市售高粱酒。

1.2 氰标准使用液的配制

配制浓度为1 g·L-1的氢氧化钠溶液，用氢氧化钠溶液将水中氰标准溶液稀释50倍，得到浓度为1 μg·mL-1的氰标准使用液。

1.3 实验方法

1.3.1 木薯粉氰化物含量测定

称取试样于蒸馏装置，加水、乙酸锌溶液、酒石酸，用氢氧化钠溶液收集馏液。吸取样液及0.0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL和5.0 mL氰标准使用液（相当于0.0 μg、0.1 μg、0.2 μg、0.5 μg、1.0 μg、2.0 μg、4.0 μg和5.0 μg氢氰酸）。分别加入氢氧化钠溶液和酚酞指示液，用乙酸调至红色消失，加磷酸盐缓冲溶液，加温至37 ℃，加入氯胺T溶液，放置5 min，加入5 mL异烟酸-吡唑酮溶液，加水后于40 ℃放置40 min，用2 cm比色杯于波长638 nm处测吸光度。

1.3.2 高粱酒氰化物含量测定

吸取试样，加氢氧化钠溶液，放置10 min。吸取0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL和2.0 mL氰标准使用液（相当于0 μg、0.5 μg、1.0 μg、1.5 μg和2.0 μg氢氰酸），加入氢氧化钠溶液。加入酚酞指示剂，用乙酸溶液调至红色褪去，用氢氧化钠溶液调至近红色，加磷酸盐缓冲溶液、氯胺T溶液，放置3 min，加入2 mL异烟酸-吡唑酮溶液，加水稀释，30 ℃放置30 min，用1 cm比色杯于波长638 nm处测吸光度。

2 结果与分析

2.1 线性关系

实验结果显示，分光光度法线性良好。木薯粉的标准曲线为y=6.514 03x+0.040 49，高粱酒标准曲线为y=0.144 28x+0.000 44，相关系数均为0.999。符合GB/T 27417—2017的要求，相关系数不低于0.99。

2.2 精密度和加标回收率

2.2.1 木薯粉

在称取的10 g木薯粉中加标3水平，相当于加标0.5 μg/10 g、1 μg/10 g、5 μg/10 g 样品，测定氰化物含量结果见表1。表1中加标前后氰化物含量的精密度最高7.4%，均不大于10%。结果显示分光光度计法测试木薯粉精密度高、再现性好。精密度符合GB 5009.36—2016的要求，重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。表1中3个加标水平最低回收率为80.3%，最高回收率达93.2%。回收率符合GB/T 27404—2008的要求，被测组分含量为0.1～1 mg·kg-1时回收率范围在80%～110%。

表1 木薯粉精密度和加标回收率表

2.2.2 高粱酒

在吸取的1.0 mL样品中两水平加标，相当于加标1 μg·mL-1、2 μg·mL-1样品，测定氰化物含量结果见表2。从表2可以看出，加标后测定氰化物含量的精密度最高3.8%，不大于10%。结果显示分光光度计法测试高粱酒精密度高、再现性好。精密度符合GB 5009.36—2016的要求，重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。表2中两个加标水平最低回收率为90.0%，最高回收率达96.4%。回收率符合GB/T 27404—2008的要求，被测组分含量为1～100 mg·kg-1时回收率范围在90%~110%。

表2 高粱酒精密度和加标回收率表

3 结论

本文参照GB 5009.36—2016分光光度法，对不同食品基质中氰化物进行测试，验证了不同食品基质的测试精密度和回收率，均得到了符合要求的测试结果。①分光光度法操作简单，有利于测试人员的培训。②通过本文的方法验证实验可以看出分光光度法精密度高、重现性好，有利于实验室质量控制。③本文分光光度法适用于不同基质，木薯粉和高粱酒的方法验证结果均符合国家标准的要求。此外，对于颜色较深的或者混浊的蒸馏酒及其配制酒样品，需要蒸馏预处理，预处理方法可参考粮食类样品的蒸馏方法。④木薯粉和高粱酒的回收率均符合国家标准要求。本文分光光度法准确度高，结果可信。

综上所述，分光光度法可用于实验室检测粮食类食品和蒸馏酒及其配制酒，均达到检测的质量控制要求。