AutoLumo A2000Plus检测新型冠状病毒抗体性能评价

王雪莲，张辰宇，冯晓敏，柏国明

1.北京怀柔医院检验科，北京 101400；2.首都医科大学公共卫生学院，北京100069

新型冠状病毒肺炎是由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的以肺部病变为主的新发传染病，也可引起消化系统和神经系统的损伤，严重者可导致死亡[1]。SARS-CoV-2主要经呼吸道飞沫和密切接触传播。SARS-CoV-2感染的患者，包括无症状感染者均为传染源，且人群普遍易感[2]。新型冠状病毒肺炎流行形势非常严峻，截止到2020年11月23号，新型冠状病毒肺炎全球累计确诊超5 888万例，死亡破139万例，所以做好SARS-CoV-2的实验室检查是非常重要和必要的。2020年3月3日发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》(以下简称“第七版方案”)[3]新增加了抗体血清学检测作为诊断SARS-CoV-2感染的另一检测手段，来弥补核酸检测漏检的风险。为保证检验结果可靠有效，对定量实验进行方法学验证是实验技术要求中的重要一环[4]，依据ISO15189《医学实验室质量和能力的专用要求》，参考有关文献[5-7]，对安图磁微粒化学发光仪AutoLumo A2000Plus检测SARS-CoV-2抗体IgG和IgM的性能进行评价。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂 仪器：安图磁微粒化学发光仪AutoLumo A2000Plus；试剂：安图公司配套使用的SARS-CoV-2抗体IgM和IgG试剂(简称安图试剂)、质控品和标准品，博奥赛斯生物公司SARS-CoV-2抗体IgM和IgG试剂(简称博奥赛斯试剂)。

1.2方法

1.2.1正确度分析 使用标准品低值和高值连续测试5次，取均值,看测定均值是否在标准品范围内。

1.2.2精密度分析 按照WS/T 492-2016指导进行评价；检测低值和高值2个不同浓度的质控品，每个浓度每天1批，每批重复测定5次，持续5批，每个质控品获得25个数据；对于所获得的测定结果进行统计学分析，计算变异系数(CV)。结果评价标准：批内CV≤1/4允许总误差(TEa)%；批间CV≤1/3 TEa%。

1.2.3最低检出限 根据CNAS-GL038：2019《免疫定性检验程序性能验证指南》规定。使用安图试剂盒稀释液稀释最低检出限标本，测定4批，每批重复测定5次，共计20个数据。结果评价标准：根据CNAS-GL038：2019《免疫定性检验程序性能验证指南》和《EP09-A2》规定进行。如果≥95%的标本检出阳性，检出限验证通过。

1.2.4参考区间 选取40例健康者作为参考个体，年龄18～55岁，无既往病史，排除用药，无SARS-CoV-2疫苗注射史，各项化验指标均正常。标准要求：若40例参考个体中不超过2个观测值在原始报告的参考限之外，厂商提供参考区间可以接受[8]。若3个以上观测值超出界限，另选择40例参考个体进行验证，若≤2个观测值超过原始参考限，则厂商提供参考区间可以接受；若仍有3个观测值超出参考限，则应重新检查所用分析程序，考虑2个标本总体生物学特征上是否存在差异，并考虑建立自己的参考区间。

1.2.5干扰试验 主要验证AutoLumo A2000Plus对溶血、黄疸、脂血的抗干扰能力[9]。取20份患者标本，包括10份阴性标本和10份阳性标本(S/CO>8)。将每份血清标本分成3份即60份标本，平均分3组，每组20份标本。干扰物浓度配制：血红蛋白1 000 mg/dL、胆红素50 mg/dL、三酰甘油6 000 mg/dL，比较加入干扰物前后S/CO均值的结果。

1.2.6携带污染率验证 使用与仪器配套的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)试剂对高浓度质控品、稀释后的样品及零浓度样品进行检测，计算携带污染率，如污染率均小于1×10-6，验证结果符合要求。具体验证程序：使用与仪器配套的HBsAg试剂进行检测；用高于最低检出限106倍的该项目质控品作为原液；原液为样品，在测定仪上测定原液的浓度值。重复测定10次，计算10次浓度的平均值，即为原液的原始浓度值。若因设备或试剂盒线性范围限定而使得系统无法准确检测质控品浓度值，则可采用稀释推算法获得。例如：某一质控品经过100倍稀释后浓度值为10 000 ng/mL则原始浓度值为106ng/mL。以原液和零浓度为样品，按照原液、零浓度样品、零浓度样品、零浓度样品的顺序为一组，在测定仪上测定上述样品的浓度值，共进行5组测定；每一组的测定中，原液的原始浓度值为L原，第2个样品的浓度值为Li2，第4个样品的浓度值为Li4，i为该测定组的序号；按照公式Ki=(Li2-Li4)/(L原-Li4)计算携带污染率。

1.2.7化学发光法检测结果 使用安图试剂及博奥赛斯试剂分别对40例SARS-CoV-2疫苗接种人员进行检测，并将检测结果做比较分析。检测结果判定标准：S/CO=待测标本发光值/Cutoff值,S/CO≥1.00时，结果判为阳性；S/CO≤1.00时，结果判为阴性。

