扶正屏风合剂煎煮工艺与薄层色谱质控研究

宋治荣 王耀鹏 杨锡仓 张兆芳

甘肃中医药大学附属医院炮制工程中心，甘肃兰州 730020

扶正屏风合剂源于防治新冠肺炎的甘肃“扶正避瘟方”，该方由黄芪、麸炒白术、麸炒苍术、防风、生姜、连翘、荷叶七味中药组成[1]，具益气固表、扶正辟瘟功效[2]，方中黄芪益气升阳扶正为君药；苍白二术健脾益气，助黄芪固表实卫为臣药；佐以防风、生姜走表而祛风邪止咳嗽，连翘、荷叶宣热化湿以醒脾，又防诸药辛散太过耗气伤津。方药补散结合，扶正以达祛邪，祛邪亦可扶正，寒热同治以达“阴平阳秘、精神乃治[3]”。研究表明该方具激活免疫调节功能，抵御病毒入侵[2]。开发集汤剂特色的扶正屏风合剂用于新冠肺炎防治，可发挥中医药防治“疫病”的优势。汤药出膏量是全成分浓缩体[4]，为保证该合剂与汤药质量及疗效一致性，本课题采用干膏率作为全成分评定指标，用正交设计优化煎煮提取工艺，并对方中主要药味黄芪、防风和连翘进行薄层色谱鉴别，为其质量控制提供参考。

1 材料与仪器

1.1 仪器

硅胶G薄层板、硅胶GF254薄层板（青岛海洋化工有限公司）；电子分析天平（FA-2104型，上海良平仪器仪表有限公司）；ZF9型四用紫外分析仪（上海康华生化仪器制造有限公司）；KQ-500DE超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；电热恒温干燥箱（101/102系列，北京科伟永兴仪器有限公司）。

1.2 试药与试剂

黄芪、麸炒白术、麸炒苍术、防风、生姜、连翘、荷叶七味均购自兰州安泰堂中药饮片有限公司，经甘肃中医药大学附属医院杨锡仓主任中药师鉴定；黄芪甲苷对照品（批号：110781-201717），连翘苷对照品（批号：110821-201816），防风对照药材（批号：120947-201810），均由中国食品药品检定研究院提供；其他试剂均为分析纯。扶正屏风合剂三批中试样品（批号：20200216、20200217及20200220）。

2 方法与结果

2.1 煎煮提取工艺

2.1.1 干膏率测定 精密量取浓缩液10 ml，置于已干燥至恒重的蒸发皿中蒸干，于105℃干燥至恒重，计算干膏得率。

2.1.2 正交设计方案及结果 按处方比例称取全处方中药饮片9份，每份重63 g。对影响煎煮提取的主要因素加水量A、煎煮时间B、煎煮次数C，采用L9（34）正交试验，因素与水平设计见表1。按照试验方案，首次提取饮片浸泡30 min，再煎煮提取，煎煮液浓缩至100 ml，测定干膏率，试验结果见表2。

表1 因素与水平

表2 正交试验结果

2.1.3 实验结果分析 由表3方差结果可知，A、B、C因素对煎煮效果均有显著性差异。从表2极差结果可知，各因数影响大小的顺序为A＞B＞C，因素A极差K2是高值，因素A选择A2；因素B、C最高K值是K3，但B因素的K3、K2在同一水平差异不显著，成本原理出发因素B选B2，C因素极差K3是高值，因素C选C3，得工艺A2B2C3，又因试验次数C属次重要因素，而汤药及水煎煮中药剂一般2次[5]追加正交试验A2B2C2验证，比较A2B2C3与A2B2C2所得出膏率与均值RSD小于5%，综合生产、经济等综合因素出的最优提取条件为A2B2C2，即加水8倍量，煮前先浸泡30 min，煎煮提取2次，每次45 min。

表3 正交试验结果方差分析

2.1.4 追加工艺验证试验 按处方量称取药材三份，依照A2B2C2煎煮工艺条件进行追加验证，见表4。追加试验结果表明，A2B2C2的煎煮工艺稳定可靠。

表4 煎煮工艺验证实验结果

2.2 薄层色谱鉴别

2.2.1 黄芪的薄层鉴别[6-8]取扶正屏风合剂20 ml，用水饱和正丁醇提取2次，每次20 ml，合并正丁醇层，加氨试液洗涤4次，每次20 ml，弃去氨试液层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5 ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺黄芪的阴性样品，按供试品溶液制备方法同法处理，作为阴性对照品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2020年版四部通则0502）试验，吸取上述三种溶液各4 µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13︰7︰2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃环境中加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯（365 nm）下显相同的橙黄色荧光斑点，阴性无干扰。见图1～2。

