血筛集中化核酸检测质量指标监测的回顾性分析

周丽君，王珊，付薪静，万建华，穆耶赛尔，张洪斌

（乌鲁木齐市血液中心，新疆 乌鲁木齐）

0 引言

血筛核酸扩增技术（NAT）是在分子生物学水平的基础上直接对病原体核酸进行检测，作为对酶联免疫吸附试验（ELISA）血液检测的补充，大大缩短检测“窗口期”，降低输血传播疾病残余风险[1-2]。新疆位于西北部，地大物博，各地区检测水平参差不齐，核酸检测对人员、环境、设备等方面要求较高，新疆地区对没有开展核酸检测的实验室实行核酸集中化检测，目前血站实验室在业务运行、检测前样本质量、性能验证、检测中实验室内质控、检测后是否拆分、拆分阳性率、室间质评等的综合评价领域，亟需建立一套系统、科学、有效、综合的评价方法，制定业务发展和实验室质量管理相适应的质量指标，建立同行实验室之间标杆比对的体系[3]。本研究对本中心核酸检测实验室2017年1月至2020年12月核酸检测质量监控中常用的指标进行分析，探究本实验室核酸检测自身业务运行和质量管理效果的真实状态，有助于实验室利用系统、科学的综合评价结果，确保血液检测结果准确、及时、有效。

1 材料与方法

1.1 核酸检测设备和试剂

本研究使用两套核酸检测系统，A系统和B系统两套系统互为备用，混样分项目检测，每批检测均依据试剂说明书设置阴性质控和阳性质控，每个pool均含内标。室内质控浓度为最低检测限2～5倍并且与已知阴性样本混样检测，第三方室内质控品监控，A系统室内质控浓度分别为：50 IU/mL、200 IU/mL、1000 IU/mL；B系统200 IU/mL、2000 IU/mL、2000 IU/mL。按照混样规则进行混样检测，混样检测为反应性的pool挑选出样本，进一步做拆分实验，拆分实验为反应性的标本判定为核酸检测结果阳性，无反应性则判定为核酸检测结果阴性。

1.2 资料来源于本中心核酸检测实验室

对2017年1月至2020年12月核酸检测的基本情况进行回顾性分析。

1.3 监测指标

样本数、检测批次、汇集阳性pool数、阳性标本数、核酸检出率、拆分检出率、样本采集错误数量、样本采集错误率、室间质评满分次数、室间质评满意度、室内质控失控次数、室内质控失控率、实验失败次数、实验失败率、设备故障天数、设备故障率。

1.4 常用质量监控指标计算方式

1.4.1 核酸阳性情况相关指标

核酸检出率=（核酸阳性标本数/检测标本总数）×100%。

拆分检出率=（拆分阳性标本数/混样阳性pool数）×100%。

1.4.2 样本采集错误率

样本采集错误率=（样本错误/样本总数）×100%。

1.4.3 室间质评满意度

室间质评满意度=（室间质评100分次数/参加总次数）×100%。

1.4.4 室内质控失控率

室内质控失控率=（第三方室内质控失控批次/总实验批次）×100%。

1.4.5 实验失败率

实验失败率=（实验失败批次/总实验批次）×100%。

1.4.6 设备故障率

设备故障率=（设备故障天数/可使用天数）×100%。

2 结果

A系统与B系统比较，见表1。

表1 A系统与B系统质量监测指标比较（n,%）

3 讨论

血站实验室可借鉴国际通用的医学实验室质量指标体系框架。如2010年美国临床和实验室标准协会（CLSI）颁布了《建立使用质量指标实施实验室过程改进和质量监控》(GP35 A)[4]，2017年，我国国家卫计委颁布了《临床实验室质量指标》(WS/T496 2017)，为我国临床实验室质量指标体系的建立提供了标准依据[5]。乌鲁木齐2017年1月至2020年12月共检测核酸样本229136例，采用几种主要指标对核酸检测日常运行情况进行监控，质量指标项目主要来源于每月给国家卫健委上报的质量指标[3]，2017～2020年总体核酸检测情况，A系统和B系统比较，核酸检出率、实验失败率有显著性差异（P＜0.05），其余无显著性差异（P＞0.05）；两个系统均进行两两比较，A系统样本采集错误率2018年与2019年有显著性差异（P＜0.05），实验失败率2017年与2018年有显著性差异（P＜0.05），其余无显著性差异（P＞0.05）；B系统设备故障率：2017年与2020年有显著性差异（P＜0.05），设备故障率：2018年与2020年有差异（P＜0.05），其余无显著性差异（P＞0.05）；样本采集错误率0.010%，标本错误主要原因是：样本不足量、核酸酶免试管条码贴错、集中化样本因冷冻后在运输过程中导致严重溶血；核酸检出率A系统0.091%高于B系统0.043%，主要与检测试剂最低检出限等有关；A系统拆分检出率56.949%，与山东[6]接近，反映汇集反应性pool拆分效率的指标，本实验室在每月分析中可以看出，在检测室间质评之后的1周拆分效率较低，可能是室间质评样本中有HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA阳性样本，检测之后没有消毒彻底导致；室间质评满意度12次结果均为100分，但其中一次B系统核酸检测设备检测结果中，有一室间质评样本HIV项目混样检测结果为阴性，但仔细观察扩增图异常才分析得出正确结果；室内质控失控率较低，主要出现为HCV RNA汇集未检测出，室内质控失控及时填写失控报告并进行分析；实验失败率，A系统低于B系统，实验失败主要为阳性未检测出、内标未出、阴性检测到阳性结果、实验室温度超出30 ℃、实验室干燥、人为因素、其他原因实验失败等；设备故障率，主要为汇集表现为未加上样本频繁；提取故障主要表现为维护无法进行、设备报错、提取磁珠异常等；扩增故障未出现过。本实验室机采血小板、RH样本按照混样规则分配在不同的pool中，与全血已知阴性样本混样，拆分当日进行，保证样本在采集后72 h内发放结果，并且机采血小板、RH样本可提前检测出结果，运行效果良好。

本研究的实验室在2016年建立了实验室质量体系之后，通过新疆临检中心PCR实验室验收，本研究通过对本实验室质量指标的分析探索，不断持续改进，以提高实验室检测能力。