2 结 果

2.1正确度验证结果 使用安图标准品低值和高值连续测试5次，实测均值均在标准品范围内，见表1。

表1 SARS-CoV-2抗体IgM和IgG标准品范围及正确度验证结果

2.2精密度验证结果 SARS-CoV-2抗体IgM和IgG质控品低值和高值的批内和批间精密度均在预期的目标CV内，见表2。

表2 SARS-CoV-2抗体IgM和IgG质控品精密度测定结果

2.3最低检出限验证结果 SARS-CoV-2抗体IgM和IgG 100%的标本检出阳性，验证结果符合要求，见表3。

表3 SARS-CoV-2抗体IgM和IgG最低检出限测定结果

2.4参考区间及干扰试验验证结果 40例参考个体的SARS-CoV-2抗体IgM和IgG S/CO观测值均在厂商提供的参考区间内(S/CO≤1.00)，故厂商提供的参考区间可以接受。加入血红蛋白、胆红素、三酰甘油干扰前后S/CO均值结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)，干扰试验验证通过，见表4。

表4 干扰试验结果比较

2.5携带污染率验证结果 采用稀释推算法测定原液的浓度值，将HBsAg原液稀释100倍，重复测定10次，结果为300.562、340.558、276.836、315.432、320.135、314.974、384.294、350.626、365.501、312.865 IU/mL，原液稀释100倍的平均值为328.178 3 IU/mL，计算原液的原始浓度为32 817.83 IU/mL。以稀释原液和零浓度为样品，按照稀释原液、零浓度样品、零浓度样品、零浓度样品的顺序为一组，经测定，5组携带污染率均小于1×10-6，符合要求，见表5。

表5 携带污染率验证结果

2.6安图试剂及博奥赛斯试剂检测结果比较 使用安图试剂和博奥赛斯试剂分别对40例SARS-CoV-2疫苗接种人员进行SARS-CoV-2抗体IgM和IgG检测，2种试剂检测结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表6。

表6 安图试剂及博奥赛斯试剂检测结果比较[n(%)]

3 讨 论

检测出SARS-CoV-2核酸虽然是疑似病例确诊的“金标准”，但是假阴性是核酸检测最突出的问题。SARS-CoV-2抗体的检测可以有效地弥补核酸检测漏检的风险。抗体血清学检测与核酸检测相比，操作简单、快捷，且标本质量有保证，检测耗时短，可实现自动化、大批量分析，无需对患者进行咽拭子采样，也可降低医护人员暴露风险[10-11]。目前对SARS-CoV-2抗体的检测主要有胶体金法和化学发光法。胶体金法其优势在于检测时间短、成本低、无需借助仪器即可判读结果，但只能对抗体进行定性检测，无法实现精确定量。化学发光法是将高灵敏度的化学发光测定技术与高特异度的免疫反应相结合的检测分析技术[12]，具有特异度高、线性范围宽、结果稳定、操作自动化、速度快等优点，临床上广泛用于对各种抗原、抗体、激素、酶等的检测[13]。

ISO15189认可中规定，实验室对新购置的仪器，遇到重大投诉，重要零件及试剂更换后均需要对仪器的主要性能指标进行验证，从而保证检验结果的准确可靠。经过周密的实验设计，本实验室从正确度、精密度、最低检出限、参考区间、抗干扰能力及携带污染率几方面对AutoLumo A2000Plus检测SARS-CoV-2抗体的性能进行了验证。结果显示：对标准品低值和高值各进行5次测试，实测均值在标准品范围内，正确度验证合格。精密度是方法学评价的基础，是性能验证中最基础的一项指标，也是检测系统的基本分析性能之一，因此对精密度的验证必不可少[14-15]。本试验SARS-CoV-2抗体IgM和IgG质控品批内预期目标CV≤6.25%，批间预期目标CV≤8.33%。经检测，SARS-CoV-2抗体IgM低值、高值的批内精密度分别为2.55%和2.33%，批间精密度分别为3.21%和2.90%，SARS-CoV-2抗体IgG低值、高值的批内精密度分别为3.23%和2.21%，批间精密度分别为4.07%和2.81%，SARS-CoV-2抗体IgM和IgG低值、高值质控品均符合预期目标CV要求。选用20份弱阳性标本进行最低检出限验证，本试验100%的标本均能检出，最低检出限验证符合要求。选用的40例参考个体的观测值均在厂商提供原始参考区间内，参考区间可以接受。选用20份患者标本加入干扰物前后进行测定，S/CO均值结果差异不大，对溶血、黄疸、脂血的抗干扰能力符合该试剂规定要求。携带污染率试验可评价检测结果是否受到上一标本的影响，且携带污染率为一个常数，不受前后2标本浓度差值大小的影响，能有效反映检测系统携带污染的可能[16-17]。本试验5组测定的携带污染率均小于1×10-6，符合要求，证明该仪器的加样系统不受前后2标本浓度差值大小的影响。使用安图试剂和与博奥赛斯试剂分别对40例SARS-CoV-2疫苗接种人员进行SARS-CoV-2抗体IgM、IgG检测，2种试剂检测结果分别相差1例，说明2种试剂符合性比较好。

综上所述，AutoLumo A2000Plus检测SARS-CoV-2抗体IgM和IgG性能良好，可满足本实验室需求，能够在新型冠状病毒肺炎的防控及诊治中发挥作用。