浅析小鼠胆道阻塞后的病程及病理变化

蔡露露

摘要：通过胆总管结扎术（BDL）构建小鼠胆管阻塞模型，观察胆囊、胆管及肝脏等病理变化，并模拟临床胆道阻塞病程变化。取体重26～28g健康雄性ICR小鼠48只，随机均分为BDL手术组和假手术组，通过术中和术后2d、1w、2w、4w取材两组模型观察其生理状态和肝脏、胆囊、胆管的外观形态变化，并以HE染色来检测肝脏的病理变化。ICR小鼠以实施结扎胆总管手术造成了梗阻性黄疸，其肝脏和胆囊的病理变化规律与人类相似，造模的时间短，是研究梗阻性黄疸病理生理机能和治疗方案的可靠有效实验模型。

关键词：胆道阻塞;黄疸;胆总管结扎;病程;病理变化

因为大鼠对黄疸带来的危害相对不敏感，对黄疸的耐受能力时间长，有利于观察肝硬化的变化过程，有利于了解各项指标的变化情况，同时也相对比较经济且操作简单方便[1]。为此，过去阻塞性黄疸（即梗阻性胆道）实验动物模型通常采用大鼠，而大鼠在正常生理结构上不具有胆囊，不符合正常生理结构，且造模时间较长，因而现在通常改用小鼠造模，探究胆总管的充盈变化、胆囊和肝脏的病理变化，观察各个指标的变化，为临床提供参考依据。

1  关于材料、用具与方法

1.1  材料

ICR小鼠，雄性，26～28g，清洁级，总共48只。适应性饲养一周。

中性树脂，75%酒精及各浓度酒精溶液，4%水合氯醛，阿托品，10%福尔马林，二甲苯溶液，苏木素，伊红等。

1.2  工具

电剪，常用手术器械，小鼠手术台，手术缝合针，手术缝合线，载玻片，打火机。

1.3  仪器

手术显微镜，体视显微镜，脱水机，包埋机，烘片机，轮转切片机。

1.4  方法

（1）模型建立

用于实验的小鼠，术前先禁食6h，然后在其腹腔注射4%水合氯醛（0.1ml/g）予以麻醉。在麻醉生效之后对小鼠进行保定，术部用电剪剃毛并消毒。在小鼠腹部中央打开腹腔，用生理盐水蘸湿的棉签小心地分开十二指肠和肝叶，将胆总管予以游离之后进行缝合结扎;假手术组对胆总管安排游离但不结扎。术后以白炽灯提升其体表温度，尽快恢复正常体温，直到小鼠活动自如。2h之后可饮水，6h之后可让其自主进食。

（2）生理形态学观察

先观察其精神、食欲、术部的皮肤情况和皮毛光泽等;等手术开腹后，观察肝脏的形状大小、形态结构、肝部色泽等。

（3）取材及石蜡标本制作

开腹后，小心取下整个肝组织，在冰上用0.9%氯化钠溶液冲洗干净，再用棉签小心地分离各肝叶，小心完整地取下最大的肝叶组织放入福尔马林中予以固定。2d后，通过脱水机对固定好的肝组织进行脱水蜡化，然后制作成石蜡组织标本储存。

（4）HE染色观察图示

石蜡组织标本切片，厚度0.4μm，于40℃温水里展开，并附着在载玻片上，接着放于60℃烤片1h，使切片完全地附着在载玻片上。染色前，将烤好的切片浸泡于二甲苯溶液中脱蜡，再分别浸泡于由高浓度到低浓度的各种酒精，最后入蒸馏水。然后进行切片的HE染色、无水酒精脱水、二甲苯透明，最后再封片。在显微镜下观察切片的组织结构并拍照，记录实验结果。如下图：

切片 → 展开 → 烤片 → 脱蜡水化 → 染色 → 脱水 → 透明 → 封片

2  观察实验结果

2.1  术中术后反应

手术过程BDL手术组和假手术组均未出现死亡情况。进行BDL手术组的小鼠，其尿液在术后1d开始变黄，2d耳朵、肛门位和尾巴渐变黄且食欲下降;1w耳朵、肛门位和尾巴全部变黄，腹部皮肤也变黄且眼睛出现大量眼屎，精神不佳，食欲较2d时进一步下降且体重减轻;2w全身黄染，精神萎靡，生理活动弱，体重进一步下降;4w持续黄染，精神和食欲不佳，毛发枯燥散乱无光泽。假手术组，其皮毛发亮，食欲良好，精神佳，无嗜睡等不良现象。

2.2  肝脏标本的外观

术后2d，BDL手术组近端胆总管囊性扩张肿胀，胆囊变大，肝脏肿大色暗;1w见胆囊严重肿胀，结扎处胆管肿胀如黄豆大，肝脏深红色出现白色针尖状坏死点;2w胆囊较一周前无变化，胆管肿胀如弹珠大，肝脏变黑，白色坏死点增多变大;4w见胆囊液体较稠，胆管肿胀缩小，肝脏硬化成黄白色，边缘钝圆。假手術组术后小鼠腹腔内肝脏等各器官均正常。

2.3  胆道阻塞后肝组织的病理变化

借助术后小鼠肝组织切片的HE染色来观察肝组织病理变化。BDL手术组：术后2d，观察发现小鼠肝组织HE染色，其大部分肝细胞依然正常，少数肿大，排列有所紊乱，出现少数坏死灶及少数炎性细胞;术后1w，肝小叶结构模糊，细胞紊乱，出现损伤，肝细胞初现坏死灶，坏死面积逐渐增大，同时带有大量炎性细胞出现，如染红色嗜酸性粒细胞;术后2w，肝细胞损伤加重，无法分辨肝小叶结构，肝细胞坏死增多，坏死灶面积继续增大，坏死点增多;术后4w，肝细胞大部分坏死，结构紊乱，坏死灶大量增加。假手术组：术后其肝组织HE染色，未出现任何变化，其肝小叶形态也显示正常，肝细胞完整无损。

3  结论与小结

小鼠胆总管结扎后，小鼠胆道阻塞后的病程及病理变化见下图：

参考文献

[1] 岳劼.实验鼠胆道结扎后血清胆红素变化的全程观察[D].山西医科大学，2009.