急性白血病初诊及缓解后bcl-2表达水平的比较及临床意义

袁冬妹，张敬东，孟美丽，何程明

（赣州市人民医院血液内科，江西 赣州 341000）

目前化疗为临床治疗急性白血病（AL）的常用方式，可有效降低机体肿瘤细胞含量，达到抑制疾病发展的目的，但该病治疗难度大且易复发，因此，对患者治疗后的预后评估至关重要，可为进一步治疗提供依据[1]。白血病基因2（bcl-2）是一种耐药基因，在AL患者中有较高表达，既往临床评估患者预后多对患者骨髓细胞中的bcl-2水平表达进行检测，但应用中发现，仍有部分患者存在较高的复发率[2]。相关研究表明，治疗后，骨髓活检组织中仍存在成簇分布的原始bcl-2细胞，因此，联合骨髓活检组织检测可进一步提升预后价值[3]。鉴于此，本研究回顾性分析2016年1月至2020年1月于本院确诊并接受治疗的91例AL患者的临床资料，通过研究急性白血病骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2表达水平，旨在探讨急性白血病初诊及缓解后白血病基因2（bcl-2）表达水平及临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 回顾性分析2016年1月至2020年1月于本院确诊并接受治疗的91例AL患者的临床资料，其中男44例，女47例；年龄26～41岁，平均年龄（33.26±3.29）岁；体质量41～73 kg，平均体质量（57.19±5.16）kg。分别在治疗前、缓解后抽取所有患者骨髓活检组织和骨髓液，检测bcl-2表达水平，并分析急性白血病骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2表达水平对患者预后的预测价值。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：符合急性髓系白血病或急性淋巴细胞白血病诊断标准；同意化疗；依从性较高；临床资料完整，且患者及家属均签署知情同意书。排除标准：精神状态异常，无法正常交流；治疗依从性差；先天性发育不良；合并全身感染性、免疫系统疾病；严重基础疾病，如心、脑、肝等重要器官存在器质性病变。

1.3 方法

1.3.1 骨髓细胞中bcl-2水平检测 分别在治疗前、缓解后抽取所有患者骨髓液，在所获得的骨髓液中加入PBS缓冲液，缓冲液与骨髓液的比例为2∶1，然后按等比例加入淋巴细胞分离液上层，800×g离心20 min，吸取中间细胞层，加入ACK裂解残存的红细胞，离心获取单个核细胞，采用细胞免疫荧光标记法测定患者骨髓单细胞内的bcl-2水平。

1.3.2 骨髓活检组织中bcl-2水平检测 分别在治疗前、缓解后抽取所有患者骨髓活检组织，并用10%中性福尔马林固定液固定，采用免疫组化染色法测定患者骨髓活检组织内bcl-2水平。

1.4 统计学方法 采用SPSS 24.0统计学软件进行数据处理，计数资料以[n（%）]表示，行χ2检验，计量资料以“±s”表示，行t检验，采用Logistics回归分析检验AL患者骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2表达水平于预后的相关性，并绘制患者工作曲线（ROC）得到曲线下面积（AUC），检验AL患者骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2表达水平对预后的预测价值：AUC值＞0.90表示预测性能较高，0.71～0.90表示有一定的预测性，0.50～0.70表示预测性能较差，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗前后骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2表达水平比较 联合化疗后，骨髓活检组织中bcl-2、骨髓细胞中bcl-2水平均低于治疗前，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 治疗前后骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2表达水平比较（±s）Table 1 Comparison of bcl-2 expression levels in bone marrow biopsy tissue and bone marrow cells before and after treatment(±s)

表1 治疗前后骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2表达水平比较（±s）Table 1 Comparison of bcl-2 expression levels in bone marrow biopsy tissue and bone marrow cells before and after treatment(±s)

注：bcl-2，白血病基因2

时间治疗前（n=91）联合化疗后（n=91）t值P值骨髓活检组织中bcl-2 2.05±0.81 0.97±0.26 12.111＜0.001骨髓细胞中bcl-2 1.01±0.37 0.46±0.18 12.751＜0.001

2.2 Logistics回归分析结果 将AL患者预后作为因变量，将骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2表达水平作为协变量，进行Logistics回归分析，回归方程为Y=14.582-4.220X1-10.938X2，提示骨髓活检组织和骨髓细胞中低bcl-2表达水平是AL患者预后的保护因素（OR＜1，P＜0.05），相关参数见表2。

表2 Logistics回归分析结果Table 2 Logistics regression analysis results

2.3 骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2表达水平在AL患者预后的预测价值 将AL患者预后作为状态变量，骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2表达水平作为检验变量，绘制ROC曲线，结果显示，骨髓活检组织中bcl-2表达水平单独预测的AUC为0.861，具有一定的预测价值；骨髓细胞中bcl-2表达水平单独预测AUC为0.854，具有一定的预测价值；骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2表达水平联合预测AL患者预后的AUC为0.944，具有较高的预测价值。

3 讨论

AL为临床血液系统常见的恶性疾病，是造血干细胞的恶性克隆性疾病，发病骨髓中异常的原始细胞及白血病细胞大量增殖，蓄积于骨髓并抑制正常造血功能，也可广泛浸润肝、脾、淋巴结等髓外脏器，临床症状主要表现为面色苍白、疲乏、出血、发热等，如不及时治疗，不仅会损害呼吸、消化、泌尿等系统，还可造成酸碱电解质平衡紊乱，危胁患者健康及生命[4-6]。化疗为治疗AL的常用方式，但临床应用中发现，该病治疗难度较大，化疗后患者的缓解率及5年生存率均较低。因此，本研究旨在寻找一种评估患者预后的相关指标，为临床进一步治疗提供可靠依据。

本研究结果显示，缓解后骨髓活检组织中bcl-2、骨髓细胞中bcl-2水平均低于治疗前；Logistics回归分析，得到回归方程Y=14.582-4.220X1-10.938X2，提示骨髓活检组织和骨髓细胞中低bcl-2表达水平是AL患者预后的保护因素（OR＜1，P＜0.05）；绘制ROC曲线，结果显示，骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2表达水平预测AL患者预后的AUC为0.944，具有较高的预测价值。其原因在于，bcl-2是一种耐药基因，具有明显抑制细胞凋亡的作用，在AL患者中有较高表达，化疗缓解后，患者机体bcl-2水平显著降低，表明bcl-2高表达是急性白血病难治、复发的重要原因，对判断预后有一定临床价值。但在研究过程中还发现，达到骨髓细胞学缓解的患者，bcl-2表达处于低水平时仍有较高的复发率，因此，可能存在部分AL患者骨髓细胞检查并不能完全代表真正意义上的完全缓解[7-9]。而对患者骨髓活检组织检测发现，骨髓细胞检查已达完全缓解标准，缓解后骨髓活检组织中仍存在成簇分布的原始bcl-2细胞，由此可见，同时进行骨髓活检组织和骨髓细胞bcl-2检测能更准确评估AL的预后[10-12]。

综上所述，AL缓解后骨髓活检组织中bcl-2、骨髓细胞中bcl-2水平均低于治疗前，骨髓活检组织和骨髓细胞中bcl-2水平表达与AL患者的预后水平密切相关，联合检测具有较高的临床价值，可为临床评估AL患者疾病恢复情况并实施有效的治疗方案提供参考依据，值得推广应用。