图1 黄芪薄层鉴别色谱图

图2 黄芪薄层鉴别色谱图

2.2.2 防风的薄层鉴别[6]取扶正屏风合剂20 ml，用水饱和正丁醇提取2次，每次20 ml，合并正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺防风的阴性样品，按供试品溶液制备方法同法处理，作为阴性对照品溶液。另取防风对照药材1 g，加水20 ml回流1 h，过滤，滤液用水饱和正丁醇煎煮2次，每次20 ml，合并正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2020年版四部通则0502）试验，吸取上述三种溶液各2 µl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（4︰1）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰（图3）。

图3 防风薄层鉴别色谱图

2.2.3 连翘的薄层鉴别[6，9]取扶正屏风合剂20 ml，用水饱和正丁醇煎煮2次，每次20 ml，合并正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺连翘的阴性样品，按供试品溶液制备方法同法处理，作为阴性对照品溶液。另取连翘苷对照品，加甲醇制成每1 ml含0.25 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2020年版四部通则0502）试验，吸取上述三种溶液各10 µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（6︰1︰0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃环境中加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰（图4）。

图4 连翘薄层鉴别色谱图

3 讨论

中医认为新冠肺炎为“湿性浊毒”，属“疫疠之邪”的范畴，目前在治疗上无特效药，而中医药防治疫病的思想和方药经验在新冠肺炎防治方面取得效果，中医药作为国家防治新冠肺炎战略推广应用[10]。甘肃根据“因时、因地、因人”三因制宜原则，发挥中医药“治未病”优势，防治“疫病”在早期思想，中医药深度介入新冠肺炎预防、救治、康复全过程，凝练形成系列有效方药[11]，其中扶正屏风合剂方是防治新冠肺炎的“甘肃方剂”之一，在新冠肺炎防治方面得到了广泛应用，并取得良好效果[12]。发挥中医药的“简便验廉”防治疾病优势，为进一步推广使用中药制剂，满足防疫需求，本研究在汤药“一人一方”基础上，对该方进行提取工艺规范化研究，开发成与汤液等效的扶正屏风合剂，便于临床使用和质量控制[13]。扶正屏风合剂的研发过程，体现中医“治未病”思想，中医药在“疫病”防治中应早；对素体偏虚、易于外感的人群服用扶正屏风合剂实现《黄帝内经》“正气存内、邪不可干”的目的，体现中医“扶正祛邪”思想和“关口前移、截断扭转”的治病理念；扶正屏风合剂方的形成是在中医学理论防治疫病的探索和经验总结，应对呼吸传染病防治中医药尽早介入的新思路。

由于中药本身所含化学成分复杂，加之复方配伍过程中又有新物质产生[14]，用某一成分或组分难以代表药效，而复方中药的药效是各组成分协同作用的体现[15]，现发现扶正屏风合剂处方药味中主要活性成分有槲皮素、山柰酚、汉黄芩素、苍术酮、茅苍术醇、连翘苷A等84个[4，16-17]，药效物质具有综合整体性特征[18]，从中医整体观出发，本研究选干膏率为评价指标，因干膏量代表全成分浓缩体，体现多成分原则[4]，选干膏率合理可行。通过实验研究，优选煎煮提取工艺为煮前先浸泡30 min，煎煮提取2次，每次加8倍量水，每次45 min，与汤药对照合剂体现高浓度小剂量的特色。

研究中对质量控制采用薄层色谱方法，选取的指标均是主要药效成分。经过多次试验筛选，苍术、白术同科属近原植物，药效成分相似相互干扰无法检出[19]，选择黄芪、连翘中特有指标成分黄芪甲苷[20]、连翘苷[21]，防风鉴别指标选择防风对照药材[22]，实验建立的薄层色谱条件专属性强，重现性好，能控制合剂质量。

但由于扶正屏风合剂为复方，其中药化学成方的复杂性，目前难以用单个或某个药效物质解释全方药理作用机制，仅用概括性的干膏率参照评价，评价指标的模糊性难以阐述药效机制为不足，后期将继续不断在累积临床疗效数据基础上，开展多指标多通道多靶点药效作用机制研究，用现代分析和统计技术制订多批次标准汤药多成分评价标准，用标准汤药一致的合剂质量标准解释药效指导临床安全用药，避免制订的质量指标与疗效相脱节。

综上所述，中药是防病治病的物质基础，离不开中医理论指导和实践检验。中医临床验方开发，必须始终遵行中医理论指导，制订的制剂工艺质量标准直接关乎临床疗效，利用色谱技术用已知成分的量做参考，峰面积大小量化未知物质的相对含量，实现多指标成分控制制剂质量，对映中药多靶点途径阐述药效物质基础，现有指纹图谱分析技术的选择，可再现质量指标与中医临床疗效统一。