卡尔费休容量法测定冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）中水分含量

冯雪 李婷婷 郑欣 苍鹏 王佳欣 杨红育

（长春生物制品研究所有限责任公司 吉林长春 130012）

1 前言

冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）是用狂犬病病毒固定毒接种于Vero细胞，主要用于预防狂犬病。《中国药典》2020年版三部中收载的水分测定法包括费休氏法、烘干法、减压干燥法、甲苯法和气相色谱法[1]。此外，热重分析法、差式扫描量热法等方法也常应用于药物中水分的分析[2-9]。本文参照《中国药典》中卡尔费休容量法，联用市售卡氏干燥炉测定水分，并将测定的结果与未联用卡氏干燥炉的方法进行比较。

2 仪器与试剂

2.1 仪器

V30型水分测定仪（METTLER TOLEDO）；Stromboli型卡氏干燥炉（METTLER TOLEDO）；XS205型电子天平（METTLER TOLEDO）。

2.2 试剂

无水甲醇（国药集团化学试剂有限公司）；1mg/mL费休氏试液（Merck）；2mg/mL费休氏试液（Merck）；5 mg/mL费休氏试液（Merck）；固体标准水（Merck）。

2.3 实验样品

冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）（长春生物制品研究所有限责任公司）。

3 实验方法

3.1 卡氏炉-卡尔费休联用法

3.1.1 操作条件

（1）卡氏干燥炉加热温度：150℃±2℃。

（2）卡氏干燥炉加热时间：10 min。

（3）费休氏试液滴定度：1、2、5 mg/ml。

（4）载气：空气。

3.1.2 样品测定

精密称取样品适量于样品瓶中，密封后将其放入卡氏干燥炉的相应位置并启动，用费休氏试液滴定至终点。

3.2 卡尔费休法

以无水甲醇为溶剂，按照《中国药典》中的卡尔费休容量法测定。

4 结果与讨论

4.1 费休氏试剂滴定度的选择

不同滴定度的费休氏试液测定结果的相对标准偏差为0.103%，无明显差异。

4.2 称样量的选择

采用滴定度为1 mg/ml的费休氏试剂，在150℃加热10 min的测定条件下，分别称取0.04、0.08、0.12、0.16、0.20 g的样品，考察样品程样量对测定结果的影响。结果表明，不同样品称量质量测定结果的相对标准偏差为0.048%，无明显差异。

4.3 精密度实验

采用滴定度为1 mg/ml的费休氏试剂，150℃加热10 min的测定条件下，由2位不同实验人员在不同时间对样品进行测定，每位实验人员精密称取6份样品测定水分，测定结果见表1。计算2位实验人员12次测定结果的RSD为0.128%，精密度良好。

表1 精密度实验的测定结果（%）

4.4 回收率实验

经测定，加标回收率在87.74%～105.01%。

4.5 比对实验

以无水甲醇为溶剂，按照《中国药典》卡尔费休容量法，由2位不同实验人员在不同时间对样品进行测定，每位实验人员精密称取6份样品测定水分，并将测定结果与精密度实验结果进行比对。实验人员A与实验人员B比对结果的RSD分别为0.0877%和0.133%，结果基本一致。

5 结论

本文建立了冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）水分的检测方法，考察了该方法的影响因素。研究表明，费休氏试液滴定度及称量质量对检测结果无显著影响；采用2种方法对样品进行测定，结果表明2种方法的测定结果基本一致，但联用卡氏干燥炉能够避免样品中其他辅料对测定结果的影响，操作方便简洁，准确度高，为冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）水分的检测提供参考方法。